室温孵育15min。分别滴加鼠抗人Bcl-2抗体、鼠抗人Bax抗体，37°C孵育2 h，PBS洗 涤3次。滴加生物素标记二抗，室温孵育15min，PBS洗涤3次。滴加ABC溶液，室温孵育 lOmin，PBS洗涤3次。滴加DAB溶液显色，蒸馏水冲洗，封片，光学显微镜下观察SK0V-3细 胞染色情况。细胞核和细胞质出现棕色判断为Bcl-2和Bax蛋白阳性细胞，无棕色染色者 为Bcl-2和Bax蛋白阴性细胞。观察计数200个细胞，计算阳性细胞占所有细胞的比例。
[0031] 1.3统计学处理 定量资料用x±s表示，采用t检验，以P< 0.05为差异有统计学意义。
[0032] 2?结果 2. 1药物组合物对SK0V-3细胞凋亡的影响：流式细胞术检测结果显示，对照组的 SK0V-3细胞凋亡率为（4. 2±0. 9) %，而用50μg/ml药物组合物作用24 h的SK0V-3细 胞凋亡率为（23. 8±1.0) %，显著高于对照组（P < 0. 05)。
[0033] 2. 2药物组合物对SK0V-3细胞Bcl-2和Bax蛋白表达的影响：免疫组织化学方法 检测SK0V-3细胞Bcl-2蛋白表达结果显示，对照组SK0V-3细胞核和胞质Bcl-2蛋白高表 达（52. 3±1. 5)%，细胞核和质呈现棕黄色的细胞数量较多，实验组SK0V-3细胞胞核和胞 质Bcl-2蛋白明显降低（16. 5 ±0. 9) %，细胞核和质呈现棕黄色的SK0V-3细胞数量明显减 少，差异具有统计学意义（P < 〇. 05)。免疫组织化学方法检测SK0V-3细胞Bax蛋白表达结 果显示，对照组SK0V-3细胞胞核和胞质Bax蛋白低表达（15. 4±1. 2)%，细胞核和质呈现棕 黄色的细胞数量较少，实验组SK0V-3细胞核和胞质Bax蛋白明显增高（48. 8 ± 1. 6 )%，细胞 核和质呈现棕黄色的SK0V-3细胞数量明显增加，差异具有统计学意义（P < 0. 05)。
[0034] 结果表明：本发明药物组合物可以下调SK0V-3细胞Bcl-2蛋白表达、上调 SK0V-3细胞Bax蛋白表达，首次揭示了 Bax/Bcl-2蛋白在药物组合物诱导SK0V-3细胞凋 亡中的作用。此结果为药物组合物抗卵巢癌作用的研究和应用提供了一定的实验依据。
[0035] 实验例2 :防治卵巢癌疗效 1. 一般材料 本发明以中医确证为卵巢癌，年龄在18-60岁之间。符合本研究入选标准的患者为60 例。其中试验组30例，对照组30例，确诊的对象无其他严重疾病。
[0036] 2?诊断标准 显效：体质增强，肢体有力，腹部不适消失，卵巢肿瘤瘤体缩小，其他部位未见新生肿 瘤。
[0037] 有效：体质增强，卵巢肿瘤未见增大，其他部位未见新生肿瘤。
[0038] 无效：症状无变化，卵巢肿瘤瘤体增大，或者其他部位出现新生肿瘤。
[0039] 3?治疗方法 实验组：服用本发明实施例1药物组合物，停服其他药物，每天3次，每次3g，病情较重 者，每天3次，每次6g，15天为一个疗程。
[0040] 对照组：服用常规西药，按照药物的说明使用。
[0041] 4?治疗效果 表1药物组合物治疗卵巢癌效果
结果表明：药物组合物治疗卵巢癌疗效显著。
【主权项】
1. 一种防治卵巢癌的药物组合物，其特征在于制成该药物组合物的原料药的组成和重 量份为： 臭蒿50-60重量份阿氏蒿100-110重量份铃铃香30-40重量份螺厣20-30重量 份原百郃喊6_8重量份血竭红素3_5重量份。2. 根据权利要求1所述一种防治卵巢癌的药物组合物，其特征在于制成该药物组合物 的原料药的组成和重量份为： 臭蒿55重量份阿氏蒿105重量份铃铃香35重量份螺庵25重量份原百部碱7 重量份血竭红素4重量份。3. 根据权利要求1所述一种防治卵巢癌的药物组合物，其特征在于药物组合物可以采 用制剂学的常规方法制备成片剂、胶囊剂、滴丸。