一种用于治疗痛风性关节炎的土瓜提取物的利记博彩app_2

文档序号:8950896阅读:来源:国知局
物药理活性相似。
[0025] 实施例7 :提取物药理试验 一、材料与方法 1. 1药物:土瓜提取物①~⑤分别按照实施例1~5制得。秋水仙碱片,批号100206,规 格0. 5mg/s,西双版纳版纳药业有限责任公司;取6片秋水仙碱,研磨,加蒸馏水至200mL,混 匀配制成浓度为0. 15mg/mL秋水仙碱溶液。微晶尿酸钠(MSU),参照Coderre方法,194mL蒸 馏水加6mLlmol/LNaOH,煮沸,加lg尿酸,用lmLlmol/LHC1调pH至7. 2,搅拌冷却,4°C冰 箱保存24h,去上清,用滤纸将沉淀物水分吸干,放入70°C干燥箱烘2h,取出,刮下粉末,放 入研钵内研成细末,用孔径250ym的金属筛过筛,制成MSU粉末备用。
[0026] 1. 2试剂:尿酸(UA)试剂盒,批号:P100121,上海复星长征医学科学有限公司;一 氧化氮(N0)试剂盒,批号:20110119,南京建成生物工程研究所;总蛋白(TP双缩脲法)试剂 盒,批号:110601,北京睿基恒生物科技发展有限公司。
[0027] 1. 3动物:清洁级SD大鼠,雄性,体重200~220g,由浙江省医学科学院提供,合格 证号:SC)(K(浙)20080033。
[0028] 1.4仪器:LP123电子天平,常熟市衡器厂,苏制00000153 ;YLS-7A大鼠足趾容 积测量仪,山东省医学科学院设备站;HEMAVET950动物血液分析仪,ADrewScientific GroupCo;威图SELECTRA-E全自动生化仪,荷兰威图公司。
[0029] 1. 5实验方法及检测指标 1. 5. 1动物分组及给药:将大鼠随机分为18组:正常对照组、模型对照组、阳性对照组 (秋水仙碱〇? 〇〇15g?kgb、土瓜提取物①~⑤各设3个剂量组(100mg?kg\200mg?kg\ SOOmg^kg1),每组10只。造模前给药5d,l次/d,造模后继续给药。受试药组分别灌胃给 予不同剂量的土瓜提取物,正常对照组灌胃给予相应体积的水,阳性对照药灌胃给予相应 剂量的秋水仙碱药液。
[0030] 1. 5. 2造模:取lOOOrngMSU加9mL生理盐水,再加lmL吐温-80,加热搅拌,配制成 10mLMSU混悬液(浓度为100mg?mL给药30min后大鼠右后踝关节屈曲,用手触摸可扣 及两骨突部,75%医用酒精局部消毒后,用6号注射针在左右后侧踝关节背侧从45°方向插 入胫骨肌腿内侧,将〇.lmLMSU混悬液注入到踝关节腔,制备急性痛风性关节炎模型,伸曲、 旋转运动2min,正常对照组大鼠用无菌生理盐水代替MSU混悬液。
[0031] 1. 5. 3关节肿胀度:造模前在大鼠右后足踝关节三叉处外部绕踝关节用记号笔画 圈做记号,测量大鼠右足至标记处排水容积两次,取平均值为给药前关节体积;造模后lh、 4h、6h、24h测量大鼠右足至标记处排水容积,按公式计算肿胀度。
[0032] 肿胀度(mL)=致炎后踝关节排水容积(mL) -致炎前踝关节排水容积(mL)。
[0033] 1. 5. 4血液分析:造模24h,末次给药30min后,测完指定部位的排水容积后,从大 鼠眼眶后静脉丛采血5mL,其中4mL室温下自然凝血2h,3500r?min1离心10min,吸取血清, 参照试剂盒说明书依法测定血清UA、N0含量;另lmL加10yLEDTA抗凝,使用动物血液分 析仪依法测定白细胞、中性粒细胞、淋巴细胞数量。
