可使用常规技术制备所述药物组合物。例如，将包含病毒结构蛋白和选 自衍生自ro-i的抗原或衍生自ro-i配体的抗原的抗原的颗粒（例如CHIKVVLP或VEEV VLP)与具有生理pH(例如pH5-9、pH7)的缓冲溶液混合以制备本发明所提供的药物组 合物。
[0081] 在一个实施方案中，所述药物组合物为包含颗粒的疫苗或免疫刺激剂，所述颗粒 含有病毒结构蛋白和选自衍生自ro-i的抗原和衍生自ro-i配体的抗原的抗原。例如，本 发明提供的疫苗组合物可用于免疫疗法（例如治疗癌症）。
[0082] 在一个实施方案中，所述药物组合物为包含含有用于表达颗粒的核苷酸序列的核 酸分子的dna疫苗，所述颗粒包含病毒结构蛋白和选自衍生自ro-i的抗原和衍生自ro-i配体的抗原的抗原。在一个实施方案中，本发明提供的DNA疫苗包含含有CpG的寡核苷酸。 [0083] 本发明第三方面所提供的药物组合物可给予一次或多次。当本发明第三方面所 提供的药物组合物给予一次以上时，每次给予可使用不同的本发明第一方面所提供的颗粒 (例如CHIKVVLP或VEEVVLP)。在一个实施方案中，采用使用本发明第一方面所提供的 CHIKVVLP的免疫与使用本发明第一方面所提供的VEEVVLP的免疫的组合。例如，第一次 免疫可使用本发明第一方面所提供的CHIKVVLP，第二次免疫可使用本发明第一方面所提 供的VEEVVLP，或第一次免疫可使用本发明第一方面所提供的VEEVVLP，第二次免疫可使 用本发明第一方面所提供的CHIKVVLP。
[0084] 技术人员可确定使用本发明所提供组合物或疫苗的免疫的时间选择。例如，第二 次免疫在第一次免疫后1、2、3、4、5、6、7、8、9或10周进行。
[0085] 在一个实施方案中，本发明提供包含以下的药盒： (a) -种包含本发明第一方面所提供的颗粒的药物组合物；和 (b) 另一种包含本发明第一方面所提供的颗粒的药物组合物， 其中（a)中包含的颗粒为与（b)中包含的颗粒不同的病毒样颗粒。在该实施方案中， (a)中包含的颗粒可为基孔肯雅病毒样颗粒并且（b)中包含的颗粒可为委内瑞拉马脑炎病 毒样颗粒。
[0086] 在一个实施方案中，本发明提供包含以下的药盒： (a) -种包含本发明第一方面所提供的颗粒的药物组合物；和 (b) 另一种包含本发明第一方面所提供的颗粒的药物组合物， (c) 一种或多种药物组合物，其各自包含本发明第一方面所提供的颗粒， 其中（a)用于起始免疫，（b)和（c)用于加强免疫；并且（a)中包含的颗粒为与（b)中 包含的颗粒不同的病毒样颗粒；并且（c)中包含的颗粒与（a)和（b)中包含的颗粒不同，或 与（a)或（b)中包含的颗粒相同。
[0087] 上述药盒中包含的各个药物组合物可同时、分别或连续给予。
[0088] 本发明第一方面提供的甲病毒属或黄病毒属病毒样颗粒（例如基孔肯雅病毒或 委内瑞拉马脑炎病毒）或本发明第二方面提供的核酸分子可用于本发明第三方面所提供 的药物组合物。
[0089] 例如，包含以下或由以下组成的基孔肯雅或委内瑞拉马脑炎病毒样颗粒可用于制 备本发明第三方面提供的组合物或疫苗： 一个或多个（例如240个）基孔肯雅病毒（CHIKV)或委内瑞拉马脑炎病毒（VEEV)衣 壳； 一个或多个（例如240个）基孔肯雅病毒（CHIKV)或委内瑞拉马脑炎病毒（VEEV)的E1 ;和 一个或多个（例如240个）基孔肯雅病毒（CHIKV)或委内瑞拉马脑炎病毒（VEEV)的E2,其中Η)-1抗原插入基孔肯雅病毒（CHIKV)或委内瑞拉马脑炎病毒（VEEV)的E2内。插 入有抗原的E2可由SEQIDNo. :33-36所代表的氨基酸序列组成；E1可由SEQIDNo. :37 代表的氨基酸序列组成；衣壳可由SEQIDNo. :38代表的氨基酸序列组成；或 插入有抗原的E2可由SEQIDNo. :39-42所代表的氨基酸序列组成；E1可由SEQID No. :43代表的氨基酸序列组成；衣壳可由SEQIDNo. :44代表的氨基酸序列组成。
