胞内活性氧检测结果图。
[0025] 图3为实施例3人参皂苷Rg3对缺血性心功能不全模型的作用结果图。
【具体实施方式】
[0026] 下面将结合附图和实施例进一步说明本发明的实质内容及有益效果，该实施例仅 用于说明本发明而非对本发明的限制。
[0027] 实施例1人参皂苷1^3对SIRT1蛋白激动作用
[0028] 在SIRT1、赖氨酰肽链内切酶、NAD+以及不同浓度人参皂苷Rg3样品混合物中，加入 荧光探针TPE-GK(Ac)YDD，以反应缓冲液补齐至同等体积。孵育2小时，反应结束后，采用 TECAN酶标仪测量各孔荧光强度，荧光激发波长为320nm，发射波长为465nm。根据荧光强度 计算人参皂苷1^3对SIRT1的调节作用。
[0029] 结果如图1所示，人参皂苷1?&能够浓度依赖性地激活SIRT1，从而发挥调节能量 代谢作用。
[0030] 实施例2心肌细胞氧化损伤模型
[0031] 按照文献方法（KimDH,ParkCH,ParkD,etal.GinsenosideRcmodulates Akt/FoxOlpathwaysandsuppressesoxidativestress[J].Archivesofpharmacal research, 2014, 37(6) :813-820.)，利用叔丁基双氧水损伤心肌细胞。H9c2细胞种于96孔 板中，24小时后加入人参皂苷Rg3 (20mM)，预保护24小时后，加入叔丁基双氧水损伤。
[0032] 实验结果如图2所示，人参皂苷Rg3提高氧化损伤的心肌细胞的ATP含量，mtDNA 含量，改善了心肌细胞基础呼吸，降低了细胞内的活性氧，对心肌细胞缺氧损伤具有保护作 用。
[0033] 实施例3缺血性心功能不全模型
[0034] 采用冠脉结扎方法诱导SD大鼠产生慢性心功能不全模型。首先，结扎大鼠左冠状 动脉前降支（LAD)建立急性心肌梗死（AMI)模型：SD大鼠用5%水合氯醛（按0. 6ml/100g 剂量）溶液麻醉后，固定于鼠板。手术部位脱毛，碘酒、酒精消毒，行气管插管，沿左侧胸骨 旁斜行切口，上界为两前肢后缘连线，下界为第5肋间，依次切开皮肤浅筋膜和深筋膜，并 用止血钳钝性分离胸大肌和前锯肌交界处，在靠胸骨缘处用止血钳钝性分离第3、4肋间进 胸，打开胸腔，剪开心包膜，暴露心脏。在体视显微镜下，于左心耳和肺动脉圆锥之间找到冠 状动脉，在冠状动脉起始点下方2-3_处，用6~0号丝线结扎。迅速关闭胸腔，逐层缝合 肌肉和皮肤，局部消毒抗菌。术后给予青霉素40万U/只。术后28天，依据超声结果（射 血分数值小于35%)及血清BNP(脑尿钠肽）水平确定模型，分组。设1、模型组（Model)， 5只；2、人参皂苷Rg3组，5只；以假手术组（只穿线不结扎）作为对照组，5只。
[0035] Rg3标准品购自上海融禾，溶于生理盐水后腹腔注射，剂量为5mg/kg/天，给药28 天。检测各实验组大鼠的射血分数值和左心室缩短分数值。假手术组大鼠射血分数值约为 80%左右。
[0036] 如图3所示的实验结果表明，人参皂苷1?&可提高模型大鼠的射血分数值以及左 心室缩短分数值，可以改善缺血引起的慢性心功能不全的症状。因此，可以用于治疗缺血性 心脏病。
[0037] 实施例4糖尿病模型
[0038] 采用自发性2型糖尿病小鼠KKAy和对照组小鼠C57BL/6J进行人参皂苷Rg3调节 血糖代谢作用研究。其中，KKAy小鼠（SPF级，雄性，6-8周），C57BL/6J小鼠（SPF级，雄性， 18-20g)，购自北京华阜康生物科技股份有限公司，所有实验动物均适应性喂养10天后用 于实验。C57BL/6J小鼠作为对照小鼠；高血糖KKAy小鼠随机分成3组，分别为模型组、人参 皂苷1^3组（5〇11^/1^)、阳性药二甲双胍组（30〇1^/1^)。药物溶于0.5%羧甲基纤维素钠溶 液，所有小鼠每天灌胃相应剂量的药物一次，对照组和模型组小鼠给予同等体积溶剂〇. 5% 羧甲基纤维素钠溶液。
[0039] 血糖测定：给药前和给药后每周测定一次小鼠的随机血糖和空腹血糖，具体操作 如下：给药后，尾静脉采血检测葡萄糖水平即为随机血糖，随后动物禁食不禁水6h，尾静脉 采血检测葡萄糖水平即为空腹血糖。
[0040] 连续给药后第1、2、3周小鼠随机血糖与空腹血糖数值如表1所示，从表中可以看 出人参皂苷1? &能够显著降低糖尿病小鼠随机血糖和空腹血糖水平，改善血糖代谢。与已 有降糖药二甲双胍相比，其改善葡萄糖代谢能力不弱于二甲双胍。
[0041] 表 1
[0042]
【主权项】
1. 20 (S)-人参皂苷Rg3作为SIRTl蛋白激动剂的用途。 2. 20 (S)-人参皂苷Rg3在制备增加心肌能量代谢药物中的应用。 3. 20 (S)-人参皂苷Rg3在制备治疗缺血性心脏病药物中的应用。 4. 20 (S)-人参皂苷Rg3在制备调节糖代谢药物中的应用。 5. 20 (S)-人参皂苷Rg3在制备治疗2型糖尿病药物中的应用。6. -种药物组合物，其特征在于，包含作为有效成分的20 (S)-人参皂苷Rg3。7. 如权利要求6所述的药物组合物，其特征在于，包括药物制剂允许的药物赋形剂或 载体。8. 如权利要求6所述的药物组合物，其特征在于，药物组合物的制剂形式为液体制剂 或固体制剂。
【专利摘要】本发明公开了一种20(S)-人参皂苷Rg3作为SIRT1蛋白激动剂的用途，具体涉及在制备增加心肌能量代谢药物中的应用，在制备治疗缺血性心脏病药物中的应用，在制备调节糖代谢药物中的应用，在制备治疗2型糖尿病药物中的应用。本发明还提供了一种以人参皂苷Rg3为有效成分的药物组合物。本发明首次公开了20(S)-人参皂苷Rg3作为SIRT1的激动剂在调节心肌能量代谢障碍和血糖代谢紊乱中的用途，从而达到治疗缺血性心脏病和2型糖尿病的目的。
【IPC分类】A61P3/00, A61P3/10, A61P9/10, A61K31/704
【公开号】CN105168233
【申请号】
【发明人】程翼宇, 王毅, 赵筱萍, 樊官伟
【申请人】浙江大学
【公开日】2015年12月23日
【申请日】2015年9月23日