[0034] 1. 5. 5生化及组织学指标:在玻璃纸上用锐利的刀片从大鼠右踝关节背侧快速切 断筋膜,切取踝关节三叉处除骨的全部软组织及软骨,称重并加9倍量的冰生理盐水制成 10%组织勾衆,3500r?min1离心lOmin,吸取上清,参照试剂盒说明书依法测定总蛋白、NO 含量;处死取脾脏、肾脏,称重,计算脾体系数和肾体系数。
[0035] 1. 6统计分析:计量资料数据结果以x±s表示,组间比较采用t检验。
[0036]二、结果 2. 1 土瓜提取物对痛风性关节炎大鼠关节肿胀度的影响 与正常对照组相比,模型对照组大鼠踝关节肿胀度在造模后1~6h内均显著升高 (P〈0. 01);造模后lh,与模型对照组相比,秋水仙碱组、土瓜提取物①~③各剂量组大鼠踝 关节肿胀度均显著下降(P〈〇. 01);造模后4h,与模型对照组相比,秋水仙碱组、土瓜提取物 ①~③各剂量组大鼠踝关节肿胀度均显著下降(P〈〇. 01);造模后6h,与模型对照组相比,秋 水仙碱组、土瓜提取物①~③高剂量组大鼠踝关节肿胀度均显著下降(P〈〇. 05) ;土瓜提取 物①~③中、低剂量组大鼠踝关节肿胀度亦有降低的趋势;土瓜提取物④~⑤各剂量组在造 模24h内与模型组相比均无显著差异。结果见表1(注:与模型组比较,*P〈0. 05,**P〈0. 01)。
[0037] 表1 土瓜提取物在造模24h内对痛风性关节炎大鼠踝关节肿胀度的影响(x土s, n=10)
2. 2对痛风性关节炎大鼠脾体指数、肾体指数的影响 与正常对照组相比,模型组肾体指数明显降低,脾体指数明显升高(P〈〇. 05、0. 01);与 模型对照组相比,秋水仙碱组大鼠肾体指数显著升高,脾体指数显著降低(P〈〇. 05) ;土瓜提 取物①~③高剂量组肾体指数明显上升(P〈〇. 01 ),土瓜提取物①~③各剂量组脾体指数均 有不同程度的下降(P〈〇. 05、0. 01);土瓜提取物④~⑤各剂量组对大鼠脾体指数、肾体指数 的影响与模型组无显著差别。见表2 (注:与模型对照组比较,*P〈0. 05, **P〈0. 01)。
[0038] 表2 土瓜提取物对痛风性关节炎大鼠脾指数、肾指数的影响(x土s,n=10)
2. 3对痛风性关节炎大鼠全血中白细胞、中性粒细胞和淋巴细胞水平的影响 与正常对照组相比,模型对照组的白细胞、中性粒细胞和淋巴细胞数量有升高的趋势; 与模型组相比秋水仙碱和土瓜提取物①~③高剂量组大鼠的白细胞、中性粒细胞合淋巴细 胞数量明显减少(P〈〇. 05、0. 01),土瓜提取物①~③其余各剂量组均有降低趋势;土瓜提取 物④~⑤各剂量组与模型对照组比无显著差异。见表3 (注:与模型对照组比较,*P〈0. 05, **P〈0.01)。
[0039]表3 土瓜提取物对痛风性关节炎大鼠白细胞、中性粒细胞及淋巴细胞影响(x土s, n=10)
2. 4对痛风性关节炎大鼠血清UA水平的影响 各组大鼠血尿酸值结果结果显示,与正常对照组相比,模型组血尿酸值明显升高 (P〈0. 05);与模型组相比,土瓜提取物①~③中高剂量组大鼠血尿酸明显下降(P〈0. 05); 土瓜提取物④~⑤各剂量组与模型组比均无显著性差异。见表4 (注:与模型对照组比较, *P〈0. 05, #P〈0. 01)。
[0040] 表4 土瓜提取物对痛风性关节炎大鼠血清UA的影响(x土s,n=10)
上述试验结果表明,土瓜提取物对大鼠痛风性关节炎具有治疗作用。土瓜提取物中菊 花的含量对其发挥治疗作用至关重要。
[0041] 实施例8:片剂的制备 按实施例1方法制得提取物,按其与赋形剂重量比为1:10的比例加入赋形剂,制粒压 片。
[0042] 实施例9 : 口服液的制备 按实施例1方法先制得提取物,按常规口服液制法制成口服液。
[0043] 实施例10 :胶囊剂或颗粒剂的制备 按实施例1方法先制得提取物,按其与赋形剂重量比为1:9的比例加入赋形剂,制成胶 囊或颗粒剂。
