Tlr9的新型合成性激动剂的利记博彩app
【专利说明】TLR9的新型合成性激动剂
[0001] 本申请是申请日为2008年7月31日，申请号为201210311690. 3,名称为"TLR9的 新型合成性激动剂"的发明专利分案申请的分案申请。
[0002] 相关申请
[0003] 本申请要求2007年8月1日提交的美国临时专利申请流水号60/953, 251 ;2007 年10月30日提交的美国临时专利申请流水号60/983, 601 ;2007年11月12日提交的美国 临时专利申请流水号60/987, 151 ;和2007年12月20日提交的美国临时专利申请流水号 61/015, 292的权益，通过述及将其完整内容收入本文。 发明领域
[0004] 本发明涉及对于调控Toll样受体（TLR)介导的免疫应答有用的合成的化学组合 物。具体而言，本发明涉及产生独特的细胞因子和趋化因子谱（profile)的Toll样受体 9(TLR9)激动剂。
[0005] 发明背景
[0006] Toll样受体（TLR)存在于免疫系统的许多细胞上，而且已经显示出牵涉先天 性免疫应答（Hornung，V.等（2002)J.Immunol.168:4531-4537)。在脊椎动物中，这个 家族由称作TLRl至TLRll的11种蛋白质组成，已知它们识别来自细菌、真菌、寄生物、 和病毒的病原体相关分子样式（molecular patterns) (Poltorak, a.等（1998)Science 282:2085-2088 ;Underhill，D.M.等（1999)Nature401:811-815;Hayashi，F.等（2001) Nature 410:1099-1103 ;Zhang，D.等（2004)Science 303:1522-1526 ;Meier, A.等（2003) Cell. Microbiol. 5:561-570 ;Campos，M. A.等（2001) J. Immunol. 167:416-423 ;Hoebe，K.等 (2003) Nature 424:743-748 ;Lund，J. (2003)J.Exp.Med. 198:513-520 ;Heil，F.等（2004) Science303:1526-1529 ;Diebold，S.S.等（2004) Science 303:1529-1531 ;Hornung，V.等 (2004) J. Immunol. 173:5935-5943)。
[0007] TLR是脊椎动物识别外来分子和对外来分子发动免疫应答的关键手段， 而且还提供了联系先天性和适应性免疫应答的手段（Akira，S.等（2001) Nature Immunol. 2:675-680 ;Medzhitov，R. (2001) Nature Rev. Immunol. 1:135-145)。有些 TLR 位 于细胞表面上以检测胞外病原体和对胞外病原体启动应答，而其它TLR位于细胞内以检测 胞内病原体和对胞内病原体启动应答。
[0008] 已知TLR9识别细菌DNA中的和合成寡核苷酸中的未甲基化CpG基序（Hemmi，H. 等（2000) Nature 408:740-745)。含CpG的硫代磷酸酯寡核苷酸的其它修饰也能影 响它们作为经由TLR9之免疫应答的调控物起作用的能力（参见例如Zhao等（1996) Biochem. Pharmacol. 51:173-182 ；Zhao 等(1996)Biochem Pharmacol. 52:1537-1544 ； Zhao 等（1997)Antisense Nucleic Acid Drug Dev. 7:495-502 ;Zhao 等（1999)Bioorg. Med. Chem. Lett. 9: 3453-3458 ;Zhao 等（2000) Bioorg. Med. Chem. Lett. 10:1051-1054 ; Yu，D.等（2000) Bioorg. Med. Chem. Lett. 10:2585-2588 ;Yu，D.