[0090] (4)所公开颗粒的用涂等 在第四个方面，本发明提供包含病毒结构蛋白和选自衍生自ro-i的抗原和衍生自ro-i配体的抗原的抗原的颗粒；或含有用于表达颗粒（其包含病毒结构蛋白和选自衍生自 ro-i的抗原和衍生自ro-i配体的抗原的抗原）的核苷酸序列的核酸分子用于制造用于治 疗或预防癌症或传染病、在哺乳动物（例如人）中产生抗ro-i或ro-i配体的抗体、调节免 疫应答、免疫刺激、抑制ro-i与ro-i配体之间的相互作用或抑制ro-i活性的药物组合物 或药盒的用途。还提供用于在治疗或预防癌症或传染病、在哺乳动物（例如人）中产生抗 ro-i或ro-i配体的抗体、调节免疫应答、免疫刺激、抑制ro-i与ro-i配体之间的相互作用 或抑制ro-i活性的方法中使用的本文所公开的颗粒、药物组合物或药盒。
[0091] 所述药物组合物可肌内（i.m.)、皮内（i.c.)、皮下（s.c.)、真皮内（i.d.)或腹膜 内（i.P.)给予哺乳动物（例如人）。
[0092] 在一个实施方案中，所述药物组合物为疫苗，其可应用于免疫疗法（例如治疗癌 症）。
[0093] 可治疗的癌症的实例包括，但不限于，黑色素瘤、肾癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠癌 和非小细胞肺癌。癌症的其它实例包括，但不限于，骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头或颈癌、皮肤 或眼内恶性黑色素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、肛门区域的癌症、胃癌、睾丸癌、输卵管癌、 子宫内膜癌、宫颈癌、阴道癌、外阴癌、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、食道癌、小肠癌、内分泌 系统癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、包括急性髓样白血 病、慢性髓样白血病、急性成淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病在内的慢性或急性 白血病、儿童期实体瘤、淋巴细胞淋巴瘤、膀胱癌、肾癌或输尿管癌、肾盂癌、中枢神经系统 (CNS)肿瘤、原发性CNS淋巴瘤、肿瘤血管发生、脊柱肿瘤（spinalaxistumor)、脑干胶质 瘤、垂体腺瘤、卡波济氏肉瘤、表皮样癌、鳞状细胞癌、T细胞淋巴瘤、环境诱导的癌症包括石 棉诱导的那些，及其组合。
[0094] 可治疗的传染病的实例包括，但不限于，HIV、流感、疱疹、贾第虫（Gardia)、疟 疾、利士曼原虫、（甲型、乙型和丙型）肝炎病毒、疱疹病毒（例如，VZV、HSV-I、HAV-6、HSV-II 和CMV、EB病毒）、腺病毒、流感病毒、黄病毒属、埃可病毒、鼻病毒、柯萨奇病毒、冠状病毒 (cornovirus)、呼吸道合胞病毒、聰腺炎病毒、轮状病毒、麻疹病毒、风疹病毒、细小病毒、牛 痘病毒、HTLV病毒、登革热病毒、乳头瘤病毒、软疣病毒、脊髓灰质炎病毒、狂犬病病毒、JC 病毒和虫媒病毒性脑炎病毒所致的病原性感染，细菌衣原体、立克次氏体细菌、分枝杆菌 属、葡萄球菌属、链球菌属、肺炎球菌、脑膜炎球菌和淋球菌（conococci)、克雷伯菌属、变形 杆菌属、沙雷氏菌属、假单胞菌属、军团病杆菌属、白喉、沙门氏菌属、杆菌、霍乱、破伤风、肉 毒中毒、炭疽、瘟疫、钩端螺旋体病和莱姆病细菌所致的病原性感染，真菌念珠菌属（白色 念珠菌、克柔念珠菌、光滑念珠菌、热带念珠菌，等）、新型隐球菌、曲霉菌属（烟曲霉、黑曲 霉，等）、毛霉菌目属（毛霉属、犁头霉属、根霉）、申克孢子丝菌、皮炎芽生菌、巴西副球孢子 菌、粗球孢子菌和荚膜组织胞浆菌所致的病原性感染，以及寄生虫溶组织内阿米巴、结肠小 袋虫coJi)、福氏耐格里原虫、棘阿米巴属、蓝氏贾第虫（fiari/ia 隐孢子虫属、卡氏肺囊虫、间日疟原虫、果氏巴贝虫、布氏锥虫、克氏锥虫、杜氏利什曼原虫、 刚地弓形虫和巴西日圆线虫所致的病原性感染。
