一种新的克罗烷型二萜化合物及其制备方法和医药用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物技术领域，具体涉及从千金子的干燥成熟种子中分离得到的一种 具有治疗人神经胶质瘤作用的克罗烷型二萜化合物及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 千金子亦称千两金、菩萨豆、续随子、联步、滩板救，为大戟科植物续随子EuphorbialathyrisL的干燥成熟种子，是我国传统中药材之一。千金子性温，味辛，具有 逐水消肿、破癥杀虫之功，用于水肿胀满、痰饮、宿滞、癥瘕积聚、妇女闭经、疥癣疮毒、蛇咬、 疣赘。在我国主要生长于河北、河南、浙江，此外四川、辽宁、吉林、湖南、广西等地亦产。国 外则主要广泛分布于中欧、南欧、俄国南部、南美、北美及澳大利亚。
[0003] 综合文献报道，千金子含有47 %~50 %的脂肪油，15 %的蛋白质，还主要含有甾 醇、二萜酯及游离的二萜醇、香豆素类及其他化合物。
[0004] 现在研究表明千金子具有抗肿瘤作用、抗菌作用、致泻作用、镇静催眠及镇痛抗炎 作用、抑制黑色素生成作用等。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种从千金子的干燥成熟种子中分离得到的一种具有治疗 人神经胶质瘤作用的克罗烷型二萜化合物及其制备方法。
[0006] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0007] 具有下述结构式的化合物（I)，
[0008]
[0009] 所述的化合物（I)的制备方法，包含以下操作步骤：(a)千金子的干燥成熟种子 粉碎，用75~85%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯 和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步 骤（a)中乙酸乙酯萃取物用大孔树脂除杂，先用10%乙醇洗脱8个柱体积，再用75%乙醇 洗脱12个柱体积，收集75 %乙醇洗脱液，减压浓缩得75 %乙醇洗脱物浸膏；（c)步骤（b)中 75 %乙醇洗脱物浸膏用正相硅胶分离，依次用体积比为80:1、50:1、30:1、15:1和1:1的二 氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到5个组分；（d)步骤（c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次 用体积比为20:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤（d)中 组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为75%的甲醇水溶液等度洗 脱，收集8~10个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物（I )。
[0010] 进一步地，步骤（a)中，用80%乙醇热回流提取，合并提取液。
[0011] 进一步地，所述大孔树脂为AB-8型大孔吸附树脂。
[0012] -种药物组合物，该药物组合物含有治疗有效量的权利要求1所述的化合物（I ) 和药学上可接受的载体。
[0013] 所述的化合物（I )在制备治疗人神经胶质瘤的药物中的应用。
[0014] 所述的药物组合物在制备治疗人神经胶质瘤的药物中的应用。
[0015] 本发明化合物用作药物时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。
[0016] 该药物组合物含有治疗有效量的本发明化合物（I )，其余为药物学上可接受的、 对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。
[0017] 所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料 以及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本发明药物可 通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控 释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等；用于注射时，可制成灭菌的 水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。
【附图说明】
[0018] 图1为化合物（I )结构式；
[0019] 图2为化合物（I )理论E⑶值与实验E⑶值比较。
【具体实施方式】
[0020] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0021] 实施例1 :化合物（I )分离制备及结构确证
[0022] 试剂来源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷为分析纯，购自上海凌峰化 学试剂有限公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。
