血叶兰种子的组织培养与快速育苗方法_2

文档序号:8948335阅读:来源:国知局
0.3倍,且不出现玻璃化及愈伤组织化。原始球茎分化形成成小芽的分化率高达93%及以上,且小苗健壮。壮苗培养后,即获得完整的健壮植株。可在短时间内培育出大量适合种植的血叶兰幼苗,显著提高了血叶兰种苗的增殖系数和种苗质量,实现快速、便捷、高效的规模化育苗,能够满足血叶兰种苗的产业化规模化生产需求。
[0027]③该方法使用的设备简单,只需要简单的植物组织培养设备即可实现。
【具体实施方式】
[0028]下面对本申请的技术方案进行详细说明。
[0029]实施例1
[0030]一种血叶兰种子的组织培养与快速育苗方法的步骤如下:
[0031]I)选择培养材料:于血叶兰开花期,选择生长健壮的优良株系进行同株或异株授粉,授粉33天后,摘取果实外表颜色为白色或淡黄色且未开裂的果实作为培养材料用于组织培养;
[0032]2)原始球茎的诱导培养:包含以下步骤
[0033]①消毒处理:将步骤I中选取的果实先用质量百分比浓度为80%的酒精浸泡35s后,用无菌水冲洗干净I遍,接着进行二次消毒;所述二次消毒是将果实先倒入质量百分比浓度为0.01%的吐温20溶液中,摇晃1s后,夹出果实,置于质量百分比浓度为10%次氯酸钠溶液中消毒8min ;
[0034]②萌发培养处理:将步骤①消毒处理过的果实用无菌水冲洗干净后用无菌解剖工具剖开果实,取出白色浆状或粉状种胚接种到胚萌发培养基上,将接种后的培养瓶置于温度20-28 °C的培养室内进行无光照培养25天,诱导种胚萌发成原始球茎,再转入温度20-25°C、光照强度为ISOOIx的条件下培养20天以强壮原始球茎,同时诱导种胚继续萌发原始球茎;
[0035]所述的胚萌发培养基由以下组分配置而成:MS基本培养基+ 土豆泥50g/L+椰子水30ml/L+脯氨酸8mg/L+鹿糖20g/L+琼脂或卡拉胶5.8g/L,pH值为5.4 ;
[0036]3)原始球茎的增殖培养:将上述步骤2中获得萌发的原始球茎转入原始球茎增殖培养基中进行增殖培养,在培养温度22±2°C,光照强度18001x,光照时间1h/天的条件下,培养50天以诱导原始球茎的增殖;
[0037]所述的增殖培养基由以下组分配置而成:MS基本培养基+6-BA或6_糠氨基嘌呤ΚΤ0.8mg/L+NAA0.3mg/L+ 椰子水 50ml/L+ 白糖 30g/L+ 琼脂或卡拉胶 4.5g/L,pH 值为 5.4 ;
[0038]4)分化与壮苗培养:将上述步骤3中获得的原始球茎转入分化与壮苗培养基中,培养温度20-28°C,光照强度25001x,光照时间Sh/天,培养80天,使得原始球茎分化形成健壮的具根、茎、叶的完整血叶兰植株;
[0039]所述的分化与壮苗培养基由以下组分配置而成:1/2MS基本培养基+NAA0.3mg/L+香蕉泥80g/L+白糖25g/L+活性炭1.8g/L+琼脂或卡拉胶6.0g/L, pH值为5.6。
[0040]在上述所有的步骤中,椰子水为从新鲜椰子中取出的椰子水经三层纱布过滤加入培养基中。所述的香蕉泥是由香蕉去皮后用豆浆机打碎而成的。
[0041]实施例2
[0042]—种血叶兰种子的组织培养与快速育苗方法的步骤如下:
[0043]I)选择培养材料:将野外采集到的野生血叶兰植株上的果实外表颜色为白色或近黄色且未破裂的蒴果作为培养材料用于组织培养;、
[0044]2)原始球茎的诱导培养:包含以下步骤
[0045]①消毒处理:将步骤I中选取的果实先用质量百分比浓度为90%的酒精浸泡50s后,用无菌水冲洗干净I遍,接着进行二次消毒;所述二次消毒是将果实置于吐温20和次氯酸钠的混合溶液中消毒8-12min并用无菌水冲洗干净,所述吐温20和次氯酸钠的混合溶液中,吐温20的质量百分比浓度为0.01-0.02%,次氯酸钠的质量百分比浓度为10-15% ;
[0046]②萌发培养处理:将步骤①消毒处理过的果实用无菌水冲洗干净后用无菌解剖工具剖开果实,取出白色浆状或粉状种胚接种到胚萌发培养基上,将接种后的培养瓶置于温度20-28 °C的培养室内进行无光照培养30天,诱导种胚萌发成原始球茎,再转入温度20-25°C、光照强度为ISOOIx的条件下培养25天以强壮原始球茎,同时诱导种胚继续萌发原始球茎;