[0095] 当给予哺乳动物（例如人）包含病毒结构蛋白和选自衍生自ro-i的抗原或衍生 自ro-i配体的抗原的抗原的药物组合物时，在哺乳动物的血液中产生抗ro-i或ro-i配体 的抗体。所产生的抗体可调节免疫应答、显示免疫刺激作用、抑制ro-i与ro-i配体（例如 ro-Li、ro-L2)之间的相互作用或抑制ro-i活性。
[0096] 所产生的抗体可使用常规技术人源化。使用本发明第一方面所提供的颗粒，可制 备单克隆抗体或多克隆抗体。在一个实施方案中，本发明提供用于生产抗ro-i或ro-i配 体的抗体的方法，包括给予非人哺乳动物本发明第一方面所提供的颗粒，并使非人哺乳动 物产生的抗体人源化。
[0097] 如本文所使用的，术语"抗体"指能够结合表位或抗原决定簇的分子。该术语意味 着包括整个抗体和其抗原结合片段，包括单链抗体。这样的抗体包括人抗原结合抗体片段 并且包括，但不限于，Fab、Fab'和F(ab'）2、Fd、单链Fvs(scFv)、单链抗体、二硫键-连接 的Fvs(sdFv)和包含VL或VH结构域的片段。所述抗体可来自包括鸟和哺乳动物在内的任 何动物来源。优选地，所述抗体为哺乳动物例如人、鼠、兔、山羊、豚鼠、骆驼、马等的抗体，或 其它合适的动物例如鸡的抗体。如本文所使用的，"人"抗体包括具有人免疫球蛋白的氨基 酸序列的抗体，并且包括从人免疫球蛋白文库或从一种或多种人免疫球蛋白转基因的并且 不表达内源性免疫球蛋白的动物分离的抗体，如例如，美国专利号5, 939, 598中所描述的， 所述专利的公开内容通过引用以其整体结合到本文中。
[0098] 术语"PD-1活性"指与ro-i相关的一种或多种免疫调节活性。例如，PD-1为TcR/CD28-介导的免疫应答的负调节剂。因此，调节免疫应答的实例包括，但不限于，增强TcR/ ⑶28-介导的免疫应答。
[0099] 在一个实施方案中，本发明提供用于生产本发明第一方面所提供的基孔肯雅或委 内瑞拉马脑炎病毒样颗粒的方法，包括制备设计为用于表达所述颗粒的载体、培养用该载 体转染的细胞以表达所述颗粒和回收颗粒。在该实施方案中，转染可使用常规方法进行。用 于转染的细胞可为293细胞。回收VLP可包括在用载体转染细胞后收集条件培养基，并且 可进一步包括使用超离心从条件培养基中纯化VLP。
[0100] 本发明进一步提供下列示例性实施方案（1)-(35): (1) 包含病毒结构蛋白和至少一种选自衍生自ro-i的抗原和衍生自ro-i配体的抗原 的抗原的颗粒； (2) -种颗粒，其为（1)的颗粒的衍生物； (3) (1)或（2)的颗粒，其中所述抗原为衍生自ro-l、PD-Ll或ro-L2的抗原； (4) (1)-(3)中任一项的颗粒，其中给予动物该颗粒诱导抗所述抗原的抗体并且该抗 体阻断ro-i与ro-Li的相互作用或ro-i与ro-L2的相互作用； (5) (1)-(4)中任一项的颗粒，其中所述颗粒为病毒样颗粒； (6) (1)-(5)中任一项的颗粒，其中所述颗粒为衍生自甲病毒属或黄病毒属的病毒样 颗粒； (7) (1)-(6)中任一项的颗粒，其中所述颗粒为衍生自基孔肯雅病毒或委内瑞拉马脑 炎病毒的病毒样颗粒； (8) (1)-(7)中任一项的颗粒，其中所述病毒结构蛋白包含至少一个第一连接位点，所 述至少一种抗原包含至少一个第二连接位点，并且其中病毒结构蛋白与抗原通过至少一个 第一连接位点和至少一个第二连接位点连接，并且其中所述颗粒为病毒样颗粒； (9) (1)-(8)中任一项的颗粒，其中所述病毒结构蛋白包括衣壳和/或包膜蛋白E1和 E2 ； (10) (9)的颗粒，其中至少一种衍生自ro-ι的抗原或至少一种衍生自ro-Li