等（2001) Bioorg. Med. Chem.Lett. 11:2263-2267;及 Kandimalla，E.等（2001)Bioorg.Med.Chem.9:807-813)。 天然存在的TLR9激动剂已经显示出产生抗肿瘤活性（例如肿瘤生长和血管发生），导致 有效的抗癌应答（例如抗白血病）（Smith, J.B·和 Wickstrom, E. (1998) J. Natl. Cancer Inst. 90:1146-1154)。另外，TLR9激动剂已经显示出与其它已知的抗肿瘤化合物（例如西 妥昔单抗（cetuximab)、伊立替康（irinotecan))协同工作（Vincenzo，D.等（2006)Clin. Cancer Res. 12(2):577-583)。
[0009] 某些TLR9激动剂由含有核心CpR二核苷酸的3' -3'连接的DNA结构构成，其中 R为经修饰的鸟苷（美国专利号7, 276, 489)。另外，特定的化学修饰容许制备特定的寡核 苷酸类似物，它们对免疫应答产生的相异的调控。具体而言，结构活性相关性研究容许鉴定 合成基序（motif)和新的基于DNA的化合物，其产生对免疫应答的特定的调控，而且这些调 控与由未甲基化的CpG二核苷酸所产生的调控是相异的（Kandimalla，E.等（2005)Proc. Natl. Acad. Sci.U S A 102:6925-6930 ;Kandimalla，E.等（2003) Proc.Nat. Acad. Sci. U S A100:14303-14308 ;Cong，Y.等（2003)Biochem Biophys Res. Commun. 310:1133-1139; Kandimalla, E.等(2003)Biochem. Biophys. Res. Commun. 306:948-953 ；Kandimalla, E.等 (2003) Nucleic Acids Res. 31:2393-2400 ;Yu，D.等（2003) Bioorg. Med. Chem. 11:459-464; Bhagat，L.等（2003)Biochem. Biophys. Res. Commun. 300:853-861 ;Yu，D.等（2002) Nucleic Acids Res. 30:4460-4469 ;Yu，D.等（2002) J. Med. Chem. 45:4540-4548 ;Yu，D.等 (2002)Biochem. Biophys. Res. Commun. 297:83-90 ;Kandimalla.E.等（2002)Bioconjug. Chem. 13:966-974 ;Yu，D.等（2002) Nucleic Acids Res. 30:1613-1619 ;Yu，D.等（2001) Bioorg. Med. Chem. 9:2803-2808 ;Yu，D.等（2001) Bioorg. Med. Chem. Lett. 11:2263-2267 ; Kandimalla，E.等（2001)Bioorg. Med. Chem. 9:807-813 ;Yu，D.等（2000)Bioorg. Med. Chem. Lett. 10:2585-2588 ;Putta，M.等（2006)Nucleic Acids Res. 34:3231-3238)。
[0010] 发明人出人意料地发现，独特地修饰核心CpR二核苷酸侧翼序列、核苷酸之间的 连接或连接寡核苷酸的接头产生新的TLR9激动剂，其在体外和在体内产生相异的细胞因 子和趋化因子谱。这种对含CpR的寡核苷酸"定制调节"(custom-tune)细胞因子和趋化因 子应答的能力提供以疾病特异性的和甚至患者特异性的方式预防和/或治疗各种疾病状 况的能力。如此，需要新的寡核苷酸类似物化合物来提供此类受到定制调节的应答。
[0011] 发明概述
[0012] 本发明提供了新的基于寡核苷酸的化合物，它们各自作为激动剂与TLR9相互作 用而分别提供相异的（distinct)免疫应答谱（profile)。依照本发明的TLR9激动剂的特征 在于特定的（specific)和独特的（unique)化学修饰，其提供了它们相异的（distinctive) 免疫应答激活谱。
