包含pd-1抗原或pd-1配体抗原的病毒样颗粒的利记博彩app
【专利说明】
[0001] 相关申请的交叉引用 本申请要求于2013年7月12日提交的美国临时专利申请号61/845, 712的权益，所述 临时专利申请的全部内容通过引用结合到本文中。
技术领域
[0002] 本发明涉及包含病毒结构蛋白和衍生自ro-i或ro-i配体的抗原的病毒样颗粒， 以及包含该颗粒的组合物或药盒、其在免疫应答中的用途等。
【背景技术】
[0003] 程序性细胞死亡1或ro-i(也称为ro⑶1)为⑶28超家族的50-55kDa的I型 跨膜受体，其通过与特异性配体相互作用负调节T细胞抗原受体信号传导，并且提示在自 身耐受的维持中发挥作用。
[0004] ro-ι抗原几乎涉及免疫应答的每个方面，包括自身免疫、肿瘤免疫、感染免疫、移 植免疫、过敏和免疫赦免。
[0005] ro-i在活化T细胞、B细胞和巨噬细胞的表面上表达，（Y.Agata等人， InternationalImmunologyvol. 8，No. 5p765_772, 1996)提不与同样在免疫系统中发 挥重要调节作用的CTLA-4相比，PD-1更广泛地负调节免疫应答。
[0006] -般而言，存在对提供安全且有效的用于免疫病症例如自身免疫疾病、炎症性病 症、过敏、移植排斥、癌症、免疫缺陷和其它免疫系统-相关病症的治疗方法的需求。这些病 症中牵涉的免疫应答调节可通过ro-i途径的操纵完成。
[0007] PD-1具有两种配体，PD-L1 (程序性死亡配体1或PD⑶L1或B7-H1)和PD-L2 (程 序性死亡配体2或⑶L2或B7-DC)，为B7家族配体的成员。
[0008] 在一种方法中，阻断Η)-1及其配体（PD-L1、PD-L2或二者）的相互作用可为肿瘤 和病毒免疫疗法提供有效的方式。
[0009] US5, 629, 204和US5, 698, 520涉及与人ro-i有关的膜蛋白和编码所述蛋白的 dna，并且表明ro-i蛋白可用于治疗各种感染、免疫抑制或加速或肿瘤等。
[0010] US7, 595, 048 和US2011/0081341 涉及以抑制PD-UPD-L1 或PD-L2 诱导的免疫 抑制信号为特征的免疫增强、用于癌症或感染治疗的组合物以及使用它们的疗法。
[0011] 几家大型制药公司正在为抢先第一个进入市场而彼此竞争其ro-i抗体。此处为3 种单克隆抗体例如针对PD-1起作用的人源化单克隆IgG4抗体即Merck的Lambrolizumab (MK-3475)、完全的抗人PD-1 抗体即Bristol-MyersSquibb的Nivolumab(BMS-936558) 和不阻断PD-1 而是阻断PD-L1 的RocheGenentech的MPDL3280A。
[0012] 然而，仍强烈需要靶向ro-i的更强有效和安全的化合物。
[0013]病毒样颗粒（VLP)为模仿真正的天然病毒的组织和构象但缺乏病毒基因组的多 蛋白结构，潜在地产生更安全和更便宜的候选疫苗。当前世界范围内少数预防性的基于VLP 的疫苗已经商品化：GlaxoSmithKline的Engerix? (乙型肝炎病毒）和Cervarix? (人乳 头瘤病毒）以及MerckandCo.，Inc的RecombivaxHB? (乙型肝炎病毒）和Gardasil? (人乳头瘤病毒）为一些实例。其它基于VLP的候选疫苗在临床试验中或处于临床前评估 中，例如，流感病毒、细小病毒、诺沃克（Norwalk)和多种嵌合VLP。许多其它VLP仍局限在 小规模基础研究中，尽管其在临床前测试中成功。大规模VLP生产的含意在过程控制、监 测和优化的背景下讨论。相应地确定和讨论了主要的上游和下游技术挑战。伴随最新的 临床试验结果和最近的基于嵌合VLP的技术的发展简要介绍了成功的用于治疗或预防接 种的基于VLP的重镑炸弹疫苗（vaccineblockbuster)(ExpertRev.Vaccines9(10)， 1149-1176， 2010)。
