沉淀剂溶液引入通路；向蛋白质样品进样口注入蛋白质样品溶液，向沉淀剂进样口注入不同的沉淀剂溶液，使得各通路充满溶液；
[0076]然后，将上转板旋转至起凹槽I位置，固定下底板和上转板，储存蛋白质样品的微腔与储存沉淀剂的微腔相连，形成若干个适合结晶的密闭反应腔，各反应腔中分别具有不同的结晶条件，包括沉淀剂种类、蛋白质样品与沉淀剂比例(即蛋白质样品的浓度)和结晶速率，所述蛋白质结晶反应的反应温度为4°C或25°C。间隔一定时间后对结晶芯片中各结晶反应腔内的结晶情况进行观察，确认是否有结晶出现，以此筛选结晶条件或决定是否要对结晶条件进行一步优化。
[0077]再是，如发现微腔中存在蛋白质沉淀或微晶体，需要对结晶条件进行一步优化，则将上转板旋转至起凹槽II位置，固定下底板和上转板，蛋白质样品浓度调节孔、蛋白质样品浓度调节通道与结晶反应腔接通；向蛋白质样品浓度调节孔中加入超纯水，以密封盖密封蛋白质样品浓度调节孔，超纯水的化学势偏高，超纯水扩散至结晶反应腔中，沉淀或微晶体全部溶解；
[0078]最后，将上转板旋转至起凹槽I位置，固定下底板和上转板，使结晶反应腔与蛋白质样品浓度调节通道分离，结晶反应腔再次呈密闭状态，由于水溶液的扩散，在结晶反应腔中，整个反应体系的溶液浓度降低，使得蛋白质样品溶液趋于过饱和状态的进程放慢，即蛋白质结晶速率进行变慢，让获得更大体积且晶形更加完整的蛋白质晶体成为可能。
[0079]所述固定下底板和上转板的方法为，在上转板的上方配置转动环，所述转动环为在一圆环上固定四根垂直圆环面的细针，在上转板上开设相应的针孔，在下底板上分别三个旋转位置开设相应定位孔。
[0080]以上所述为本发明的较佳实施例而已，但本发明不应该局限于该实施例所公开的内容。所以凡是不脱离本发明所公开的精神下完成的等效或修改，都落入本发明保护的范围。
【主权项】
1.一种蛋白质样品结晶筛选方法，其特征在于:该筛选方法采用玻璃材质的筛选器；所述筛选器包括相互贴合的下底板(2)和上转板(1)，上转板(I)呈圆形，可绕圆心作包括指定三个角度的旋转，在下底板(2)的上贴合面上开设各种开口向下的凹槽流道、微腔，在上转板(I)的下贴合面上开设各种开口向上的凹槽流道、微腔，以及一些进、出口通孔，所述的凹槽流道、微腔可由化学蚀刻方式开设，且均为微米级； 所述上转板(I)旋转三个角度之一，起始点凹槽(17)位置: 所述下底板(2)和上转板(I)上开设的凹槽流道、微腔，以圆心为中心，呈幅射状排列L个形状相同的扇形单元(3)，每个扇形单元由中心向周边分割为M个径向小单元(4)，每个径向小单元⑷又由N个微单元(5)组成； 所述扇形单元(3)的左右两侧分别开设从圆心向圆周走向的蛋白质进样通道(14)和从圆周至圆心的沉淀剂进样通道(7);所述通道俯视呈首尾相接的S字形，分别有与周向方向一致MXN个横式的蛋白质微腔(6)和沉淀剂微腔(13)，每对蛋白质微腔(6)和沉淀剂微腔(13)位于同一直径处，交替在微腔左右两侧有与径向方向一致的引入流道； 将蛋白质样品进样口(8)设于圆心处，将蛋白质样品出样口(9)设于圆周边；另一侧通道的沉淀剂进样口(10)设于圆周边，沉淀剂出样口(11)位于圆心处；两个进口和两个出口均位于上转板⑴且为通孔；当一侧通道的微腔位于下底板⑵上，则该微腔两侧的引入流道位于上转板(I)上，在该位置上、下板上的凹槽相互流通；此时，另一侧通道的微腔位于上转板(I)上，该微腔两侧的引入流道位于下底板(2)上，上、下板上的凹槽也相互流通，构成蛋白质进样通道(14)和沉淀剂进样通道(7); 每个扇形单元中的蛋白质微腔￠)随所处位置半径增大体积不变，但径向宽度变小、弧长变长；各径向小单元(4)的沉淀剂微腔(13)随所处位置半径增大按一定关系变大；所述上转板(I)旋转三个角度之二，继续旋转进入滑动控制点凹槽I (18): 所述扇形单元两侧通道的微腔与引入流道错位，凹槽相互阻断，此时，各组的蛋白质微腔(6)和沉淀剂微腔(13)在弧长上有部分重合形成密闭的结晶反应腔； 