牵 牛子1200g，石韦1100g，姜黄1200g，虎杖1200g，牛膝1200g，鸡内金1100g，赤芍1100g，丹 参1200g，陈皮1100g，猪苓1100g，马鞭草1100g，黄芩1200g，半边莲1200g，金银花1100g， 白花蛇舌草1200g，蒲公英1100g。。按照所述份数先将王不留行、姜黄用水蒸气法蒸馏，得 到结晶物，作为组分1备用；取蒸馏后的药渣混合剩余原料加入5-10倍量的60-90%乙醇 浸泡1-2小时，加热提取2次，每次1-2小时，去上清液，合并提取液，80-120目滤过，再经截 流分子量为5000-10000的超滤柱超滤，超滤液减压浓缩相对密度为80°C时1. 36的浸膏， 加热浓缩，30分钟~45分钟，将浓缩液静置成浸膏状，药糊继续加热浓缩至浸膏状，静置备 用，成为组分2 ;将蒸馏提取的组分1和乙醇提取的组分2混合，压片制成片剂。
[0081] 药理学毒性试验
[0082] -、试验材料：
[0083](一）实验动物：小鼠NIH，体重25-28g，雌雄各半；大鼠Wistar体重130-160g，雌 雄各半，大鼠、小鼠的饲料由山东医学院动物实验中心提供。
[0084](二）受试药物：
[0085] 1、本发明药物：实施例2所制的丸剂，三批量等量混合物实验时用蒸馏水稀释应 用。
[0086] 2、阳性对照药物：金匮肾气丸，市售。
[0087] 二、试验方法及结果：
[0088] (1)取体重25_28g的健康小鼠80只，雌、雄各半，按性别和体重分别分成四组，每 组20只。1、2、3组服用本发明药物，剂量分别为8. 6g生药/kg/d，6. 4g生药/kg/d，4. 2g生 药/kg/d，第4组服用阳性对照药金匮肾气丸，剂量为6g生药/kg/d，连用15天。
[0089] 试验结果：1、2、3组小鼠比4组小鼠性兴奋度明显增强，1、2、3组小鼠的交配次数 比4组小鼠的交配次数平均每日增加3次。
[0090] 试验结果表明本发明药物对中枢神经系统有明显的兴奋作用，所以本发明药物对 于调节人体机能平衡、益气、补血、延缓衰老增强新陈代谢，精神疲惫，性机能减退都有治疗 依据。
[0091 ] 本发明动物急性毒性试验
[0092] -、试验材料
[0093] (一）动物小鼠NIH种雌雄各半，体重20_22g，由山东医学院动物实验室提供。
[0094](二）受试药物：本发明所制的口服液，用蒸馏水稀释成混悬液。
[0095]二、试验方法及结果：
[0096]小鼠最大耐受量测定：取健康小鼠32只，雌雄各半，在24小时之内分三组，灌胃肠 每次0. 6ml/只，总重量1. 8ml，相当于原生药4. 0g，SP100g生药/kg/d，相当于临床65公斤 人的857倍。小鼠给药后按常规饲料12天未见动物死亡及未出、现毒性反应。因此证明， 本发明药物无毒副作用，临床应用安全可靠。
[0097] 本发明药物组合物的动物长期毒性试验
[0098] 一、试验材料及方法
[0099] (一）受试药物：本发明实施例所制的口服液剂。
[0100] (二）实验动物，健康大鼠Wistar，体重100-130g，140只雌雄各半，按性别及体重 随机分组，四组，每组35只。1、2、3组服用受试药物，剂量分别为9. 6/kg/d，6. 4/kg/d，3. 2/ kg/d。4组对照给相应体积量的蒸馏水、大鼠均灌胃肠给药，每组一次连用6个月，处死一 半，余下1/2停药观察12天全部死亡。
[0101] 二、测试指标
[0102](一）一般状况包括体重、饮食、情绪、活动能量。
[0103](二）血象检查：红细胞计数、白细胞计数、血小板计数、血象等，血红蛋白定量计 数。
[0104](三）生化检查、血清蛋白定量、胆固醇、血糖定量。
[0105](四）病理组织检查：实验结果后取半数动物称重，断头处死，取血，同时解剖心、 肝、肾、肺、脑、脾、胃肠、膀胱、肾上腺做病理组织检查。
[0106] 三、试验结果：经大鼠长期毒性试验表明，用本发明大剂量灌肠六个月，对大鼠的 生长、体重增加、对脑、肝、肾功能均无毒副作用。对大鼠的各组织器官、循环系统未发现损 害改变，用药组与对照组比较无明显差异。说明本发明药物具有温补肾阳、益气、补血、延缓 衰老增强新陈代谢等药效，无毒性。
[0107]药物与临床实验
[0108] 泌尿系结石是泌尿外科常见病，国内发病率较高。虽然目前已有多种手段应用于 临床治疗，且取得良好效果，如体外冲击波碎石、输尿管镜、经皮肾镜、超声碎石、钬激光碎 石等，但术后结石残留率和结石复发率仍居高不下。国内已有较多关于中药在防治肾结石 方面的报道，本研究拟通过动物实验的方法验证本发明对泌尿系结石的预防作用，现报道 如下。
[0109] 材料与方法
[0110] 1实验材料
[0111] 1. 1实验动物雄性SD大鼠90只，体重180~220g，普通级，购自上海斯莱克实验 动物中心，动物许可证号：SCXK(沪）2007-0005。