[0014] 自从基孔肯雅病毒（Chikungunyavirus,CHIKV)在2004年从肯尼亚再度出现， 该甲病毒在非洲、欧洲和亚洲已经感染了数百万人。在缺乏疫苗或抗病毒疗法的情况下该 疾病的严重性和该流行性病毒的传播呈现了一个严重的公众健康威胁。据报道流行性基孔 肯雅病毒的VLP疫苗保护非人灵长类免受感染（NatMed. 2010March; 16(3): 334-338)。 美国专利出版号2012/0003266公开了包含一个或多个基孔肯雅病毒结构蛋白的可用于 配制诱导对感染或其至少一种症状的免疫的基孔肯雅疫苗或抗原组合物的病毒样颗粒 (VLP)。W02012/106356公开了在甲病毒属和黄病毒属-介导的疾病的预防或治疗中使用的 修饰的甲病毒属或黄病毒属病毒样颗粒（VLP)和用于提高修饰的VLP的生产的方法。（这 些引用的参考文献通过引用结合到本文中）。
[0015] 发明概述 在第一个方面，本发明提供包含病毒结构蛋白和选自衍生自ro-i的抗原和衍生自ro-i配体的抗原的抗原的颗粒。
[0016] 在第二个方面，本发明提供包含用于表达包含病毒结构蛋白和抗原的颗粒的核苷 酸序列的核酸分子，所述抗原选自衍生自ro-i的抗原和衍生自ro-i配体的抗原。
[0017] 在第三个方面，本发明提供一种药物组合物和包含药物组合物的药盒，其中所述 药物组合物包含含有病毒结构蛋白和选自衍生自ro-i的抗原和衍生自ro-i配体的抗原的 抗原的颗粒；或包含用于表达颗粒的核苷酸序列的核酸分子，所述颗粒包含病毒结构蛋白 和选自衍生自ro-i的抗原和衍生自ro-i配体的抗原的抗原；和药学上可接受的载体。 [0018] 在第四个方面，本发明提供了包含病毒结构蛋白和选自衍生自ro-i的抗原和衍 生自ro-i配体的抗原的抗原的颗粒，或包含用于表达包含颗粒（其包含病毒结构蛋白和选 自衍生自ro-i的抗原和衍生自ro-i配体的抗原的抗原）的核苷酸序列的核酸分子用于制 造用于在受试者中调节免疫反应、治疗癌症或治疗传染病的药物组合物或药盒的用途。
[0019] 附图简述 图1显示ELISA的结果，其中检测了与N端ro-1 (1-167aa)结合的抗体。
[0020] 图2显示ELISA的结果，其中检测了与ro-1-Fc结合的抗体。
[0021] 实施方案的描述 (1)包含病毒结构蛋白和诜自衍牛自PD-1的抗原和衍牛自PD-1配体的抗原的抗原的 颗粒 在第一个方面，本发明提供包含病毒结构蛋白和选自衍生自ro-i的抗原和衍生自ro-i配体的抗原的抗原的颗粒。
[0022] 本发明还提供可通过调整上述颗粒制备的上述颗粒的衍生物。修饰的实例包括， 但不限于，一个或多个氨基酸残基的添加、缺失或置换。
[0023] 本发明提供的颗粒可为由以下组成或包含以下的颗粒：i)至少一种病毒结构蛋 白和ii)至少一种衍生自ro-i的抗原或至少一种衍生自ro-i配体的抗原。所述至少一种 病毒结构蛋白可由一个或多个种类的蛋白或肽组成并自发组装以形成本发明所提供的颗 粒。在一个实施方案中，本发明提供的颗粒具有至少10nm，例如，至少20nm，优选至少50 nm的直径。在一个实施方案中，所述颗粒的分子量为100kDa- 100,000kDa，优选400kDa -30, 000kDa〇
[0024] 优选地，用于本发明的病毒结构蛋白可为从甲病毒属或黄病毒属衍生的病毒结构 蛋白。因此，本发明提供的颗粒可为病毒样颗粒，包括从甲病毒属或黄病毒属衍生的病毒样 颗粒。
