包含以下步骤
[0067]①消毒处理:将步骤I中选取的果实先用质量百分比浓度为85%的酒精浸泡50s后，用无菌水冲洗干净I遍，接着进行二次消毒；所述二次消毒是将果实先倒入质量百分比浓度为0.02%的吐温20溶液，摇晃15s后，用镊子夹出果实，置于质量百分比浓度为15%次氯酸钠溶液中消毒12min ;
[0068]②萌发培养处理:将步骤①消毒处理过的果实用无菌水冲洗干净后用无菌解剖工具剖开果实，取出白色浆状或粉状种胚接种到胚萌发培养基上，将接种后的培养瓶置于温度20-28 °C的培养室内进行无光照培养20天，诱导种胚萌发成原始球茎，再转入温度20-25°C、光照强度为22001x的条件下培养30天以强壮原始球茎，同时诱导种胚继续萌发原始球茎；
[0069]所述的胚萌发培养基由以下组分配置而成:MS基本培养基+ 土豆泥20g/L+椰子水80ml/L+脯氨酸5mg/L+鹿糖30g/L+琼脂或卡拉胶5.0g/L, pH值为5.0 ；
[0070]3)原始球茎的增殖培养:将上述步骤2中获得萌发的原始球茎转入原始球茎增殖培养基中进行增殖培养，在培养温度25°C，光照强度15001x，光照时间12h/天的条件下，培养30天以诱导原始球茎的增殖；所述的增殖培养基由以下组分配置而成:MS基本培养基+6-BA或6-糠氨基嘌呤KT2.0mg/L+NAA0.2mg/L+椰子水30ml/L+白糖20g/L+琼脂或卡拉胶 5.5g/L，pH 值为 5.0 ;
[0071]4)分化与壮苗培养:将上述步骤3中获得的原始球茎转入分化与壮苗培养基中，培养温度20-28°C，光照强度20001x，光照时间12h/天，培养90天，使得原始球茎分化形成健壮的具根、茎、叶的完整血叶兰植株；
[0072]所述的分化与壮苗培养基由以下组分配置而成:1/2MS基本培养基+NAA0.2mg/L+香蕉泥50g/L+白糖20g/L+活性炭0.5g/L+琼脂或卡拉胶8.0g/L, pH值为5.2。
[0073]在上述所有的步骤中，椰子水为从新鲜椰子中取出的椰子水经三层纱布过滤加入培养基中。所述的香蕉泥是由香蕉去皮后用豆浆机打碎而成的。
[0074]综上所述，采用本申请的血叶兰种子组织培养快速育苗方法，可以使血叶兰现种苗的快速繁殖，能够有效用于挽救和保护血叶兰资源。用实施例1-实施例4所述的培养方法得到的84%以上血叶兰种子萌发，血叶兰原始球茎的增殖系数达到10.3倍，且不出现玻璃化及愈伤组织化。原始球茎分化形成成小芽的分化率高达93%及以上，且小苗健壮。
[0075]本申请所述的血叶兰快速育苗方法并不只仅仅局限于上述实施例，凡是依据本申请原理的任何改进或替换，均应在本申请的保护范围之内。
【主权项】
1.一种血叶兰种子的组织培养与快速育苗方法，其特征在于:其步骤包括， 1)选择培养材料:于血叶兰开花期，选择生长健壮的优良株系进行同株或异株授粉，授粉25-40天后，摘取果实外表颜色为白色或淡黄色且未开裂的果实作为培养材料用于组织培养；或者用野外采集到的野生血叶兰植株上的果实外表颜色为白色或近黄色且未破裂的蒴果用于组织培养； 2)原始球茎的诱导培养:包含以下步骤 ①消毒处理:将步骤I中选取的果实先用质量百分比浓度为80-95%的酒精浸泡30-50s后，用无菌水冲洗干净，接着进行二次消毒；所述二次消毒是将果实先倒入质量百分比浓度为0.01-0.02 %的吐温20溶液中，摇晃10-20S后，夹出果实，置于质量百分比浓度为10-15%次氯酸钠溶液中消毒8-12min，或者将果实置于吐温20和次氯酸钠的混合溶液中消毒8-12min并用无菌水冲洗干净，所述吐温20和次氯酸钠的混合溶液中，吐温20的质量百分比浓度为0.01-0.02%，次氯酸钠的质量百分比浓度为10-15% ; ②萌发培养处理:将步骤①消毒处理过的果实用无菌水冲洗干净后用无菌解剖工具剖开果实，取出白色浆状或粉状种胚接种到胚萌发培养基上，将接种后的培养瓶置于温度20-28°C的培养室内进行无光照培养20-30天，诱导种胚萌发成原始球茎，再转入温度20-25°C、光照强度为1600-22001x的条件下培养15-30天以强壮原始球茎，同时诱导种胚继续萌发原始球茎； 所述的胚萌发培养基由以下组分配置而成:MS基本培养基+ 