一种蛋白质样品结晶筛选方法_2

文档序号:8957982阅读:来源:国知局
在下底板上分别三个旋转位置开设相应定位孔。
[0035]所述密封盖为透明的密封胶带。可更直观的观察蛋白质的结晶情况。
[0036]本发明的蛋白质样品结晶筛选器的材质选用玻璃,当成功结晶后,晶体无需取出即可完成X-射线衍射试验,大大降低了晶体在取出和贮存过程中损耗和破坏的几率。
[0037]与现有技术相比,本发明的有益效果在于:
[0038]1、本发明的蛋白质样品结晶筛选方法使低得率或是珍贵样品的结晶成为可能,大大节约了样品和试剂的消耗量,降低了实验成本。
[0039]2、本发明的蛋白质样品结晶筛选方法可有效对多种沉淀剂的种类、结晶时间、蛋白质样品和沉淀剂比例众多参数进行组合筛选,且可对蛋白质微腔中出现的沉淀或微晶体实现原位结晶条件优化操作。
[0040]3、所述筛选方法可以有效筛选参数的可行范围,提高了结晶试验的效率。
【附图说明】
[0041]图1为本发明蛋白质样品结晶筛选器一实施例,上转板的结构示意图,呈现了MXN个横式的蛋白质微腔/沉淀剂微腔及交替在沉淀剂微腔/蛋白质微腔左右两侧各MXN个与径向方向一致间断的引入流道。
[0042]图2为本发明蛋白质样品结晶筛选器一实施例,下底板的结构示意图,呈现了MXN个横式的沉淀剂微腔/蛋白质微腔及交替在蛋白质微腔/沉淀剂微腔左右两侧各MXN个与径向方向一致间断的引入流道。
[0043]图3为本发明一实施例上转板旋转三个角度之一,起始点凹槽位置的结构示意图,形成完整的呈首尾相接的S字形,构成扇形单元左右两侧分别从圆心向圆周走向的蛋白质进样通道和从圆周向圆心走向的沉淀剂进样通道。
[0044]图4为本发明一实施例上转板旋转三个角度之二,继续旋转进入滑动控制点凹槽I的结构示意图,显示扇形单元两侧通道的微腔与引入流道错位,凹槽相互阻断,各组的蛋白质微腔和沉淀剂微腔在弧长上有部分重合形成密闭的结晶反应腔。
[0045]图5为图4中显示一个扇形单元的结构示意图。
[0046]图6为图3的局部放大图。
[0047]图7为图4的局部放大图。
[0048]图8为本发明一实施例上转板旋转三个角度之三,继续旋转进入滑动控制点凹槽II的结构示意图,显示相邻两个结晶反应腔的两衔接流道与蛋白质浓度调节通道径向接通,所述蛋白质浓度调节孔位于蛋白质浓度调节通道的上方。
[0049]图9为发明一实施例,转动环部件的立体示意图。
[0050]图中,I为上转板,2为下底板,3为扇形单元,4为小单元,5为微单元,6为蛋白质微腔,7为沉淀剂进样通道,8为蛋白质样品进样口,9为蛋白质样品出样口,10为沉淀剂进样口,11为沉淀剂出样口,12为蛋白质浓度调节孔,13为沉淀剂微腔,14为蛋白质进样通道,15为蛋白质浓度调节通道,16为孔槽,17为起始点凹槽,18为滑动控制点凹槽I,19为滑动控制点凹槽II。
【具体实施方式】
[0051]下面结合实施例,对本发明作进一步说明:
[0052]根据图1 -图9所示,本实施例中的蛋白质样品结晶筛选方法采用玻璃材质的筛选器,
[0053]所述筛选器的相互贴合的下底板2和上转板1,上转板I呈圆形,可绕圆心作包括指定三个角度的旋转,在下底板2的上贴合面上开设各种开口向下的凹槽流道、微腔,在上转板I的下贴合面上开设各种开口向上的凹槽流道、微腔,以及一些进、出口通孔,所述的凹槽流道、微腔可由化学蚀刻方式开设,且均为微米级;
[0054]所述上转板I旋转三个角度之一,起始点凹槽17位置:
[0055]所述下底板2和上转板I上开设的凹槽流道、微腔,以圆心为中心,呈幅射状排列L个形状相同的扇形单元3,每个扇形单元由中心向周边分割为M个径向小单元4,每个径向小单元4又由N个微单元5组成;
[0056]所述扇形单元的左右两侧分别开设从圆心向圆周走向的蛋白质进样通道和从圆周至圆心的沉淀剂进样通道;
