法，来提高双歧杆菌活菌数，采用正交试验设计优化双歧杆菌培养基。正交试验结 果如表5所示。三种因素对活菌数指标的影响顺序是PH的内源调节>碳源>低聚果糖，可 知，最优组合为A3B1C3。正交试验方差分析结果表明，三个因素对产量的影响并不显著。本 例试验误差大，且误差自由度小，检验的灵敏度低，从而掩盖了考察因素的显著性。
[0040] 表5培养基成分优化正交试验结果
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[0043] 以最优化水平组合A3B1C3为优化最佳培养基于培养基1分别接入5 %长双歧杆菌 菌液，37°C厌氧培养，在0-48h内每间隔4h测定菌液的吸光度和PH，绘制生长曲线和ph变 化曲线最佳培养基和培养基1相比，没有明显的迟滞期，达到最高菌数的时间大约提前了 4h。在培养24h内最佳培养基比培养基1的PH下降稍快，可能是双歧杆菌菌数多因产酸多 所致。由长双歧杆菌在优化最佳培养基中的生长曲线和Ph变化曲线可以确定发酵终止时 间为20h，此时通过平板菌落数计数，平均菌落数在8. 9X109CFU/ml，培养基1培养长双歧杆 菌24h，平板菌落计数，平均菌落数在I. lxl09CFU/ml，最佳培养基较培养1双歧杆菌活菌数 提高约8. 1倍。
[0044] 本发明与现有技术相比，具有以下优点及有益效果：
[0045] 选优化培养基可实现双歧杆菌高密度培养，在提高菌密度的同时，还可以减少培 养容器的体积，培养基的消耗和提高下游工程中分离提取效率，缩短生产周期，减少各种投 入和降低生产成本，因此这项工作对开发利用好双歧杆菌有重要的实践价值。
【具体实施方式】
[0046] 下面结合实施例对本发明作进一步地详细说明，但本发明的实施方式不限于此。
[0047] 实施例1 :
[0048] 本实施例提供一种功能性双歧杆菌培养基，所述培养基的成分和含量为：蛋白胨 4. 5g/l，牛肉膏4. 5g/l，胰蛋白胨9. 5g/l，酵母浸出粉4. 5g/l，葡萄糖9. 5g/l，吐温-80 0· 8ml/l，K2HPO4L 5g/l，乙酸钠 4. 5g/l，柠檬酸氢二铵 I. 5g/l，ZnSO4 · 7H20 0· 20g/l， MgSO4. 7H20 0.05g/l，0.5%低聚果糖，1% CaC03。
[0049] 实施例2 :
[0050] 本实施例提供一种功能性双歧杆菌培养基，所述培养基的成分和含量为：蛋白胨 5. Og/Ι，牛肉膏5. Og/Ι，胰蛋白胨10.0 g/Ι，酵母浸出粉5. Og/Ι，葡萄糖10.0 g/Ι，吐温-80 1.0 ml/1，K2HPO4L Og/Ι，乙酸钠 5. Og/Ι，柠檬酸氢二铵 2. Og/1，ZnSO4 · 7H20 0· 25g/l， MgSO4 · 7H20 0· 10g/l，0. 5%低聚果糖，1% CaC03。
[0051] 实施例3:
[0052] 本实施例提供一种功能性双歧杆菌培养基，所述培养基的成分和含量为：蛋白 胨5. 5g/l，牛肉膏5. 5g/l，胰蛋白胨10. 5g/l，酵母浸出粉5. 5g/l，葡萄糖10. 5g/l，吐 温-801. 5ml/l，K2HP04l. 5g/l，乙酸钠 5. 5g/l，柠檬酸氢二铵 2. 5g/l，ZnS04 ·7Η20 0· 30g/l， MgSO4 · 7H20 0· 15g/l，0. 5%低聚果糖，1% CaC03。
[0053] 实施例4 :
[0054] 本实施例提供一种功能性双歧杆菌培养基，所述培养基的成分和含量为：蛋白胨 5. 2g/l，牛肉膏4. 8g/l，胰蛋白胨10.0 g/Ι，酵母浸出粉5. Og/Ι，葡萄糖9. 8g/l，吐温-80 0· 9ml/l，Κ2ΗΡ042· Og/Ι，乙酸钠 5. Og/Ι，柠檬酸氢二铵 2. Og/1，ZnSO4 · 7H20 0· 25g/l， MgSO4 · 7H20 0· 10g/l，0. 5%低聚果糖，1% CaC03。
