一种功能性双歧杆菌培养基的利记博彩app
【技术领域】
[0001] 本发明涉生物技术领域，具体是指一种功能性双歧杆菌培养基。
【背景技术】
[0002] 双歧杆菌是人和动物肠道的重要生理性有益菌，已见报道的双歧杆菌的生理功能 包括：调整肠道菌群，防止便秘，降低结肠癌的发病率，产生抗菌素，增强免疫系统，提高蛋 白质和维生素代谢，缓解乳糖不耐症，治疗肝损伤，抗肿瘤，降低胆固醇等。随着双歧杆菌有 益研究有益健康研究结果的不断积累以及现代人对健康饮食要求的不断提高，国内外正在 掀起研制开发含双歧杆菌食品、保健品、药品的热潮。
[0003] 双歧杆菌属专性厌氧菌，对氧非常敏感，对低PH的抵抗力差，对营养要求苛刻，活 性保持比较困难，另外双歧杆菌制品到消费者饮用时活菌数必须大于l〇6CFU/ml才能发挥 保健功能，因此在研制开发中，如何在短的培养时间内提高活菌数目，是培养基的关键技 术。而现有的双歧杆菌培养基的培养方法在原有工艺基础上有一定发展，但是很难形成大 规模生产。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于：提供一种功能性双歧杆菌培养基，以商品化产品作为培养基 成分，解决现有双歧杆菌培养基制备繁琐，活菌数低的问题，在提高活菌数的同时，稳定生 广，提尚广量。
[0005] 本发明技术方案的具体内容为：一种功能性双歧杆菌培养基，所述发酵培养基的 成分和含量为：蛋白胨4. 5-5. 5g/l，牛肉膏4. 5-5. 5g/l，胰蛋白胨9. 5 -10. 5g/l，酵母浸 出粉 4. 5 - 5. 5g/l，葡萄糖 9. 5 -10. 5g/l，吐温-80 0· 8 - I. 0ml/l，K2HP04l. 5 - 2. 5g/l，乙 酸钠 4. 5 - 5. 5g/l，柠檬酸氢二铵 L 5 - 2. 5g/l，ZnSO4 · 7H20 0· 20 - 0· 30g/l，MgSO4 · 7H20 0.05 - 0· 15g/l，0.5%低聚果糖，1% CaC03。
[0006] 进一步地，为了更好的实现本发明，还包括以下技术特征，所述培养基的成分和含 量为：蛋白胨4. 5g/l，牛肉膏4. 5g/l，胰蛋白胨9. 5g/l，酵母浸出粉4. 5g/l，葡萄糖9. 5g/ 1，吐温-80 0· 8ml/l，K2HPO4L 5g/l，乙酸钠 4. 5g/l，柠檬酸氢二铵 I. 5g/l，ZnSO4 · 7H20 0.2(^/1，]\%504.7!1200.058/1，0.5%低聚果糖，1%〇&0) 3。
[0007] 进一步地，为了更好的实现本发明，还包括以下技术特征，所述培养基的成分 和含量为：蛋白胨5. Og/Ι，牛肉膏5. Og/Ι，胰蛋白胨10.0 g/Ι，酵母浸出粉5. Og/Ι，葡萄 糖 10.0g/l，吐温-80 l.Oml/l，K2HPO4LOg/!,乙酸钠 5.0g/l，柠檬酸氢二铵 2.0g/l， ZnSO4 · 7H20 0· 25g/l，MgSO4 · 7Η200· 10g/l，0. 5%低聚果糖，1% CaC03。
[0008] 进一步地，为了更好的实现本发明，还包括以下技术特征，所述培养基的成分和 含量为：蛋白胨5. 5g/l，牛肉膏5. 5g/l，胰蛋白胨10. 5g/l，酵母浸出粉5. 5g/l，葡萄糖 10. 5g/l，吐温-801. 5ml/l，K2HP04l. 5g/l，乙酸钠 5. 5g/l，柠檬酸氢二铵 2. 5g/l，ZnS04 ·7Η20 0· 30g/l，MgS04 · 7Η200· 15g/l，0. 5%低聚果糖，1% CaC03。
[0009] 具体实验方法为：
