响，所述探针的长度通常至少是14个碱基对，最 长一般不超过30个碱基对，与目的核苷酸序列互补的长度以15-25个碱基对最佳。所述探 针自身互补序列最好少于4个碱基对，以免影响杂交效率。
[0028] 进一步，所述CYP2F1蛋白的特异性抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体。所述 CYP2F1蛋白的特异性抗体包括完整的抗体分子、抗体的任何片段或修饰（例如，，嵌合抗 体、8〇?￥、？&13、？(313'）2、？￥等。只要所述片段能够保留与0￥?2?1蛋白的结合能力即可。用 于蛋白质水平的抗体的制备时本领域技术人员公知的，并且本发明可以使用任何方法来制 备所述抗体。
[0029] 在本发明的上下文中，"CYP2F1基因"包括人CYP2F1基因以及人CYP2F1基因的任 何功能等同物的多核苷酸。CYP2F1基因包括与目前国际公共核酸序列数据库GeneBank中 CYP2F1基因（NC_000019. 10)DNA序列具有70%以上同源性，且编码相同功能蛋白质的DNA 序列；
[0030] 优选地，CYP2F1基因的编码序列包括以下任--种DNA分子：
[0031 ] (1)序列表中SEQ ID NO. 1所不的DNA序列；
[0032] (2)在严格条件下与1)限定的DNA序列杂交且编码相同功能蛋白质的DNA序列；
[0033] (3)与（1)或⑵限定的DNA序列具有70%、优选地，90%以上同源性，且编码相 同功能蛋白质的DNA分子。
[0034] 在本发明的具体实施方案中，所述CYP2F1基因的编码序列是SEQ ID NO. 1所示的 DNA序列。
[0035] 在本发明的上下文中，CYP2F1基因表达产物包括人CYP2F1蛋白以及人CYP2F1蛋 白的部分肽。所述CYP2F1蛋白的部分肽含有与骨关节炎相关的功能域。
[0036] "CYP2F1蛋白"包括人CYP2F1蛋白以及人CYP2F1蛋白的任何功能等同物。所述 功能等同物包括人CYP2F1蛋白保守性变异蛋白质、或其活性片段，或其活性衍生物，等位 变异体、天然突变体、诱导突变体、在高或低的严紧条件下能与人CYP2F1的DNA杂交的DNA 所编码的蛋白质。
[0037] 优选地，CYP2F1蛋白是具有下列氨基酸序列的蛋白质：
[0038] (1)由序列表中SEQ ID N0. 2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
[0039] (2)将SEQIDN0. 2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或 缺失和/或添加且与SEQIDN0. 2所示的氨基酸序列具有相同功能的由SEQIDN0. 2所示 的氨基酸序列衍生的蛋白质。取代、缺失或者添加的氨基酸的个数通常为1-50个，较佳地 1-30个，更佳地1-20个，最佳地1-10个。
[0040] (3)与SEQ ID N0. 2所示的氨基酸序列具有至少80%同源性（又称为序列同一 性），更优选地，与SEQ ID N0. 2所示的氨基酸序列至少约90%至95%的同源性，常为96%、 97 %、98 %、99 %同源性的氨基酸序列构成的多肽。
[0041] 在本发明的具体实施方案中，所述CYP2F1蛋白是具有SEQ ID N0. 2所示的氨基酸 序列的蛋白质。
[0042] 通常，已知的是，一个蛋白质中一个或多个氨基酸的修饰不会影响蛋白质的功能。 本领域技术人员会认可改变单个氨基酸或小百分比的氨基酸或对氨基酸序列的个别添加、 缺失、插入、替换是保守修饰，其中蛋白质的改变产生具有相似功能的蛋白质。提供功能相 似的氨基酸的保守替换表是本领域公知的。
[0043] 通过添加一个氨基酸或多个氨基酸残基修饰的蛋白质的例子是CYP2F1蛋白的 融合蛋白。对于与CYP2F1蛋白融合的肽或者蛋白质没有限制，只要所得的融合蛋白保留 CYP2F1蛋白的生物学活性即可。