[0047]所述的胚萌发培养基由以下组分配置而成:MS基本培养基+ 土豆泥20_50g/L+椰子水30-80ml/L+脯氨酸5-lOmg/L+蔗糖20_30g/L+琼脂或卡拉胶5.0-8.0g/L, pH值为
5.0-5.4 ;
[0048]3)原始球茎的增殖培养:将上述步骤2中获得萌发的原始球茎转入原始球茎增殖培养基中进行增殖培养,在培养温度22±2°C,光照强度20001x,光照时间Sh/天的条件下,培养60天以诱导原始球茎的增殖;
[0049]所述的增殖培养基由以下组分配置而成:MS基本培养基+6-BA或6_糠氨基嘌呤KTl.5mg/L+NAA0.5mg/L+ 椰子水 40ml/L+ 白糖 30g/L+ 琼脂或卡拉胶 5.2g/L,pH 值为 5.2 ;
[0050]4)分化与壮苗培养:将上述步骤3中获得的原始球茎转入分化与壮苗培养基中,培养温度20-28°C,光照强度25001x,光照时间1h/天,培养85天,使得原始球茎分化形成健壮的具根、茎、叶的完整血叶兰植株;
[0051]所述的分化与壮苗培养基由以下组分配置而成:1/2MS基本培养基+NAA0.5mg/L+香蕉泥60g/L+白糖40g/L+活性炭1.5g/L+琼脂或卡拉胶7.5g/L,pH值为5.6。
[0052]在上述所有的步骤中,椰子水为从新鲜椰子中取出的椰子水经三层纱布过滤加入培养基中。所述的香蕉泥是由香蕉去皮后用豆浆机打碎而成的。
[0053]实施例3
[0054]I)选择培养材料:于血叶兰开花期,选择生长健壮的优良株系进行同株或异株授粉,授粉25天后,摘取果实外表颜色为白色或淡黄色且未开裂的果实作为培养材料用于组织培养;
[0055]2)原始球茎的诱导培养:包含以下步骤
[0056]①消毒处理:将步骤I中选取的果实先用质量百分比浓度为95%的酒精浸泡30s后,用无菌水冲洗干净2遍,接着进行二次消毒;所述二次消毒是将向果实倒入质量百分比浓度为0.02%的吐温20溶液,摇晃20s后,用镊子夹出果实,置于质量百分比浓度为12%次氯酸钠溶液中消毒9min ;
[0057]②萌发培养处理:将步骤①消毒处理过的果实用无菌水冲洗干净后用无菌解剖工具剖开果实,取出白色浆状或粉状种胚接种到胚萌发培养基上,将接种后的培养瓶置于温度20-28 °C的培养室内进行无光照培养20天,诱导种胚萌发成原始球茎,再转入温度20-25°C、光照强度为16001x的条件下培养15天以强壮原始球茎,同时诱导种胚继续萌发原始球茎;
[0058]所述的胚萌发培养基由以下组分配置而成:MS基本培养基+ 土豆泥20g/L+椰子水80ml/L+脯氨酸5mg/L+鹿糖30g/L+琼脂或卡拉胶5.0g/L, pH值为5.0 ;
[0059]3)原始球茎的增殖培养:将上述步骤2中获得萌发的原始球茎转入原始球茎增殖培养基中进行增殖培养,在培养温度25°C,光照强度15001x,光照时间12h/天的条件下,培养30天以诱导原始球茎的增殖;
[0060]所述的增殖培养基由以下组分配置而成:MS基本培养基+6-BA或6_糠氨基嘌呤ΚΤ0.5mg/L+NAA0.2mg/L+ 椰子水 60ml/L+ 白糖 25g/L+ 琼脂或卡拉胶 5.5g/L,pH 值为 5.0 ;
[0061]4)分化与壮苗培养:将上述步骤3中获得的原始球茎转入分化与壮苗培养基中,培养温度20-28°C,光照强度22001x,光照时间12h/天,培养60天,使得原始球茎分化形成健壮的具根、茎、叶的完整血叶兰植株;
[0062]所述的分化与壮苗培养基由以下组分配置而成:1/2MS基本培养基+NAA0.2mg/L+香蕉泥50g/L+白糖20g/L+活性炭3.0g/L+琼脂或卡拉胶5.0g/L, pH值为5.3。
[0063]在上述所有的步骤中,椰子水为从新鲜椰子中取出的椰子水经三层纱布过滤加入培养基中。所述的香蕉泥是由香蕉去皮后用豆浆机打碎而成的。
[0064]实施例4
[0065]I)选择培养材料:于血叶兰开花期,选择生长健壮的优良株系进行同株或异株授粉,授粉40天后,摘取果实外表颜色为白色或淡黄色且未开裂的果实作为培养材料用于组织培养;
[0066]2)原始球茎的诱导培养:
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