[0055] 以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明做任何形式上的限制，凡是依 据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化，均落入本发明的保护 范围之内。
【主权项】
1. 一种功能性双歧杆菌培养基，其特征在于，所述培养基的成分和含量为：蛋白胨 4. 5 - 5. 5g/l，牛肉膏4. 5 - 5. 5g/l，胰蛋白胨9. 5 -10. 5g/l，酵母浸出粉4. 5 - 5. 5g/l，葡 萄糖9. 5 -10. 5g/l，吐温-80 0? 8 - I. 0ml/l，K2HP04 1. 5-2. 5g/l，乙酸钠4. 5-5. 5g/l，柠 檬酸氢二铵1. 5 - 2. 5g/l，ZnSO4 ? 7H20 0? 20-0. 30g/l，MgS04 ? 7H20 0? 05-0. 15g/l，0. 5% 低聚果糖，l%CaC03。2. 根据权利要求I所述的一种功能性双歧杆菌培养基，其特征在于：所述培养基的成 分和含量为：蛋白胨4. 5g/l，牛肉膏4. 5g/l，胰蛋白胨9. 5g/l，酵母浸出粉4. 5g/l，葡萄糖 9. 5g/l，吐温-80 0? 8ml/l，K2HP04l. 5g/l，乙酸钠 4. 5g/l，柠檬酸氢二铵I. 5g/l，ZnS04.7H20 0? 20g/l，MgSO4 ? 7H20 0? 05g/l，0. 5% 低聚果糖，l%CaC03。3. 根据权利要求I所述的一种功能性双歧杆菌培养基，其特征在于：所述培养基的 成分和含量为：蛋白胨5.Og/1，牛肉膏5.Og/1，胰蛋白胨10.Og/1，酵母浸出粉5.Og/1，葡 萄糖 10.Og/1，吐温-80I.Oml/1，K2HPO4I.Og/1，乙酸钠 5.Og/1，柠檬酸氢二铵 2.Og/1， ZnSO4 ? 7H20 0? 25g/l，MgS04 ? 7H20 0? 10g/l，0. 5% 低聚果糖，l%CaC03。4. 根据权利要求I所述的一种功能性双歧杆菌培养基，其特征在于：所述发酵培养基 的成分和含量为：蛋白胨5. 5g/l，牛肉膏5. 5g/l，胰蛋白胨10. 5g/l，酵母浸出粉5. 5g/l， 葡萄糖 10. 5g/l，吐温-801. 5ml/l，K2HPO4I. 5g/l，乙酸钠 5. 5g/l，梓檬酸氢二铵 2. 5g/l， ZnSO4 ? 7H20 0? 30g/l，MgSO4 ? 7H20 0? 15g/l，0. 5% 低聚果糖，l%CaC03。
【专利摘要】本发明公开了一种功能性双歧杆菌培养基，所述培养基的成分和含量为：蛋白胨4.5-5.5g/l，牛肉膏4.5-5.5g/l，胰蛋白胨9.5-10.5g/l，酵母浸出粉4.5-5.5g/l，葡萄糖9.5-10.5g/l，吐温-80？0.8-1.0ml/l，K2HPO41.5-2.5g/l，乙酸钠4.5-5.5g/l，柠檬酸氢二铵1.5-2.5g/l，ZnSO4·7H2O0.20-0.30g/l，MgSO4·7H2O0.05-0.15g/l，0.5%低聚果糖，1%CaCO3。本发明培养基可有效减少培养容器的体积，缩短生产周期，降低生产成本，对开发利用双歧杆菌有重要的实践价值。
【IPC分类】C12N1/20, C12R1/01
【公开号】CN105176863
【申请号】
【发明人】周洁
【申请人】成都易创思生物科技有限公司
【公开日】2015年12月23日
【申请日】2015年8月11日