在此位置，选择部分相邻两个结晶反应腔为一组，在该组两结晶反应腔之间的下底板(2)上开设径向的蛋白质浓度调节通道(15)，所述蛋白质浓度调节通道(15)径向两端与两结晶反应腔之间留有h距离，相邻两结晶反应腔位于上转板(I)的微腔，在位于蛋白质浓度调节通道(15)的旋转上游位置各相向伸出一段衔接流道，衔接流道的长度大于等于h，在位于两衔接流道之间开设蛋白质浓度调节孔(12)，该孔为通孔，通孔外表备有密封盖； 所述上转板(I)旋转三个角度之三，继续旋转进入滑动控制点凹槽II (19): 两衔接流道与蛋白质浓度调节通道(15)径向接通，所述蛋白质浓度调节孔(12)位于蛋白质浓度调节通道(15)的上方； 其筛选方法为: (A)、将上转板旋转至起始点凹槽位置，固定下底板和上转板，形成蛋白质样品溶液引入通路和沉淀剂溶液引入通路；向蛋白质样品进样口注入蛋白质样品溶液，向沉淀剂进样口注入沉淀剂溶液，使得各通路充满溶液； (B)、将上转板旋转至起凹槽I位置，固定下底板和上转板，微腔与引入流道错位，储存蛋白质样品的微腔与储存沉淀剂的微腔相连，形成若干个适合结晶的密闭反应腔，反应腔内进行结晶反应； (C)、确认反应腔中是否有结晶出现，如出现结晶，则筛选结果完成；如步骤(B)中的某个反应腔中出现沉淀或具有多个微小的晶体，需重新结晶，继续转动上转板； (D)、将上转板旋转至起凹槽II位置，固定下底板和上转板，蛋白质样品浓度调节孔、蛋白质样品浓度调节通道与结晶反应腔接通；向蛋白质样品浓度调节孔中加入超纯水，以密封盖密封蛋白质样品浓度调节孔，超纯水扩散至结晶反应腔中，沉淀或微晶体全部溶解； (E)、将上转板旋转至起凹槽I位置，固定下底板和上转板，使结晶反应腔与蛋白质样品浓度调节通道分离，结晶反应腔再次呈密闭状态，结晶反应腔中进行结晶反应； (F)、确认反应腔中是否有结晶出现，如出现结晶，则筛选结果完成；如步骤(E)中的某个反应腔中出现沉淀或具有多个微小的晶体，需重新结晶，重复步骤(D)和(F)。2.根据权利要求1所述蛋白质样品结晶筛选方法，其特征在于:所述步骤(A)中，不同的沉淀剂进样口可注入不同的沉淀剂溶液，形成多因素交叉筛选。3.根据权利要求1所述蛋白质样品结晶筛选方法，其特征在于:所述蛋白质结晶反应的反应温度为4°C或25°C。4.根据权利要求1所述蛋白质样品结晶筛选方法，其特征在于:所述扇形单元中M个径向小单元(4)沉淀剂微腔(13)的容积之比为一等比数列。5.根据权利要求3所述蛋白质样品结晶筛选方法，其特征在于:所述M为5，5个沉淀剂微腔(13)的容积之比，随所处位置半径变小依次为4:2:1:0.5:0.25。6.根据权利要求1所述蛋白质样品结晶筛选方法，其特征在于:所述固定下底板和上转板的方法为，在上转板的上方配置转动环，所述转动环为在一圆环上固定四根垂直圆环面的细针，在上转板上开设相应的针孔，在下底板上分别三个旋转位置开设相应定位孔。7.根据权利要求1所述蛋白质样品结晶筛选方法，其特征在于:所述步骤(C)中的密封盖为透明的密封胶带。
【专利摘要】本发明属于生物技术领域，具体涉及一种蛋白质样品结晶筛选方法，首先将上转板旋转，形成蛋白质样品溶液引入通路和沉淀剂溶液引入通路；注入蛋白质样品溶液和沉淀剂溶液；继续转动，储存蛋白质样品的微腔与储存沉淀剂的微腔相连，形成反应腔进行结晶反应；如发现微腔中存在蛋白质沉淀或微晶体，将上转板继续旋转，蛋白质样品浓度调节孔、蛋白质样品浓度调节通道与结晶反应腔接通，向蛋白质样品浓度调节孔中加入超纯水，待沉淀或微晶体全部溶解，再进行结晶反应。本筛选方法通过定量加样及不同模式的检测，可有效对多种沉淀剂的种类、结晶时间、蛋白质样品和沉淀剂比例众多参数进行组合筛选，而且降低了实验成本。
【IPC分类】C07K1/30
【公开号】CN105175484
【申请号】
【发明人】王锡昌, 周婷婷, 张炜佳, 姚鑫远, 付豪
【申请人】上海海洋大学
【公开日】2015年12月23日
【申请日】2015年10月8日...