土豆泥20-50g/L+椰子水30-80ml/L+脯氨酸5-lOmg/L+蔗糖20_30g/L+琼脂或卡拉胶5.0-8.0g/L，pH值为5.0-5.4 ； 3)原始球茎的增殖培养:将上述步骤2中获得萌发的原始球茎转入原始球茎增殖培养基中进行增殖培养，在培养温度20-25°C，光照强度1500-20001x，光照时间8_12h/天的条件下，培养30-60天以诱导原始球茎的增殖； 所述的增殖培养基由以下组分配置而成:MS基本培养基+6-BA或6-糠氨基嘌呤KT 0.5-2.0mg/L+NAA 0.2-0.5mg/L+ 椰子水 30_60ml/L+ 白糖 20_30g/L+ 琼脂或卡拉胶4.5-5.5g/L，pH 值为 5.0-5.4 ； 4)分化与壮苗培养:将上述步骤3中获得的原始球茎转入分化与壮苗培养基中，培养温度20-28°C，光照强度2000-25001x，光照时间8_12h/天，培养60-90天，使得原始球茎分化形成健壮的具根、茎、叶的完整血叶兰植株； 所述的分化与壮苗培养基由以下组分配置而成:1/2MS基本培养基+NAA 0.2-0.5mg/L+香蕉泥50-80g/L+白糖20-40g/L+活性炭0.5-3.0g/L+琼脂或卡拉胶5.0-8.0g/L, pH值为 5.2-5.6o2.根据权利要求1所述的血叶兰种子的组织培养与快速育苗方法，其特征在于:步骤2的第①步消毒处理是将步骤I中选取的果实先用质量百分比浓度为80%的酒精浸泡35s后，用无菌水冲洗干净，接着进行二次消毒；所述二次消毒是将果实先倒入质量百分比浓度为0.01%的吐温20溶液中，摇晃15s后，夹出果实，置于质量百分比浓度为10%次氯酸钠溶液中消毒lOmin，或者将果实置于吐温20和次氯酸钠混合溶液中消毒lOmin，所述吐温20和次氯酸钠混合溶液中，吐温20的质量百分比浓度为0.01%，次氯酸钠的质量百分比浓度为 10% O3.根据权利要求1所述的血叶兰种子的组织培养与快速育苗方法，其特征在于:步骤2中的原始球茎萌发培养基由以下组分配置而成:MS基本培养基+ 土豆泥50g/L+椰子水30ml/L+脯氨酸8mg/L+蔗糖20g/L+琼脂或卡拉胶5.8g/L，pH值为5.4。4.根据权利要求1所述的血叶兰种子的组织培养与快速育苗方法，其特征在于:步骤2中接种后置于无光照条件下以诱导种胚萌发成原始球茎的培养天数为25天，强壮原始球茎使用的光照强度为18001x，培养天数为20天。5.根据权利要求1所述的血叶兰种子的组织培养与快速育苗方法，其特征在于:步骤3中增殖培养以诱导原始球茎增殖的培养温度为22±2°C，光照强度为18001x，光照时间为1h/天，培养天数为50天。6.根据权利要求1所述的血叶兰种子的组织培养与快速育苗方法，其特征在于:步骤3中所述的增殖培养基由以下组分配置而成:MS基本培养基+6-BA或6-糠氨基嘌呤ΚΤ0.8mg/L+NAA0.3mg/L+ 椰子水 50ml/L+ 白糖 30g/L+ 琼脂或卡拉胶 4.5g/L，pH 值为 5.4。7.根据权利要求1所述的血叶兰种子的组织培养与快速育苗方法，其特征在于:步骤4中原始球茎转入分化与壮苗培养基中诱导原始球茎分化形成健壮的完整植株，培养温度为20-28°C，光照强度为25001x，光照时间为8h/天，培养天数为80天。8.根据权利要求1所述的血叶兰种子的组织培养与快速育苗方法，其特征在于:步骤4中所述的分化与壮苗培养基由以下组分配置而成:1/2MS基本培养基+NAA0.3mg/L+香蕉泥80g/L+白糖25g/L+琼脂或卡拉胶6.0g/L, pH值为5.6。
【专利摘要】本申请涉及一种血叶兰种子组织培养快速育苗方法，步骤包括：1.选择培养材料；2.原始球茎的诱导培养；3.原始球茎的增殖培养；4.分化与壮苗培养。该发明其解决了血叶兰在自然状态下难萌发以及果实发育周期短导致种子成熟度不一致、种子寿命短和大量败育的问题，开发一种可快速繁殖血叶兰种苗的方法。该方法取材方便且成功率高，可用于挽救种子发育不一致的血叶兰果实，生产大量的血叶兰种苗，更好地保护血叶兰资源。
【IPC分类】A01H4/00
【公开号】CN105165617
【申请号】
【发明人】陈菁瑛, 刘保财
【申请人】福建省农业科学院农业生物资源研究所
【公开日】2015年12月23日
【申请日】2015年10月9日