上述步骤(I)的硅烷偶联剂处理液中，超声分散20min，得到γ -聚谷氨酸I溶液和硅烷偶联剂处理液的混合液；然后每10ml混合液中加入3.0g羟基磷灰石纳米颗粒(其含量多97%，纳米尺经〈lOOnm)，并置于50°C的水浴中搅拌偶联，反应4h，室温静置2h ;以3倍体积的丙酮沉淀产物，再经离心取沉淀，再经过去离子水洗涤，将洗涤后的产物收集、冷冻干燥，即得γ -聚谷氨酸/羟基磷灰石微球粉末；所述的γ -聚谷氨酸氢盐，其制备方法为:将γ -聚谷氨酸钠盐粉末加入到三角瓶中，以4倍(v/w)的去离子水搅拌溶解，然后加入0.8倍(v/w) 37%的盐酸，配成当量浓度为2N的盐酸水溶液，持续室温搅拌直到有产物沉淀时再继续搅拌反应6小时至反应完全，最后利用过滤法收集沉淀产物，并用3?4倍(v/v)的去离子水冲洗数次，冷冻干燥后得到γ -聚谷氨酸氢盐；
[0031](3)将5.0g的上述步骤(2)中的γ -聚谷氨酸/羟基磷灰石微球粉末加入到
2.0g/L lOOmLy-聚谷氨酸溶液II中混合均匀后，逐滴加入甘油三缩水甘油醚，其与γ-聚谷氨酸钠盐的质量之比为1:7.5，均速搅拌，并升温至45°C，使其发生凝胶转变，即可得γ-聚谷氨酸/羟基磷灰石凝胶载体材料，所述的γ-聚谷氨酸钠盐溶液II是通过将γ-聚谷氨酸钠盐粉末溶解在去离子水中所得。
[0032]将血管内皮生长因子(VEGF)溶于PBS磷酸盐缓冲液中，制成浓度为25g/L的水相溶液；在O?4°C的环境中，将Igy-聚谷氨酸/羟基磷灰石凝胶微球载体样品浸泡于50mLVEGF的水相溶液中，将其放入真空干燥箱内，保持真空度0.05MPa，使VEGF溶液在压力作用下扩散进入γ -聚谷氨酸/羟基磷灰石凝胶微球内部，30min后取出，用PBS磷酸盐缓冲液冲洗γ-聚谷氨酸/羟基磷灰石微球，经冷冻干燥得到载有VEGF的γ-聚谷氨酸/羟基磷灰石凝胶微球载体材料。γ-聚谷氨酸/羟基磷灰石凝胶微球载体材料的直径为
3.0um± 0.05um，VEGF在γ -聚谷氨酸/羟基磷灰石微球中的平均装载量为25ug/g。
[0033]实施例3:
[0034]—种γ -聚谷氨酸/羟基磷灰石凝胶微球载体材料，其制备步骤如下:
[0035](I)制备硅烷偶联剂处理液:将水和醇混合均匀形成醇溶液，该醇溶液中水:甲醇的体积比为1:9，然后在10mL醇溶液中加入0.3mL乙二醇二缩水甘油醚预混，再缓慢滴加冰醋酸，调节pH值为4.5?5.0，然后加入氨基硅烷偶联剂(KH-792)，室温下水解30min，即得硅烷偶联剂处理液，所述的硅烷偶联剂的用量是按照硅烷偶联剂:醇溶液的体积比为1:5.5的比例添加，硅烷偶联剂处理液现配现用，一小时之内用完；
[0036](2)制备γ -聚谷氨酸/羟基磷灰石微球粉末:秤量1.0g γ -聚谷氨酸氢盐粉末，超声溶解在200mL无水二甲基亚砜溶液，制备成5g/L的γ -聚谷氨酸I溶液，将10mL的γ -聚谷氨酸I溶液加入到50mL上述步骤(I)的硅烷偶联剂处理液中，超声分散20min，得到γ -聚谷氨酸I溶液和硅烷偶联剂处理液的混合液；然后每10ml混合液中加入4.0g羟基磷灰石纳米颗粒(其含量多97%,纳米尺经〈lOOnm)，并置于80°C的水浴中搅拌偶联，反应6h，室温静置2h ;以2倍体积的丙酮沉淀产物，再经离心取沉淀，再经过去离子水洗涤，将洗涤后的产物收集、冷冻干燥，即得γ -聚谷氨酸/羟基磷灰石微球粉末；
