一种复方叶下珠制剂及其在犬日粮上的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于兽医领域，具体涉及一种复方叶下珠制剂及其应用。
【背景技术】
[0002] 大戟科下的叶下珠属的植物叶下珠Z.)，又有珍珠草、阴 阳草等别名，在福建省是一个常用的中草药，于民间广为流行。叶下珠性凉，味甘、苦，入肝 脾经，内服有平肝清热、清肝明目、消疳、止痢、利尿等功效，外敷有消肿解毒之功效。
[0003] 周宝华、李凌在62例临床慢性乙型肝炎的治疗中辅以叶下珠，其结果是显著的， 表明叶下珠具有能辅助慢性乙型肝炎患者抗病毒治疗。范适等用四氯化碳攻毒大鼠原代肝 细胞造成化学性损伤模型，发现叶下珠对肝细胞有明显保护作用。郑秀青提取出叶下珠的 有效成分，并通过有效成分诱导小鼠红细胞的氧化溶血性，试验结果说明叶下珠抗氧化作 用显著。
[0004] 虎尾轮（Vraria 为豆科猫尾射的植物，生长环境多为荒地、山坡、杂草 或灌木林边等，一般在秋季时采收，采收后分别以根、茎晒干储藏药用。虎尾轮在我福建闽 南地区野生普遍，目前在民间也已有广泛种植，于广东、广西、云南、台湾等地区也都较为常 见。虎尾轮在《闽南民间草药》称为统天草，在《泉州本草》称为古钱窗草、铁金锎或大本山 菁，在《福建中草药》中称为狗尾射。通过现代药理学的研究方法，黄建军及其他人从福建漳 州收集虎尾轮，鉴别其水提取液、乙醇提取液、石油醚提取液中的药用有效成分，研究发现， 包含在虎尾轮地下根部分的化学成分主要是氨基酸、糖、有机酸、黄塘及其苷类、蒽醌类、香 豆素类化合物、萜类、留体，地上干部分只有黄酮类化合物和糖。福建农林大学陈秋勇等将 虎尾轮根黄酮类化合物添加到饲料中饲喂四氯化碳肝损伤模型小鼠，实验结果显示小鼠肝 脏损伤得到不同程度的恢复。近年来越来越多的研究表明，天然黄酮类化合物具有显著的 抗肿瘤作用，同时，有许多种类的黄酮类化合物被用来作为临床抗肿瘤药物。因此，虎尾轮 具有极大的功能性食品的研究和开发的潜力。以往研究资料说明了虎尾轮根黄酮类提取物 具有抗肿瘤、抗氧化作用，且这种药效成分大部分在于虎尾轮的根部，采取水提取的方法可 以有效获得虎尾轮根黄酮类提取物，与我福建民间对于虎尾轮的药用习惯一致。
[0005] 四氯化碳是很常见的可用于建立试验动物肝脏损伤模型的化学药物，因为使用四 氯化碳造模的方法具有成模率很高和重复性良好的优点，在诸多肝疾病的治疗方法研究中 得以广泛应用以造成急性或慢性的肝脏损伤。四氯化碳诱导的肝损伤中的非手术动物模 型，有腹腔注射给药、皮下注射和口服等途径，根据药物给予途径和剂量的不同形成时间存 在差异。四氯化碳所致肝损伤模型其病理变化以肝小叶中央区坏死和细胞变性为主，其晚 期发生的纤维浸润几乎是不可逆转的。姜术霞采用皮下注射同时结合口服40%四氯化碳菜 籽油的方法制作北京犬肝脏损伤模型，8周后造模成功。陆家海等采用1. 5mL/kg剂量的60% 四氯化碳混合菜籽油乳剂间隔10日皮下注射一次，共6次，同时以10%乙醇代替水饮用，8 周后造模成功。陈钟等的实验中以60%四氯化碳混合菜籽油乳剂（1. 0~1. 3mL/kg)每10d- 次背部皮下注射，注射6-8次，控制饮食，以10%的猪油米饭喂养犬只，10~12周形成肝硬化 门静脉高压模型。章雅琴等小剂量四氯化碳油溶液腹腔注射辅以单纯高脂饮食对实验犬只 进行动态观察，56周后所有实验动物出现不同程度的肌纤维化。灌服的方法可以有效降低 感外器官的负荷，减少注射部位的炎症反应，降低在动物模型的制备过程中试验动物的死 亡率，但灌服剂量仍需进一步研究。犬肝脏损伤模型制备过程中，随着肝脏功能变化通常引 起犬只不同程度的食欲、饮欲下降，体形消瘦。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的在于提供一种复方叶下珠制剂及其应用。
[0007] 为实现上述目的，本发明采用如下技术方案： 一种复方叶下珠制剂，所述复方叶下珠制剂由叶下株全草滤液和虎尾轮根滤液合并浓 缩而成；叶下株全草滤液和虎尾轮根滤液的体积比为1:1。
[0008] 所述叶下株全草滤液制备方法为：每5g叶下株全草粉碎，加入150mL蒸馏水搅拌 均匀，浸泡16h，微沸状态煎煮45min，滤去上清液，向滤渣中加入150mL蒸馏水，浸泡8h， 微沸状态煎煮35min，滤去上清液；向滤渣中加入150mL蒸馏水，浸泡8h，微沸状态煎煮 35min，滤去上清液；合并三次滤液减压浓缩至40mL;虎尾轮根滤液制备方法同叶下株全草 滤液制备方法。
[0009] -种复方叶下珠制剂在在制备犬日粮中的应用。
[0010] 所述复方叶下珠制剂在基础日粮中添加lmL/kg复方叶下珠制剂。
