述 方面和本发明的其他方面将是明显的。
【附图说明】
[0042] 图1示出PCV疫苗免疫小鼠后血清稀释倍数的结果。
[0043] 图2示出不同⑶4T细胞和B细胞表位组合诱导Tfh的频率。
[0044] 图3示出不同⑶4T细胞和B细胞表位组合诱导Tfh的数量。
【具体实施方式】
[0045] 除非特别说明，本发明的术语具有本领域通常使用的含义。
[0046] 表位可以分类为B细胞型、T细胞型或B细胞型和T细胞型两者，取决于它们引起 的免疫应答的类型。B细胞或T细胞表位的定义不是明确的；例如，一种肽表位能够诱导抗 体产生，但同时该表位能够具有一种序列，该序列能够结合于人HLA分子，使得它容易到达 CTL，因此对于该特定表位为双B细胞和T细胞分类。"T辅助细胞"或"Tfh"是在被特异性 抗原刺激时释放促进B细胞和杀伤T细胞的活化和功能的细胞因子的任何T细胞。
[0047] "氨基酸"是指化合物，其具有氨基基团和羧酸基团，优选是在碳骨架上的1，2-取 代、1，3-取代或1，4-取代模式。a -氨基酸是最优选的，且包括在蛋白中发现的20种天 然氨基酸（它们是L-氨基酸，除了甘氨酸）、相应的D-氨基酸、相应的N-甲基氨基酸、侧 链修饰的氨基酸、没有在蛋白中发现的生物合成获得的氨基酸（例如4-羟基-脯氨酸、 5-羟基-赖氨酸、瓜氨酸、鸟氨酸、刀豆氨酸、黎豆氨酸、P -氰基丙氨酸）、以及合成衍生的 a _氨基酸（例如氨基异丁酸、正亮氨酸、正缬氨酸、同型半胱氨酸和同型丝氨酸）。丙氨酸 和Y-氨基丁酸分别是1，3-氨基酸和1，4-氨基酸的例子，且许多其它氨基酸在本领域是公 知的。抑胃酶氨酸样等构物（包括两个氨基酸的二肽，其中CONH键被CHOH置换）、羟基亚 乙基等构物（包括两个氨基酸的二肽，其中CONH键被CHOHCH 2置换）、还原的酰胺等构物 (包括两个氨基酸的二肽，其中CONH键被CH2NH键置换）和硫代酰胺等构物（包括两个氨 基酸的二肽，其中CONH键被CSNH键置换）也是本发明有用的氨基酸残基。用于本发明的 氨基酸是可商业获得或者可通过常规合成方法获得的氨基酸。
[0048] "置换"是指由不同的氨基酸或核苷酸置换一个或多个氨基酸或核苷酸。
[0049] "缺失"是指在氨基酸序列或核苷酸序列中一个或多个氨基酸或核苷酸的缺失。
[0050] "插入"或"添加"是指在氨基酸序列或核苷酸序列中的改变导致与天然存在或改 变前的分子相比，一个或多个氨基酸或核苷酸的增加。
[0051] "置换、缺失和/或添加一个或多个氨基酸"则是指，利用定位诱变法等公知的突变 核酸或多肽的制作法置换、缺失和/或添加能够置换、缺失和/或添加的程度的数目的氨基 酸或核苷酸。上述突变不限于利用已知的定点突变法而人为诱导的突变，也可以是对天然 存在的核酸或蛋白质的突变进行分离纯化而得到的。对氨基酸的突变可以包含有一个或多 个氨基酸残基为构象为D-型的氨基酸，自然界存在的稀有氨基酸或人工修饰的氨基酸，这 些氨基酸可以是也可以不是由遗传密码子编码的。与此相类似的，诱导核酸发生突变，可以 包括自然界天然存在的核苷酸，也可以包括具有修饰的核苷酸。
[0052] 本领域技术人员已知的氨基酸的保守替代是在本发明的范围内。保守氨基酸替代 包括一个氨基酸用另一个具有相同类型官能团或侧链例如脂肪族、芳族、带正电、带负电的 氨基酸置换。这些替代可以增强口服生物利用度、渗透到中枢神经系统、靶向特异性细胞群 体等。本领域技术人员知晓，在编码序列中改变、增加或删除单个氨基酸或小百分率的氨基 酸的对肽、多肽或蛋白序列的个别替代、删除或增加是"保守修饰变体"，其中改变导致了氨 基酸用化学类似的氨基酸替代。例如，以下六组各自含有用于彼此保守替代的氨基酸：1) 丙氨酸（A)、丝氨酸（S)、苏氨酸（T) ;2)天冬氨酸（D)、谷氨酸（E) ;3)天冬酰胺（N)、谷胺 酰胺（Q) ;4)精氨酸（R)、赖氨酸（K) ;5)异亮氨酸（I)、亮氨酸（L)、甲硫氨酸（M)、缴氨酸 (V) ;以及6)苯丙氨酸（F)、酪氨酸（Y)、色氨酸（W)。提供功能上类似的氨基酸的保守替代 方式在本领域中是公知的，其他任何已知的替代方式都是可以的。
[0053] "疏水性氨基酸"是指侧链具有高疏水性的氨基酸，例如蛋氨酸（M)、色氨酸（W)、酪 氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、缬氨酸（V)、亮氨酸（L)、异亮氨酸（I)、脯氨酸（P)和丙氨酸（A)。
[0054] "芳香族氨基酸"是指含有芳香环的氨基酸，例如酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸 (W) 以及甲状腺素。
[0055] "带正电的氨基酸"是指侧链带有正电荷的氨基酸，例如赖氨酸（K)、精氨酸（R)和 组氨酸⑶。