[0057]所述通道俯视呈首尾相接的S字形,分别有与周向方向一致MXN个横式的蛋白质微腔6和沉淀剂微腔13,每对蛋白质微腔6和沉淀剂微腔13位于同一直径处,交替在微腔左右两侧有与径向方向一致的引入流道;
[0058]将蛋白质样品进样口 8设于圆心处,将蛋白质样品出样口 9设于圆周边;另一侧通道的沉淀剂进样口 10设于圆周边,沉淀剂出样口 11位于圆心处,这样的设计易于操作,而沉淀剂的流向方向相反,是考虑到整个板的压力平衡。两个进口和两个出口均位于上转板I且为通孔;当一侧通道的微腔位于下底板2上,则该微腔两侧的引入流道位于上转板I上,在该位置上、下板上的凹槽相互流通;此时,另一侧通道的微腔位于上转板I上,该微腔两侧的引入流道位于下底板2上,上、下板上的凹槽也相互流通,构成蛋白质进样通道14和沉淀剂进样通道7 ;
[0059]每个扇形单元中的蛋白质微腔6随所处位置半径增大体积不变,但径向宽度变小、弧长变长;各径向小单元4的沉淀剂微腔13随所处位置半径增大按一定关系变大;
[0060]所述上转板I旋转三个角度之二,继续旋转进入滑动控制点凹槽I 18:
[0061]所述扇形单元两侧通道的微腔与引入流道错位,凹槽相互阻断,此时,各组的蛋白质微腔6和沉淀剂微腔13在弧长上有部分重合形成密闭的结晶反应腔;
[0062]在此位置,选择部分相邻两个结晶反应腔为一组,在该组两结晶反应腔之间的下底板2上开设径向的蛋白质浓度调节通道15,所述蛋白质浓度调节通道15径向两端与两结晶反应腔之间留有h距离,相邻两结晶反应腔位于上转板I的微腔,在位于蛋白质浓度调节通道15的旋转上游位置各相向伸出一段衔接流道,衔接流道的长度大于等于h,在位于两衔接流道之间开设蛋白质浓度调节孔12,该孔为通孔,通孔外表备有密封胶带;
[0063]所述上转板I旋转三个角度之三,如发现微腔中存在蛋白质沉淀或微晶体,继续旋转进入滑动控制点凹槽II 19:
[0064]两衔接流道与蛋白质浓度调节通道15径向接通,所述蛋白质浓度调节孔12位于蛋白质浓度调节通道15的上方。此时,向蛋白质浓度调节孔12滴加超纯水,将备用的密封胶带封住蛋白质浓度调节孔12,直到微腔中的蛋白质沉淀或微晶体溶解,将上转板I逆向旋转进入滑动控制点凹槽I 18,对微腔中的蛋白质重新结晶。一方面可以对有限的样品重复利用,另一方面是在原有反应体系基础上降低组分浓度,增加了获得较大体积晶体的成功率。
[0065]在所述上转板I的上方配置转动环,所述转动环为在一圆环上固定四根垂直圆环面的细针,在上转板I上开设相应的针孔,在下底板2上分别三个旋转位置开设相应定位孔。
[0066]所述扇形单元3的左右两侧分别开设从圆心向圆周走向的蛋白质进样通道14和从圆周至圆心的沉淀剂进样通道7。
[0067]所述扇形单元中M个径向小单元4沉淀剂微腔13的容积之比为一等比数列。所述M为5,5个沉淀剂微腔13的容积之比,随所处位置半径变小依次为4:2:1:0.5:0.25。实现了沉淀剂和蛋白质样品按一定浓度梯度排列,即蛋白质样品的浓度按一定浓度排列,能够尽快在及其繁多的试验条件中锁定、筛选出可靠的蛋白质样品浓度范围。
[0068]所述下底板2和上转板I为相同直径的圆板玻璃,直径为2.5?5厘米。
[0069]所述蛋白质进样通道14和沉淀剂进样通道7的进口和出口直径为0.25?0.5毫米,所述蛋白质浓度调节孔12直径为0.25?0.5毫米。
[0070]每个径向小单元4中沉淀剂微腔13的容积相同。
[0071]所述L = 8 ?15、M = 4 ?8、N = 4 ?8。
[0072]所述L 为 10。
[0073]本实施例中对10种沉淀剂、5个体积比例、6个平衡时间(结晶速率),即300个参数组合进行筛选,有效地实现了批量筛选过程,大大降低了试验操作强度。
[0074]本发明的蛋白质样品结晶筛选方法为,
[0075]首先,将上转板旋转至起始点凹槽位置,固定下底板和上转板,形成蛋白质样品溶液引入通路和
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