[0011] 未见其具有修复犬肝损伤的作用的文献报道。
[0012] 本发明的优点在于： 1、复方叶下珠制剂目前在犬上未有报道具有保肝护肝的作用。与现有犬的其他保健品 相比，毒副小，无不良反应，且还有抗氧化的作用，可长期使用；2、复方叶下珠制剂原料易 得，价廉，提取分离工艺简单，生产方便，开发价值高。
【附图说明】
[0013] 图1试验后各组犬肝脏组织HE染色病理变化。图1-1，示模型组犬肝索排列混 乱（10X10);图1-2、1-3,示模型组犬肝细胞空泡变性，细胞肿胀，肝血窦狭窄（20X10， 40X10)。图1-4,示模型组犬中央静脉区，中央静脉、肝管等管壁明显增厚（10X10);图 1-5、1-6,示模型组犬肝细胞空泡变性、坏死，炎性细胞局部浸润（20X10,40X10)。图1-7、 1-8、1-9,示模型组犬汇管区增大，结缔组织增生（10X10,10X10,10X10)。图1-10,示对 照组犬肝索排列清晰（10X10);图1-11，示对照组犬肝窦明显（20X10);图1-12,示对照组 犬肝细胞轻微变性（40X10)。图1-13,示中药组犬肝索排列清晰（10X10);图1-14,示中 药组犬肝窦明显（20X10);图1-15,示中药组犬肝细胞轻微变性（40X10)。图1-16,示对 照组犬汇管区无明显结缔组织增生（4X10);图1-17,示中药组犬汇管区无明显结缔组织增 生（4X10)。
【具体实施方式】
[0014] 下面结合实施例对本发明进行详细说明： 实施例1复方叶下珠制剂的制备 每5g叶下株全草粉碎，加入150mL蒸馏水搅拌均勾，浸泡16h，微沸状态煎煮45min，滤 去上清液。向滤渣中加入150mL蒸馏水，浸泡8h，微沸状态煎煮35min，滤去上清液。向滤 渣中加入150mL蒸馏水，浸泡8h，微沸状态煎煮35min，滤去上清液。合并三次滤液减压浓 缩至40mL。同样的方法煎制虎尾轮根，合并叶下珠与虎尾轮根提取浓缩液，进一步浓缩至 40mL，4°C保存备用。
[0015] 实施例2复方叶下珠制剂对犬四氯化碳肝损伤的肝功指标的影响 1材料与方法 1. 1试验材料与仪器 四氯化碳：批号20140218,生产厂家国药集团化学试剂有限公司。
[0016] 菜籽油：金龙鱼菜籽油，购于福州市永辉超市。
[0017] 联苯双酯滴丸：批准文号国药准字H11020980,生产厂家北京协和药厂。
[0018] 晒干的叶下珠全草和虎尾轮根，购于福建漳州，经鉴定为叶下珠和虎尾轮。
[0019] 丙氨酸氨基转氨酶（ALT)、天门冬氨酸氨基转氨酶(AST)、碱性磷酸酶（ALKP)试剂 盒，均由南京建成生物工程研究所提供。
[0020] 800D台式低俗离心机(上海医疗器械有限公司手术器械厂)。
[0021] TU-1810紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司）。
[0022] DKB-501A型超级恒温水槽(上海精宏实验设备有限公司）。
[0023] 试验动物与设计 以成都好主人宠物食品有限公司生产好主人成犬粮作为每日基础日粮，试验期中各组 犬每日均提供基础日粮自由采食，自由饮水，每只犬在室内分笼单独饲养，室内温度控制在 25~29°C，早、晚各牵遛一次同时观察犬临床状态和排泄物状态，每日记录试验动物的基本 状况及时发现异常，每周称重记录。试验期为8周。
[0024] 12只犬分成3组，每组4只，前4周使用相同方法建立肝损伤模型，每只犬按 1. 2mL/kg剂量灌服50%四氯化碳菜籽油溶液，每周一次，共4次。4周后分别作仅提供日粮、 添加联苯双酯滴丸、添加叶下珠中药复方处理。模型组：仅提供基础日粮，不添加保肝西药 和中药。
[0025] 对照组：在基础日粮中添加0.2mg/kg联苯双酯滴丸每只，3次/日，连续喂服4周。 中药组：在基础日粮中添加lmL/kg复方叶下珠制剂，3次/日，连续喂服4周。本试验中犬 所需的四氯化碳剂量按照犬和大鼠的体表表面积比进行折算等效剂量。联苯双酯滴丸和复 方叶下珠的使用剂量按照犬和人的体表面积比进行折算等效剂量。
[0026] 测定方法 (1)血清样品米集 每周采血，采血时将犬侧卧保定，前臂采血部位剃毛消毒，由助手握住采血部位上方近 心端，待前臂头静脉血管怒张显露后，用7号采血针以与皮肤呈45°角刺入皮下，刺入血管 后再沿血管推入0. 5~lcm，连接不含任何添加物的采血管，采集全血5mL，避光静置15分钟 后，以2000r/min离心10分钟，采集上层清夜置于3mL离心管内，-20°C保存备用。采血过 程中尽量避免溶血[[i]]，溶血样本做第二次采集，保留不溶血样本，若两次均为溶血，做好 记录。
[0027] (2)肝功指标测定 肝功指标的测定按照南京建成生物工程研究所提供的试剂