[0025] 甲病毒属和黄病毒属的实例包括，但不限于，奥拉病毒（Auravirus)、巴班肯病 毒（Babankivirus)、巴马森林病毒（BarmahForestvirus) (BFV)、比巴鲁病毒（Bebaru virus)、卡巴斯欧病毒（Cabassouvirus)、基孔肯雅病毒（Chikungunyavirus) (CHIKV)、 东方马脑炎病毒（Easternequineencephalitisvirus) (EEEV)、埃拉特病毒（Eilat virus)、沼泽地病毒（Evergladesvirus)、摩根堡病毒（FortMorganvirus)、盖塔病毒 (Getahvirus)、高地J病毒（HighlandsJvirus)、孜拉加奇病毒（Kyzylagachvirus)、 马亚罗病毒（Mayarovirus)、MeTri病毒、米德尔堡病毒（Middelburgvirus)、莫斯达 斯佩德拉斯病毒（MossodasPedrasvirus)、穆坎布病毒（Mucambovirus)、恩杜穆病毒 (Ndumuvirus)、欧尼恩病毒（0'nyong-nyongvirus)、那皮舒纳病毒（Pixunavirus)、里奥 内格罗病毒（RioNegrovirus)、罗斯河病毒（RossRivervirus) (RRV)、鲑鱼胰腺疾病 病毒（Salmonpancreasdiseasevirus)、西门利启森林病毒（SemlikiForestvirus)、 辛德比斯病毒（Sindbisvirus)、南方象海豹病毒（Southernelephantsealvirus)、图 那特病毒（Tonatevirus)、特罗卡拉病毒（Trocaravirus)、乌纳病毒（Unavirus)、委内 瑞拉马脑炎病毒（Venezuelanequineencephalitisvirus) (VEEV)、西方马脑炎病毒 (Westernequineencephalitisvirus) (WEEV)、瓦塔罗阿病毒（Whataroavirus)、西尼 罗河病毒（WestNilevirus)、登革热病毒（denguevirus)、蜱传脑炎病毒（tick-borne encephalitisvirus)和黄热病毒（yellowfevervirus) 〇
[0026] 病毒结构蛋白可为衣壳蛋白、包膜蛋白、其片段或其复合体。因此，用于本发明的 病毒结构蛋白可由衣壳蛋白和/或包膜蛋白和/或其片段组成或包含衣壳蛋白和/或包膜 蛋白和/或其片段。在一个实施方案中，本发明提供的病毒样颗粒由衣壳、E2和E1组成或 包含衣壳、E2和E1。可将抗原插入E2中。例如，本发明提供的病毒样颗粒可通过组装240 个衣壳、240个E1蛋白和240个E2蛋白形成，其中Η)-1抗原插入每个E2蛋白中。
[0027] 如本文所使用的，术语"ro-i抗原"是指从ro-i衍生的抗原。优选地，ro-i为人 pd-1。衍生自ro-i的抗原可为ro-i的片段或ro-i片段的衍生物。
[0028] 如本文所使用的，术语"ro-i配体抗原"是指从ro-i的配体衍生的抗原。ro-i的 配体的实例包括，但不限于，pd-li和ro-L2。优选地，PD-1的配体为人ro-Ll或人ro-L2。 衍生自PD-L1的抗原可为ro-Li或ro-L2的片段；或ro-Li或ro-L2的片段的衍生物。 [0029] 用于在本发明提供的颗粒所包含的抗原中使用的ro-i、PD-L1或ro-L2的片段可 基于ro-i、PD-L1或ro-L2的氨基酸序列和/或其三级结构选择。
[0030] 例如，用于在抗原中使用的片段可由位于ro-l、PD-Ll或ro-L2