说明书进行操作，犬血清样 本经过反应后，均通过比读在不同波长可见光下反应生成物的吸光度计算ALT、AST、ALKP 活性。
[0028] 结果分析 2. 1不同时期各组犬丙氨酸氨基转氨酶(ALT)活性变化 由表2-1可知，就各组犬ALT活性的变化趋势而言，第一至第四周各组犬ALT活性均呈 现上升趋势，第四周达到上升峰值，保肝期的后四周均呈现下降趋势。其中，第一周上升速 度大于第二至第四周，第五周之后，对照组的降幅最明显且下降的速度最快，中药组的降幅 明显但第六至第七周下降趋势平缓，模型组的降幅小且下降的速度慢。
[0029] 健康成年犬的ALT活性参考范围是KT100IU/L。由表2-1可知，各组犬试验 前的ALT活性正常，各组犬间ALT活性无显著差异（P>0. 05)。试验开始后在第一周即出 现明显升高，至第二周时ALT活性超过参考范围一倍，分别是232±13. 71、213±3. 67、 204. 75±15. 55IU/L，第四周时ALT活性超过参考范围二倍，分别是357±7. 52、 328. 75±18. 68、333. 5±22. 50IU/L，此时各组犬间ALT活性无显著差异（P>0. 05)。第五 至第八周，中药组犬和对照组犬ALT活性均显著低于模型组（P〈0. 05)。第八周时，模型 组ALT活性为266. 5 ±7. 99IU/L，虽低于第四周但仍超过正常值一倍，中药组ALT活性为 125. 25±5. 42IU/L，已接近健康成年犬参考范围，对照组ALT活性为79. 75±2. 21IU/L， 降至健康成年犬参考范围内，中药组显著低于模型组（P〈〇. 05)，且对照组显著低于中药组 (P〈0. 05)〇
[0030] 表2-1不同时期各组犬ALT活性变化(单位：IU/L)
2. 2不同时期各组犬天门冬氨酸氨基转氨酶(AST)活性变化 由表2-2可知，就各组犬AST活性的变化趋势而言，第一至第四周各组犬AST活性均呈 现上升趋势，第四周达到上升峰值，保肝期的后四周均呈现下降趋势。其中第五周之后，对 照组的降幅最明显且下降的速度最快，中药组的下降趋势和降幅接近于对照组，模型组的 降幅小且下降的速度慢。
[0031] 健康成年犬的AST活性参考范围是(T50IU/L。由表2-2可知，各组犬试验前的 AST活性正常、差异不显著（P>0. 05)，试验开始后第二周时AST活性超过参考范围，分别 是 72±6. 95、63. 25±7. 31、64. 75±9. 80IU/L，各组犬间AST活性无显著差异（P>0. 05)， 第四周时AST活性接近参考范围最大值的二倍，分别是97 ± 19. 55、98. 75 ± 15. 88、 93. 5±30. 26IU/L，各组犬间AST活性无显著差异（P>0. 05)。第五至第八周，中药组犬和 对照组犬AST活性均显著低于模型组（P〈0. 05)。第八周时，各组犬AST活性为分别为 76. 5±10. 12、39. 75±7. 24、65. 25±5. 20IU/L，对照组的AST活性恢复到健康成年犬参考 范围，中药组的AST活性恢复到健康成年接近犬参考范围，中药组与模型组间差异显著 (P〈0. 05)，但与对照组间差异不显著（P>0. 05)。
[0032] 表2-2不同时期各组犬AST活性变化(单位：IU/L)
2. 3不同时期各组犬碱性磷酸酶(ALKP)活性变化 由表2-3可知，就各组犬碱性磷酸酶（ALKP)活性的变化趋势而言，第一至第四周各组 犬ALKP活性均呈现上升趋势，第四周达到上升峰值，保肝期的后四周均呈现下降趋势。其 中第五周之后，对照组的降幅最明显且下降的速度最快，中药组保持明显下降趋势，模型组 短暂升高后呈下降趋势，但降幅小且下降的速度慢。
[0033] 健康成年犬的ALKP活性参考范围是23~212IU/L。由表2-3可知，各组犬试验前 的ALKP活性正常、差异不显著（P>0. 05)。第三、四周时ALKP活性超过参考范围，且各组犬 间ALKP活性差异不显著（P>0. 05)。第五至第八周，对照组、中药组的ALKP活性均降至健康 成年犬参考范围内，中药组犬和对照组犬ALKP活性均显著低于模型组（P〈0. 05)，且对照组 显著低于中药组（P〈〇. 05)。模型组至第八周时ALKP活性为231. 6±24. 60IU/L，仍未降至 健康成年犬参考范围。
[0034] 表2-3不同时期各组犬ALKP活性变化(单位：IU/L)
3讨论 四氯化碳可以通过肝细胞中P450色素酶的代谢，从而产生三氯甲基、氯自由基等多种 自由基。这些自由基能明显改变膜上钙离子栗的活性，结果导致钙离子的内流增多，肝细 胞发生变性、坏死，其内容物溢出，此时肝脏的损伤可以通过检测酶的活性进行评价。ALT、 AST、ALKP等酶存在于正常肝细胞中，但当肝细胞发生变性、坏死时，血清中的酶活性就会升 尚。