[0044] 实施例11 :注射液的制备 按实施例1方法制得提取物,加注射用水,精滤,灌封灭菌制成注射液。
[0045] 实施例12 :无菌粉针的制备 按实施例1方法先制得提取物,溶于无菌注射用水中,搅拌使溶,用无菌抽滤漏斗过 滤,再无菌精滤,分装于安瓿,低温冷冻干燥后无菌熔封得粉针剂。
【主权项】
1. 一种土瓜提取物,其特征在于所述提取物由以下方法制备: (a)以重量计,每100份药材包含干燥的土瓜80~90份和干燥的菊花10~20份,混合粉 碎,用55%乙醇溶液热回流提取,合并提取液,浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液;(b)将步 骤(a)所得乙醇提取浓缩液用水稀释,依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取,减 压浓缩,分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物;(c)正丁醇萃取物用水 溶解,过滤,用大孔树脂富集活性成分,先用10%乙醇冲洗8个柱体积除去大极性成分,再用 70%乙醇洗脱12个柱体积,收集70%洗脱液,减压浓缩即得。2. 根据权利要求1所述的提取物,其特征在于:步骤(c)中所述大孔树脂为AB-8型大 孔树脂。3. 根据权利要求1所述的提取物,其特征在于:所述提取物的液相分析方法为: 色谱柱:AgilentZorbaxExtent_C18 柱(4.6mmX250mm,5iim); 流动相:A为乙腈,B为0. 5%磷酸溶液; 梯度洗脱程序:〇? 〇l~5min,A10% - 15% ;5~10min,A15% - 48% ;10~25min,A48% - 78% ;25~30min,A78% - 10% ; 流动相流速:1.OmL?minS 检测波长:270nm; 柱温:35°C; 进样量:10yL。4. 药物制剂,其特征在于:含有治疗有效量的权利要求1所述的提取物和药学上可接 受的载体。5. 权利要求1所述的提取物在制备治疗痛风性关节炎的药物中的应用。6. 权利要求4所述的药物制剂在制备治疗痛风性关节炎的药物中的应用。
【专利摘要】本发明公开了一种用于治疗痛风性关节炎的土瓜提取物,提取物制备方法包括:(a)以重量计,每100份药材包含干燥的土瓜80~90份和干燥的菊花10~20份,混合粉碎,用55%乙醇溶液热回流提取,合并提取液,浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液;(b)将步骤(a)所得乙醇提取浓缩液用水稀释,依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取,减压浓缩,分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物;(c)正丁醇萃取物用水溶解,过滤,用大孔树脂富集活性成分,先用10%乙醇冲洗8个柱体积除去大极性成分,再用70%乙醇洗脱12个柱体积,收集70%洗脱液,减压浓缩即得。该提取物可以应用于痛风性关节炎,开发成治疗痛风性关节炎的药物。
【IPC分类】A61P19/06, A61P19/02, G01N30/02, A61K36/39
【公开号】CN105168305
【申请号】
【发明人】李 杰
【申请人】李 杰
【公开日】2015年12月23日
【申请日】2015年9月7日
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