[0010] 培养基1:蛋白胨5.0g，牛肉膏5.0g，胰蛋白胨lO.Og，胰浸出粉5.0g，葡萄糖 10. 〇g，吐温-801. 0ml，Κ2ΗΡ042· 0g，乙酸钠 5. 0g，柠檬酸氢二铵 2. 0g，ZnSO4 · 7Η200· 25g， MgSO4 · 7Η200· lg，加蒸馏水至 1000ml。
[0011] 培养基2大豆胰蛋白胨16. 7g，酪蛋白胨8. 3g，乳糖10g，酵母浸出粉5g，加蒸馏水 至 1000 ml0
[0012] 培养基3酪蛋白胨10g，酵母浸出粉2. 5g，葡萄糖5g，大豆蛋白胨5g，吐 温-801.0ml，L-半胱氨酸盐酸盐0. 5g，混合盐溶液5ml，蒸馏水995ml，混合盐溶液： Κ2ΗΡ0420· 0g，MgCL2 · 6H20 5. 0g，ZnS04 · 7H20 2. 5g，CaCl2L 5g，Fecl2O. 5g，加蒸馏水至 100mLo
[0013] 脱脂牛乳培养基以脱脂牛乳粉制复原乳，全乳固体含量为12. 5%，PH自然。
[0014] 仪器与设备
[0015] 高压蒸汽消毒器，生产厂家：上海医用核子武器厂；DELTA320ph计，生产厂家：梅 特勒-托利多仪器有限公司；UV-120-02型分光光度计，生产厂家：日本岛津公司；YQX-ii 型厌氧培养箱，生产厂家：上海跃进医疗器械厂。
[0016] 具体实验步骤为：
[0017] 菌种活化
[0018] 选用培养基3活化保藏菌种，37°C厌氧培养，按5%接种量接种，所有实验菌种使 用前均进行2次活化，第一次活化培养48h，第二次活化培养24h。
[0019] 活菌数的测定
[0020] 采用稀释涂布法，菌液以10倍梯度稀释，选取10 6, 10 7稀释梯度，用涂布棒涂布域 培养基3上，厌氧培养48h后计算菌落数目。平板培养计数法按国际GB/T4789. 2-2003进 行。
[0021] 菌落PH测定
[0022] 用梅特勒-托利多DELTA320ph计，在室温下测定培养一定时间菌液的PH。
[0023] 培养基比较实验
[0024] 将第二次活化菌种按5%接种量，分别接入培养基1、培养基2、培养基3,脱脂牛乳 4种培养基，37摄氏度厌氧培养30h，进行活化计数。
[0025] 培养基的优化
[0026] 采用正交试验L9(34)在培养基1基础上，优化培养基碳源、增殖因子的用量和PH 调节方法，使用磷酸缓冲盐法进行PH内调节时原培养基的磷酸盐不加，因素水平表1如 下：
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[0028] 生长曲线的测定
[0029] 菌种活化扩培后，以5%接种量分别接种于优化最佳培养基和培养基1中，37摄氏 度厌氧培养 48h，分别于 0、4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48h 取样，用 UV-120-02 型 分光光度计在600nm条件下比色，测定菌液的吸光度。以培养时间为横坐标，吸光度为纵坐 标，绘制生长曲线。
[0030] 培养基比较实验
[0031] 4种培养基培养双歧杆菌结果见表2,由表2可知，培养基1中所产的双歧杆菌活 菌数最高。表3方差分析表明，4种培养基培养双歧杆菌差异极显著。应用q检验法进行多 重比较结果见表4。由表4可知，培养基1与其他3中培养基差异显著，培养基2和培养基 3脱脂乳也差异显著。
[0032] 表2 4种培养基培养双歧杆菌结果
[0034] 表3 4种培养基培养双歧杆菌菌数的方差分析
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[0039] 培养基的优化结果：在培养基1的基础上，通过添加低聚糖、改变碳源、采用PH内 源调节方