4. 根据权利要求1所述一种防治卵巢癌的药物组合物，其特征在于药物组合物与化学 药或中药组成的防治卵巢癌药物。5. -种防治卵巢癌的药物组合物，其特征在于按如下方法制备： 原料药的组成和重量份为：臭蒿50-60重量份阿氏蒿100-110重量份铃铃香30-40 重量份螺庵20-30重量份原百郃喊6_8重量份血竭红素3_5重量份； 制备方法： (1) 按原料药配比取阿氏蒿、铃铃香，混匀，先用重量百分比浓度60%乙醇作为溶剂，在 50°C温浸提取，提取次数为4次，每次提取时间为4小时，每次溶剂用量为阿氏蒿、铃铃香药 材总重量的20倍，滤过，得药渣A和提取液，提取液回收乙醇，浓缩，干燥，即得提取物A; (2) 按原料药配比取臭蒿，并与步骤（1)得到药渣A混匀，用重量百分比浓度35%乙醇 为溶剂，在70°C温浸提取，提取次数为3次，每次提取时间为3小时，每次溶剂用量为上述药 材总重量的15倍，滤过，提取液回收乙醇，浓缩至相对密度1. 12,滤过，药液通过NKA-9大 孔吸附树脂柱，先用水洗脱，再用重量百分比浓度75%的乙醇溶液洗脱NKA-9大孔吸附树脂 柱，收集重量百分比浓度75%乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得提取物B ; (3) 按原料药配比取螺厣，超微粉碎至80微米，即得超微粉C ; (4) 按原料药配比取原百部碱、血竭红素，混匀，依次加入提取物A、提取物B、超微粉C， 混匀，即得药物组合物。6. 根据权利要求5所述一种防治卵巢癌的药物组合物，其特征在于按如下方法制备： 原料药的组成和重量份为：臭蒿55重量份阿氏蒿105重量份铃铃香35重量份螺庵 25重量份原百部碱7重量份血竭红素4重量份； 制备方法： (1) 按原料药配比取阿氏蒿、铃铃香，混匀，先用重量百分比浓度60%乙醇作为溶剂，在 50°C温浸提取，提取次数为4次，每次提取时间为4小时，每次溶剂用量为阿氏蒿、铃铃香药 材总重量的20倍，滤过，得药渣A和提取液，提取液回收乙醇，浓缩，干燥，即得提取物A; (2) 按原料药配比取臭蒿，并与步骤（1)得到药渣A混匀，用重量百分比浓度35%乙醇 为溶剂，在70°C温浸提取，提取次数为3次，每次提取时间为3小时，每次溶剂用量为上述药 材总重量的15倍，滤过，提取液回收乙醇，浓缩至相对密度1. 12,滤过，药液通过NKA-9大 孔吸附树脂柱，先用水洗脱，再用重量百分比浓度75%的乙醇溶液洗脱NKA-9大孔吸附树脂 柱，收集重量百分比浓度75%乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得提取物B ; (3) 按原料药配比取螺厣，超微粉碎至80微米，即得超微粉C ; (4) 按原料药配比取原百部碱、血竭红素，混匀，依次加入提取物A、提取物B、超微粉C， 混匀，即得药物组合物。7. 根据权利要求5所述一种防治卵巢癌的药物组合物，其特征在于药物组合物可以采 用制剂学的常规方法制备成片剂、胶囊剂、滴丸。8. 根据权利要求5所述一种防治卵巢癌的药物组合物，其特征在于药物组合物与化学 药或中药组成的防治卵巢癌药物。
【专利摘要】本发明公开了一种防治卵巢癌的药物组合物，本发明药物组合物是以臭蒿、阿氏蒿、铃铃香、螺厣、原百部碱、血竭红素为原料药，配比而成，可按常规制剂工艺制成各种剂型，防治卵巢癌疗效显著。
【IPC分类】A61K36/282, A61K31/55, A61K35/618, A61P35/00, A61K31/352
【公开号】CN105168291
【申请号】
【发明人】张秀华
【申请人】济南星懿医药技术有限公司
【公开日】2015年12月23日
【申请日】2015年9月9日