[0037](3)将3.0g的上述步骤(2)中的γ -聚谷氨酸/羟基磷灰石微球粉末加入到5.0g/L2OOmL γ -聚谷氨酸溶液II中混合均匀后，逐滴加入乙二醇二缩水甘油醚，其与γ -聚谷氨酸钠盐的质量之比为1:10，均速搅拌，并升温至60°C，使其发生凝胶转变，即可得γ-聚谷氨酸/羟基磷灰石凝胶载体材料，所述的γ-聚谷氨酸钠盐溶液II是通过将γ-聚谷氨酸钠盐粉末溶解在去离子水中所得。
[0038]将转化生长因子β (TGF- β )溶于PBS磷酸盐缓冲液中，制成浓度为50g/L的水相溶液；在O?4°C的环境中，将Ig γ -聚谷氨酸/羟基磷灰石凝胶微球载体材料样品浸泡于50mLTGF- β的水相溶液中，将其放入真空干燥箱内，保持真空度0.05MPa，使TGF- β溶液在压力作用下扩散进入γ -聚谷氨酸/羟基磷灰石凝胶微球内部，30min后取出，用PBS磷酸盐缓冲液冲洗γ-聚谷氨酸/羟基磷灰石微球，经冷冻干燥得到载有TGF-β的γ-聚谷氨酸/羟基磷灰石凝胶微球载体材料。γ-聚谷氨酸/羟基磷灰石凝胶微球载体材料的直径为2.0um±0.09um，TGF-β在γ -聚谷氨酸/轻基磷灰石凝胶微球载体材料中的平均装载量为 34ug/g。
[0039]实施例4:
[0040]一种γ -聚谷氨酸/羟基磷灰石凝胶微球载体材料，其制备步骤如下:
[0041](I)制备硅烷偶联剂处理液:将水和醇混合均匀形成醇溶液，该醇溶液中水:乙醇的体积比为1:10，然后在10mL醇溶液中加入0.1mL甘油三缩水甘油醚预混，再缓慢滴加冰醋酸，调节pH值为3.0?3.5，然后加入氨基硅烷偶联剂(A-1llO)，室温下水解30min，即得硅烷偶联剂处理液，所述的硅烷偶联剂的用量是按照硅烷偶联剂:醇溶液的体积比为1:6.0的比例添加，硅烷偶联剂处理液现配现用，一小时之内用完；
[0042](2)制备γ -聚谷氨酸/羟基磷灰石微球粉末:秤量1.0g γ -聚谷氨酸氢盐粉末，超声溶解在50mL无水二甲基亚砜溶液，制备成20g/L的γ -聚谷氨酸I溶液，将50mL的γ-聚谷氨酸I溶液加入到10mL上述步骤(I)的硅烷偶联剂处理液中，超声分散20min，得到γ -聚谷氨酸I溶液和硅烷偶联剂处理液的混合液；然后每10ml混合液中加入5.0g羟基磷灰石纳米颗粒(其含量多97%，纳米尺经〈lOOnm)，并置于60°C的水浴中搅拌偶联，反应5h，室温静置2h ;以3倍体积的丙酮沉淀产物，再经离心取沉淀，再经过去离子水洗涤，将洗涤后的产物收集、冷冻干燥，即得γ-聚谷氨酸/羟基磷灰石微球粉末；
[0043](3)将2.0g的上述步骤(2)中的γ -聚谷氨酸/羟基磷灰石微球粉末加入到
4.0g/L100mL γ -聚谷氨酸溶液II中混合均匀后，逐滴加入甘油三缩水甘油醚，其与γ _聚谷氨酸钠盐的质量之比为1:8.0，均速搅拌，并升温至80°C，使其发生凝胶转变，即可得γ-聚谷氨酸/羟基磷灰石凝胶载体材料，所述的γ-聚谷氨酸钠盐溶液II是通过将γ-聚谷氨酸钠盐粉末溶解在去离子水中所得。
[0044]将胰岛素样生长因子(IGF-1)溶于PBS磷酸盐缓冲液中，制成浓度为40g/L的水相溶液；在O?4°C的环境中，将Ig γ -聚谷氨酸/羟基磷灰石凝胶微球载体材料样品浸泡于50mLIGF的水相溶液中，将其放入真空干燥箱内，保持真空度0.05MPa，使IGF溶液在压力作用下扩散进入γ -聚谷氨酸/羟基磷灰石凝胶微球内部，30min后取出，用PBS磷酸盐缓冲液冲洗γ -聚谷氨酸/羟基磷灰石凝胶微球载体材料，经冷冻干燥得到载有IGF的γ -聚谷氨酸/羟基磷灰石凝胶微球载体材料。γ-聚谷氨酸/羟基磷灰石凝胶微球载体材料的直径为4.6um±0.04um，IGF在γ -聚谷氨酸/轻基磷灰石凝胶微球载体材料中的平均装载量为 32ug/g。