[0013] 依照本发明的TLR9激动剂在多种细胞类型中且在多种体外和体内实验模型中诱 导免疫应答，其中各种激动剂提供相异的免疫应答谱。依照本发明的TLR9激动剂单独、或 与其它药物联合或共施用，或作为用作疫苗的抗原的佐剂，用在预防和/或治疗各种疾病 中。因此，它们作为用于研究免疫系统以及用于比较各种动物物种（诸如人和小鼠）的免 疫系统的工具是有用的。
[0014] 如此，在第一个方面，本发明提供了 TLR9的基于寡核苷酸的激动剂（"化合物"）。
[0015] 在第二个方面，本发明提供了包含依照本发明的基于寡核苷酸的TRL9激动剂和 药学可接受载体的药物配制剂。
[0016] 在第三个方面，本发明提供了疫苗。依照这个方面的疫苗包含依照本发明的药物 配制剂且进一步包含抗原。
[0017] 在第四个方面，本发明提供了用于在个体中产生TLR9介导的免疫应答的方法，此 类方法包括对个体施用依照本发明的化合物、药物配制剂或疫苗。
[0018] 在第五个方面，本发明提供了用于治疗性处理患有疾病或病症的患者的方法，此 类方法包括对患者施用依照本发明的化合物、药物配制剂或疫苗。
[0019] 在第六个方面，本发明提供了用于预防疾病或病症的方法，包括对患者施用依照 本发明的化合物、药物配制剂或疫苗。
[0020] 本发明可由下述段落描述：1. 一种免疫调控化合物，其选自化合物No.l至 No.169。
[0021] 2. -种组合物，其包含依照段1的免疫调控化合物和生理学可接受的载体。
[0022] 3.在个体中产生免疫应答的方法，包括对个体施用药学有效量的依照段1的化合 物。
[0023] 4.用于治疗性处理患有受益于免疫应答调控的疾病或病症的个体的方法，包括对 个体施用药学有效量的依照段1的化合物。
[0024] 5.依照段4的方法，其中所述疾病或病症是癌症、自身免疫性病症、气道炎症、炎 性病症、传染病、皮肤病症、变态反应、哮喘或由病原体或变应原引起的疾病。
[0025] 6.依照段4的方法，进一步包括施用一种或多种化疗化合物、靶向治疗剂、疫苗、 抗原、抗体、细胞毒剂、变应原、抗生素、反义寡核苷酸、TLR激动剂、激酶抑制剂、肽、蛋白质、 DNA疫苗、佐剂、共刺激分子或其组合。
[0026] 7.用于预防性处理患有受益于免疫应答调控的疾病或病症的个体的方法，包括对 个体施用药学有效量的依照段1的化合物。
[0027] 8.依照段7的方法，其中所述疾病或病症是个体中的癌症、自身免疫性病症、气道 炎症、炎性病症、传染病、皮肤病症、变态反应、哮喘或由病原体或变应原引起的疾病。
[0028] 9.依照段7的方法，进一步包括施用一种或多种化疗化合物、靶向治疗剂、疫苗、 抗原、抗体、细胞毒剂、变应原、抗生素、反义寡核苷酸、TLR激动剂、激酶抑制剂、肽、蛋白质、 DNA疫苗、佐剂、共刺激分子或其组合。
[0029] 附图简述
[0030] 图1是本发明免疫调控化合物的线性合成的合成方案。DMTr = 4, 4' -二甲氧基 三苯甲基；CE =氰乙基。
[0031] 图2是本发明免疫调控化合物的平行合成的合成方案。DMTr = 4, 4' -二甲氧基 三苯甲基；CE =氰乙基。
[0032] 图3A-3C描绘了依照下文实施例2培养、处理和分析的表达TLR9的HEK293细胞 中的NF- κ B活性。简言之，将HEK293细胞用10 μ g/ml依照本发明的免疫调控寡核苷酸刺 激18小时，并使用SEAP (分泌型人胚胎碱性磷酸酶）测定法测定NF- κ B水平。
[0033] 图3D-3G描绘了依照下文实施例2培养、处理和分析的表达TLR9的HEK293细胞 中的 NF-κ B 活性。将 HEK293 细胞用 0 (PBS/培养基）、0· 1、0· 3、L 0、3· 0、或 10. 0 μ g/ml 依 照本发明的免疫调控寡核苷酸刺激18小时，并使用SEAP (分泌型人胚胎碱性磷酸酶）测定 法测定NF-κ B水平。图3A-3G更一般地证明了施用依照本发明的含有新