[0056] "多肽"或"氨基酸序列"是指肽、寡肽、多肽或蛋白质及其部分片段，其间以肽键相 连接的氨基酸。当本发明中的"氨基酸序列"涉及一种天然存在的蛋白质分子的氨基酸序 列时，这种"多肽"或"蛋白质"并不意味着将氨基酸序列限制为与所述蛋白质分子相关的 完整的天然氨基酸序列。本发明的氨基酸序列可以含有附加的肽。作为附加的肽，如多组 氨酸标签（His-tag)、或Myc、FLAG等表位标记的肽为例。
[0057] 肽类似物和肽模拟物也包括在本发明的范围内，此外还包括本发明的肽的盐和 酯。根据本发明的肽类似物可任选地包括至少一个非天然氨基酸和/或在C端或N端的至 少一个封闭基团。本发明的肽的盐是生理学上可接受的有机盐和无机盐。适当的"类似物" 的设计可以用计算机辅助。
[0058] "肽模拟物"是指根据本发明的肽以包括至少一个非肽键例如脲键、氨基甲酸酯 键、磺酰胺键、肼键或任何其它共价键的这种方式来修饰。适当的"肽模拟物"的设计可以 用计算机来辅助。
[0059] 本发明的肽的盐和酯包括在本发明的范围内。本发明的肽的盐是生理学上可接受 的有机盐和无机盐。本发明的肽的功能衍生物包括可以通过本领域已知的方式由作为残基 上的侧链或N或C端基团存在的官能团制备的衍生物，并且包括在本发明中，只要它们保持 药学上可接受，即它们不破坏肽的活性且不赋予含有它的组合物以毒性。这些衍生物例如 包括羧基的脂肪族的酯、通过与氨或伯胺或仲胺反应所产生的羧基的酰胺、通过与酰基部 分（例如烷酰基或碳环芳酰基）反应形成的氨基酸残基的游离氨基的N-酰基衍生物或通 过与酰基部分反应形成的游离羟基（例如丝氨酰基或苏氨酰基残基）的〇-酰基衍生物。
[0060] "多核苷酸"、"核酸序列"或"碱基序列"是指核苷酸、寡核苷酸或多核苷酸及其片 段或部分。本发明的核酸能够以RNA(例如，mRNA)的形态、或DNA的形态（例如，cDNA或 基因组DNA)存在。DNA可以是双链，也可以是单链。单链DNA或RNA可以是编码链（有义 链）、或非编码链（反义链）中任一种。另外，本发明的多核苷酸也可以在其5'端或3'端 融合编码标签标记（标签序列或标记物序列）的多核苷酸。它们可以是合成的或是从天然 来源获得的（例如，分离和/或纯化），其可以包含天然的、非天然的或者修饰过的核苷酸， 并且其可以包含天然的、非天然的或改变的核苷酸之间的键，诸如氨基磷酸酯键或硫代磷 酸酯键，用来代替在未修饰的寡核苷酸中核苷酸之间存在的磷酸二酯键。
[0061] "分离的"一词是指将物质从它原始的环境（例如，若是自然产生的就指其天然环 境）分离出来。比如说，一个自然产生的多核苷酸或多肽存在于活动物中就是没有被分离 出来，而同样的多核苷酸或多肽同一些或全部在自然系统中与之共存的物质分开就是分离 的。这样的多核苷酸或多肽可以是某一载体的一部分，也可以是某一组合物的一部分。既 然载体和组合物不是它的天然环境的成分，它们仍然是分离的。
[0062] "核酸杂交"在本领域已公知（参见，例如，Sambrook等，Molecular Cloning :A Laboratory Manual，3rd Ed.，Cold Spring Harbor Laboratory，2001)。通常，温度越高， 盐浓度越低，则严谨性变得越高（难以杂交），从而能够取得更加相同的多核苷酸。适合的 杂交温度根据碱基序列或其碱基序列的长度而异。另外，本发明还涉及在"严格条件"下杂 交。本发明中，"严格条件"是指，在较低离子强度和较高温度下的杂交和洗脱，例如，42°C的 条件下、在（50%甲酰胺、5XSSC(150mM NaCl、15mM柠檬酸三钠）、50mM的磷酸钠（pH 7. 6)、 5 X Denhardt溶液、10 %硫酸葡聚糖、和20 y g/mL的变性剪切鲑鱼精子DNA)中孵育过夜，然 后在65°C条件下用0.1 X SSC洗脱。
[0063]本发明的疫苗包括多肽或包含多肽的重组融合蛋白和任选的佐剂。所述疫苗可以 被配制用于以多种不同方式之一施用。根据本发明的一个实施方案，所述疫苗鼻内施用。所 述疫苗制剂可以任何便利的方式应用到淋巴组织。然而，优选将它作为液流或液滴应用到 鼻通道的壁上。鼻内组合物能够例如以液体形式配制为滴鼻剂、喷雾剂，或者适合于吸入， 配制为粉剂、霜剂或乳剂。该组合物能够含有多种添加剂，例如佐剂、赋形剂、稳定剂、缓冲 剂或防腐剂。
[0064]为了简单应用，所述疫苗优选在适于以滴鼻剂或气溶胶的形式分布所述多肽或重 组融合蛋白的容器中供应。在某些优选实施方案中，所述疫苗被配制用于粘膜递送，尤其鼻 部递送（Arnon 等，Biologicals (生物制品）? 2001 ;29 (3-4) : 237-42 ;Ben_Yedidia 等，Int Immunol.(国际免疫学）1999 ; 11 (7) : 1043-51)。
[0065]在本发明的一个实施例中，可通过喷雾、气雾剂或滴眼