【主权项】
1.一种γ -聚谷氨酸/羟基磷灰石凝胶微球载体材料，其特征在于，是通过以下步骤制备的:(I)制备硅烷偶联剂处理液:将水和醇按体积比1:7?10混合均匀形成醇溶液，然后按每10mL醇溶液加入0.1?0.5mL聚缩水甘油醚的量在醇溶液中加入聚缩水甘油醚预混，再加入冰醋酸调节PH值为3.0?5.0，然后加入硅烷偶联剂，溶解后即得到硅烷偶联剂处理液，所述的硅烷偶联剂的用量是按照硅烷偶联剂:醇溶液的体积比为1:4?6的比例添加； (2)制备γ-聚谷氨酸/羟基磷灰石微球粉末:将γ -聚谷氨酸氢盐粉末超声溶解在无水二甲基亚砜溶液，制备成5?20g/L的γ -聚谷氨酸I溶液，按γ -聚谷氨酸I溶液:硅烷偶联剂处理液体积比为1:0.5?2的比例将γ-聚谷氨酸I溶液加入到步骤(I)的硅烷偶联剂处理液中，超声分散，得到γ -聚谷氨酸I溶液和硅烷偶联剂处理液的混合液，每10ml混合液加入1.0?5.0g羟基磷灰石纳米颗粒，并置于40?80°C的水浴中搅拌偶联，反应2?6h，室温静置，再以溶液总体积的2?4倍体积的丙酮沉淀产物，再经离心取沉淀，用去离子水洗涤，将洗涤后的产物收集、冷冻干燥，即得γ -聚谷氨酸/羟基磷灰石微球粉末； (3)称取步骤(2)的γ-聚谷氨酸/羟基磷灰石微球粉末I?5g，并将其加入到1.0?5.0g/L的50?200ml的γ -聚谷氨酸钠盐溶液II中混合均匀后，超声分散，再滴加聚缩水甘油醚，其与γ -聚谷氨酸钠盐的质量之比为1:2.5?10，均速搅拌，并升温至37?80°C，使其发生凝胶转变，即可得γ-聚谷氨酸/羟基磷灰石凝胶微球载体材料，所述的γ_聚谷氨酸钠盐溶液II是通过将γ -聚谷氨酸钠盐粉末溶解在去离子水中所得。2.根据权利要求1所述的γ-聚谷氨酸/羟基磷灰石凝胶微球载体材料，其特征在于，步骤(I)所述的硅烷偶联剂为氨基硅烷偶联剂、环氧基硅烷偶联剂、脲基硅烷偶联剂或异氰酸酯硅烷偶联剂。3.根据权利要求1所述的γ-聚谷氨酸/羟基磷灰石凝胶微球载体材料，其特征在于，步骤(I)所述的醇为乙醇、甲醇或异丙醇。4.根据权利要求1所述的γ-聚谷氨酸/羟基磷灰石凝胶微球载体材料，其特征在于，所述的聚缩水甘油醚为烯丙基缩水甘油醚、甘油三缩水甘油醚、乙二醇二缩水甘油醚、聚乙二醇二缩水甘油醚或聚环氧乙烷山梨醇聚缩水甘油醚及其混合。5.根据权利要求1所述的γ-聚谷氨酸/羟基磷灰石凝胶微球载体材料，其特征在于，所述的轻基磷灰石纳米颗粒，其含量多97%，纳米尺经〈lOOnm。
【专利摘要】本发明公开一种γ-聚谷氨酸/羟基磷灰石凝胶微球载体材料及其制备方法。将硅烷偶联剂处理过的γ-聚谷氨酸与纳米羟基磷灰石相作用，使羟基磷灰石兼有亲水/疏水两亲性基团，并形成凝胶状的微球载体材料。本发明的方法工艺简单，所制得的材料透明乳白色，微观下是凝胶中包裹着微球颗粒，颗粒大小范围为2～5um，该凝胶微球载体材料对药物的承载率高达34ug/g，具有较大承载率、有效成分隔离作用和具有指定释放能力等，将药物或生长因子溶于材料中，可便利地将此微球载体材料作为高效载体进行实际应用。
【IPC分类】A61L27/12, A61L27/18, A61L27/50, A61L27/54
【公开号】CN105169492
【申请号】
【发明人】疏秀林, 施庆珊, 黄小茉
【申请人】广东省微生物研究所
【公开日】2015年12月23日
【申请日】2015年9月7日