[0112] 1. 2实验药物成石液：按每升液体中含乙二醇12. 5g+氯化铵10g配制；本发明中 药，方剂：王不留行15g，金钱草14g，金樱子llg，海金沙12g，冬瓜仁12g，炒牵牛子12g，石 韦12g，姜黄13g，虎杖12g，牛膝12g，鸡内金llg，赤芍llg，丹参12g，陈皮llg，猪苓llg，马 鞭草llg，黄芩12g，半边莲12g，金银花llg，白花蛇舌草12g，蒲公英llg。为煎剂型，均购 自山东青岛。乙二醇购自无锡市佳妮化工厂；氯化铵购自浙江衢州巨化试剂有限公司；枸 橼酸钾购自上海化学试剂采购供应站。
[0113] 1. 3实验仪器离心机、普通光学显微镜、匀浆机、紫外线分光光度计。
[0114] 2动物分组与药物干预将90只大鼠随机分为5组，即阳性对照组（模型组，A组）、 本发明高剂量（B组）、本发明中剂量（C组）、本发明低剂量组（D组）、疗效对照组（枸橼酸 钾组，E组），每组18只，适应性饲养3d。
[0115] 所有动物每天给予成石液10ml(自由摄取）+水30ml(自由摄取）。A组给予生理 盐水，每只动物每天2ml灌胃；B组给予本发明免煎剂，每只动物0. 6g/d;C组给予本发明免 煎剂，每只动物〇. 3g/d;D组给予本发明免煎剂，每只动物0.lg/d;E组给予枸橼酸钾，每只 动物0.5g/d。以上各药均配置成2ml液体灌胃。给药剂量按成人用量计算，见表1。
[0116] 表1动物给药量计算表
[0117]
[0118] 3观察指标和方法
[0119] 饲养4周后，同期取标本。（1)接取尿液，涂片观察尿中草酸钙结晶，每张涂片取5 个高倍视野，取平均值评估。判定标准：(_):高倍视野中未见草酸钙结晶；（<+):〇~10/ HP; (+) :10 ~20/HP; (++) :20 ~30/HP; (+++) :> 30/HP。
[0120] (2)用10%水合氯醛1ml腹腔注射，麻醉大鼠成功后即剖腹取双肾，所有左侧肾固 定后常规切片染色，普通光学显微镜下观察肾草酸钙结晶形成情况。判定标准：(_):高倍 视野中未见草酸钙结晶；（+):肾皮质和髓质内结晶为主，约0~40/HP;(++):肾乳头和肾 盂内结晶为主，约>40/HP。（3)计数平均每个高倍视野内右肾草酸钙结晶数量。方法：取 右肾1/3组织固定后常规切片染色，普通光学显微镜下观察，每张切片观察5个高倍视野计 数草酸钙结晶数量，得平均值。（4)右肾2/3组织称重后，加入lmol/LHCllOml浸泡4h后 用内切式组织匀浆器制备组织匀浆，3OOOr/min离心20min，取上清液用变色酸比色法测 草酸含量。
[0121] 4统计学方法采用SPSS11. 5统计软件包，对于右草酸钙结晶数量和草酸含量指 标，采用均数比较的t-检验；对于尿检和半定量法判定左肾草酸钙结晶情况，采用非参数 检验（秩和检验）的Mann-WhitneyU检验；对于成石率的比较，采用pearsonChi-square 检验。
[0122] 结果
[0123] 1动物存活情况饲养给药过程中，B组和D组各有1只大鼠死亡，故取得实验数据 的共有88只大鼠。
[0124] 2尿中草酸钙结晶检测
[0125] 草酸钙结晶在普通光学显微镜下较易观察，表现为无色方形闪烁发光的八面体， 有2条对角线相互交叉，有时呈现菱形，偶为饼形或哑铃型。检测结果见表2。
[0126] 表2各组半定量法尿中草酸钙结晶检测情况（只）
[0127]
[0128] 由表2可见B、C、D3组尿中草酸钙结晶排泄明显高于A组（阳性对照组），Pb_a= 0. 004 < 0. 01 ;Pc-a= 0. 003 < 0. 01 ;Pd-a= 0. 01 ;尚不能认为E组尿中草酸钙结晶排泄 高于A组Pe_a= 0? 291。
[0129] 3左肾草酸钙结晶检测肾组织切片HE染色后，草酸钙结晶表现为：淡蓝色晶体， 不规则，折光性强。检测结果见表3。
[0130] 表3各组半定量法左肾草酸钙结晶检测情况（只）
[0131]
[0133]由表3可见B、C、D、E4组左肾草酸钙结晶明显少于A组，Pb-a= 0. 008 < 0. 01;Pc-a= 0? 01 ;Pd-a= 0? 017 < 0? 05 ;Pe-a= 0? 041。尚不能认为B、C、D3 组左肾草酸钙结晶 与E组（疗效对照组）差异有统计学意义（Pb-e= 0? 650,Pc-e= 0? 773,Pd-e= 0? 764)。 另外，A组成石率为77. 8%;B组成石率为41. 2%，明显低于A组，Pb-a= 0. 027 < 0. 05;C 组成石率为44. 4%，明显低于A组，Pc-a= 0. 04 < 0. 05 ;D组成石率为41. 2%，明显低于A组，卩(11 = 0.027 <0.05出组成石率为44.4%，明显低于4组，？61 = 0.04<0.05。由 此可