[0035] 本试验在试验过程监测各组犬生化变化情况，与试验前比较，第一至四周ALT、 AST、ALKP指标出现明显升高趋势，各组犬间这些指标的变化差异均不显著（P>0. 05)。这些 变化与李淑萍等的试验结果一致，以上指标的变化说明四氯化碳造成了肝损伤。
[0036] 第五至八周，中药组和对照组的ALT、AST、ALKP指标出现明显下降趋势，对照组和 中药组显著低于模型组（P〈0. 05)，且对照组显著低于中药组（P〈0. 05)。
[0037] 试验结果说明，添加联苯双酯滴丸和复方叶下珠制剂能有效降低血清中的肝功酶 活性，说明复方叶下珠有保肝降酶作用。
[0038] 实施例3复方叶下珠制剂对犬四氯化碳肝损伤的抗氧化指标的影响 1材料与方法 1. 1试验材料与仪器 四氯化碳：批号20140218,生产厂家国药集团化学试剂有限公司。
[0039] 菜籽油：金龙鱼菜籽油，购于福州市永辉超市。
[0040] 联苯双酯滴丸：批准文号国药准字H11020980,生产厂家北京协和药厂。
[0041] 晒干的叶下珠全草和虎尾轮根，购于福建漳州，经鉴定为叶下珠和虎尾轮。
[0042] 谷胱甘肽（GSH)、丙二醛（MDA)、总超氧化物歧化酶（T-S0D)试剂盒，均由南京建成 生物工程研究所提供。
[0043] 800D台式低俗离心机(上海医疗器械有限公司手术器械厂)。
[0044]TU-1810紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司）。
[0045]DKB-501A型超级恒温水槽(上海精宏实验设备有限公司）。
[0046] 试验动物与设计 同实施例2 1. 3测定方法 (1)血清样品米集 每周采血，采血时将犬侧卧保定，前臂采血部位剃毛消毒，由助手握住采血部位上方近 心端，待前臂头静脉血管怒张显露后，用7号采血针以与皮肤呈45°角刺入皮下，刺入血管 后再沿血管推入0. 5~lcm，连接不含任何添加物的采血管，采集全血5mL，避光静置15分钟 后，以2000r/min离心10分钟，采集上层清夜置于3mL离心管内，-20°C保存备用。采血过 程中尽量避免溶血，溶血样本做第二次采集，保留不溶血样本，若两次均为溶血，做好记录。
[0047] ( 2 )抗氧化指标测定 肝功的测定按照南京建成生物工程研究所提供的试剂说明书进行操作，犬血清样本 经过反应后，均通过比读在不同波长可见光下反应生成物的吸光度计算GSH、MDA、T-S0D活 性。
[0048] 结果分析 2. 1不同时期各组犬抗氧化酶谷胱甘肽（GSH)活性变化 由表3-1可知，就各组犬GSH活性的变化趋势而言，前三周各组犬GSH活性均呈现下降 趋势，第四周之后，中药组和对照组呈现上升趋势，模型组在第四、五周短暂上升后又呈现 下降趋势。
[0049] 由表3-1可知，试验前模型组、对照组、中药组的GSH活性分别为9. 4 ± 0. 64、 8. 8±0. 57、9. 1±0. 87,各组间差异不显著（P>0. 05)。第三周时分别为5. 7±0. 55、 4. 8±1. 01、5. 1± 1.36,其中模型组最高，对照组最低，模型组显著高于对照组和中药组 (P〈0. 05)，但对照组和中药组间差异不显著（P>0. 05)。中药组犬GSH活性于第五周即开始 显著低于对照组与模型组（P〈〇. 05)，其中第六至八周对照组犬GSH活性显著低于模型组 (P〈0. 05)。第八周时各组犬GHS活性分别为5. 4±0. 79、7. 5±1. 04、8. 1±1. 23,其中模型组 最低，中药组最高，对照组显著低于模型组（P〈〇. 05)，中药组显著高于对照组（P〈0. 05)。
[0050] 表3-1不同时期各组犬GSH活性变化
2. 2不同时期各组犬抗氧化酶丙二醛(MDA)活性变化 由表3-2可知，就各组犬MDA活性的变化趋势而言，前四周各组犬MDA活性均呈现上升 趋势，第四周达到上升峰值，第五周之后，各组出现下降趋势，其中对照组与中药组的降幅 明显且下降的速度快，模型组短暂升高后呈下降趋势，但降幅小且下降的速度慢。
[0051] 由表3-2可知，试验前模型组、对照组、中药组的MDA活性分别为4. 9 ± 0. 83、 4. 3±0. 92、4. 7±0. 76nmol/mL，对照组犬MDA活性显著低于模型组和中药组，模型组和中 药组间差异不显著（P>〇. 05)。第四周时分别为20. 3±5. 07、19. 4±4