[0023] 制备方法：（a)将千金子的干燥成熟种子（8kg)粉碎，用80%乙醇热回流提取 (25LX3次），合并提取液，浓缩至无醇味（3L)，依次用石油醚（3LX3次）、乙酸乙酯（3LX3 次）和水饱和的正丁醇（3LX3次）萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物（363g) 和正丁醇萃取物；(b)步骤（a)中乙酸乙酯萃取物用AB-8型大孔树脂除杂，先用10%乙醇 洗脱8个柱体积，再用75 %乙醇洗脱12个柱体积，收集75 %乙醇洗脱液，减压浓缩得75% 乙醇洗脱物浸膏（145g) ; (c)步骤（b)中75%乙醇洗脱浸膏用正相硅胶分离，依次用体积 比为80:1 (8个柱体积）、50:1 (8个柱体积）、30:1 (6个柱体积）、15:1 (8个柱体积）和1:1 (5 个柱体积）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到5个组分；（d)步骤（c)中组分4 (47g)用正相 硅胶进一步分离，依次用体积比为20:1 (8个柱体积）、15:1 (10个柱体积）和5: U6个柱体 积）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤（d)中组分2 (26g)用十八烷基硅 烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为75%的甲醇水溶液等度洗脱，收集8-10个柱体 积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物（I )(39mg)。
[0024] 结构确证：HR-ES頂S显示[M+Na]+为m/z 379. 1212,结合核磁特征可得分子式 为(：2。氏。06，不饱和度为11。核磁共振氢谱数据8>_，01^0-(1 6,5001^):11-1(5.84，111)， H-2 (5. 85, m)，H-3 (1. 97, m)，H-3 (2. 23, ddd，J = 15. 0,6. 0,4. 0)，H-4 (2. 98, dd，J = 12. 0， 6. 0)，H-6 (2. 73, dt，J = 14. 0,4. 0)，H-6 (I. 53, dddd，J = 14. 0,14. 0,4. 0, 2. 0)，H-7 (I. 69， ddd，J = 13. 5,13. 5,4. 0)，H-7(2. 19, m)，96, m)，51，dd，J = 15. 0,9. 0)， H-12(5. 55，t，J = 9. 0)，H-14(6. 54，dd，J = I. 5,0. 5)，H-15(7. 28，t，J = I. 5)，H-16(7. 30， br，d，J = 0? 5)，H-19(4. 25, d，J = 8. 5)，H-19(4. 39, dd，J = 8. 5,2. 0)，H-20(l. 01，s); 核磁共振碳谱数据 Sc(ppm，DMS0-d6，125MHz) :130.6(CH，1-C)，131.0(CH，2-C)，21.5(CH2， 3-C)，40. 9 (CH，4-C)，47. I (C，5-C)，21. 2 (CH2,6-C)，25. 7 (CH2, 7-C)，72. 7 (C，8-C)，48. 2 (C， 9-C)，74. 8 (C，10-C)，33. I (CH2,11-C)，72. 9 (CH，12-C)，128. 3 (C，13-C)，109. I (CH，14-C)， 143. 6 (CH，15-C)，140. 4 (CH，16-C)，172. 5 (C，17-C)，177. 8 (C，18-C)，73. 4 (CH2, 19-C)， 19. 3(CH3,20-C);碳原子标记参见图1。IR光谱表明该化合物含有羟基（3470cm1)，y-和 S-内酯（1761和1735cm1)以及呋喃环（877cm1)基团。 13CNMR谱显示有20个信号，含有 一个甲基，五个亚甲基（一个含氧），八个次甲基（五个烯烃碳，一个含氧碳）和七个季碳 (两个羰基碳，一个烯烃碳，两个含氧碳）。 13CNMR谱显示乙烯基碳信号S C130. 6和131.0， 表明该化合物含有双键。HMBC谱中，H-1(SH5. 84)和H-2(SH5. 85)与C-3(SC21.5)和 C-4( S C40. 9)的相关性，以及H-I与H-2的交叉峰证实了双键位于C-I和C-2位。核磁 数据表明该化合物含有氧杂环丁烷结构（S C72. 7, C-8 ;48. 2, C-9和S C74. 8, C-10)，甲 基（S HL 01，s ; S C19. 3, CH3-20)和呋喃环（S H6. 54, H-14 ; S H7. 28, H-15 ; S H7. 30， H-16)。NOESY谱中11-16与113-20的相关性表明呋喃环a构型。此外，该化合物还含有 一个 12, 17- S -内酯（S H5. 55，S C72. 9, CH-12 ; S C172. 5, C-17)和一个 18, 19- y -内 酯（S C177. 8, C-18 ; S H4. 25,4. 39，S C73. 4, CH2-19)。NOESY 谱中 H3-20 与 H-19pr。#口 H_19proS，以及H-19prajPH-4的相关性表明y内酯为反式稠合。综合氢谱、碳谱、HMBC谱 和NOESY谱，以及文献关于相关类型核磁数据，可基本确定该化合物如图1所示，立体构型 进一步通过E⑶试验确定，理论值与实验值基本一致（图2)。
[0025] 实施例2 :化合物（I)药理作用试验
[0026] -、材料和仪器
[0027] 人神经胶质瘤细胞株U251购自于上海麦莎生物科技有限公司。实验动物裸鼠，购 自南方医科大学实验动物中心，为4~6周龄的雄性BALB/c，nu/nu小鼠，体质量12~15g。 化合物（I )自制（含量98%以上）。5-氟尿嘧啶购于南通制药厂，胰蛋白酶购于美国 Amresco公司，不完全DMEM培养基购于GibeoBRL公司，胎牛血清购于杭州四季青公司，十二 烷基硫酸钠、乙二胺四乙酸、过硫酸胺、甘油、二甲基亚研J勾于Sigma公司，蛋白酶K(Merka 公司），p-琉基乙醇（广州威佳公司），苯甲基磺酞氟（广州威佳公司），亮抑酶肤（广州威 佳公司），抑蛋白酶肤（广州威佳公司），丙烯酞胺（上海生工生物工程公司），双丙烯酞胺 (上海生工生物工程公司）。
[0028] 光学显微镜（OLYMPUSBxsl，日本），Olympus数码相机（Olympus D70,日本），显微 摄影系统（CoolSNAP-Pro ofmonoehrome，美国），PL 303型电子天平（梅特勒-托利多仪 器有限公司），6219型电子pH计（上海任氏