[0044] 本发明的CYP2F1蛋白也包括对SEQ ID N0. 2所示的氨基酸序列的非保守修饰，只 要经过修饰的蛋白质仍然能够保留CYP2F1蛋白的生物学活性即可。在此类修饰蛋白质中 突变的氨基酸数目通常是10个或者更少，例如6个或者更少，例如3个或者更少。
[0045] 在本发明的上下文中，"诊断骨关节炎"既包括判断受试者是否已经患有骨关节 炎、也包括判断受试者是否存在患有骨关节炎的风险。
[0046] 在本发明的上下文中，"治疗骨关节炎"从疾病的状态变化来分，可以包括疾病的 缓解、疾病的完全治愈。
[0047] 本发明的优点和有益效果：
[0048] 本发明首次发现了CYP2F1基因表达与骨关节炎相关，通过检测受试者滑膜组织 中CYP2F1的表达，可以判断受试者是否患有骨关节炎、或者判断受试者是否存在患有骨关 节炎的风险，从而指导临床医师给受试者提供预防方案或者治疗方案。
[0049] 本发明发现了 一种新的分子标记物-CYP2F1基因，相比传统的检测手段，基因诊 断更及时、更特异、更灵敏，能够实现骨关节炎的早期诊断，从而降低骨关节炎的死亡率。
【附图说明】
[0050] 图1显示利用QPCR检测CYP2F1基因在滑膜细胞中的表达情况；
[0051] 图2显示利用Western blot检测CYP2F1蛋白在滑膜细胞中的表达情况；
[0052] 图3显示滑膜液对0A成纤维样滑膜细胞的增殖作用；
[0053] 图4显示CYP2F1蛋白抗体对0A成纤维样滑膜细胞增殖的抑制作用；
[0054] 图5显示利用QPCR检测siRNA对CYP2F1基因的干扰效率；
[0055] 图6显示干扰CYP2F1基因表达对0A成纤维样滑膜细胞增殖的抑制作用。
[0056] 具体的实施方式
[0057] 下面结合附图和实施例对本发明作进一步详细的说明。以下实施例仅用于说明本 发明而不用于限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条 件，例如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册（New York:Cold Spring HarborLaboratory Press，1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。
[0058] 实施例10A滑膜组织和正常滑膜组织中CYP2F1基因的表达差异
[0059] 60例0A患者的滑膜组织来自于北京协和医院骨科行膝关节置换或滑膜切除术的 0A病人。所用病例符合Altam提出的关于0A的诊断标准。40例正常滑膜组织来自于北京协 和医院骨科，为外伤手术病人关节滑膜组织。0A患者滑膜液（SF)高速离心后取上清，-80°C 储存待用。本研究中所用临床样本，均对患者进行知情告知并经本院伦理委员会通过。
[0060] 1、CYP2F1基因转录水平的检测
[0061] 1. 1滑膜组织细胞体外培养
[0062] 将无菌获取的滑膜组织用PBS清洗后，用无菌手术剪刀反复剪切成约1mm xlmm x 1mm的组织块，加入胶原酶II (0. 5mg/ml) 37°C、消化2h后，经200目纱网过滤，离心去上清 后，将细胞重悬于DMEM培养液，置于37°C，5 % C02细胞培养箱内培养。当细胞长成梭形并 成片后，进行传代培养。当细胞传至第3代后，分别加入FITC标记的小鼠抗人CD3、CD14、 ⑶19和PE标记的小鼠抗人⑶1 lb进行标记，流式细胞仪检测鉴定。上述4种标记均为阴性 的细胞为成纤维样滑膜细胞（Fibroblast-like Synoviocytes，FLS)用于本研究。
[0063] 1. 2 总 RNA 提取
[0064] 利用QIAGEN公司的组织/细胞总RNA提取试剂盒提取0A患者滑膜组织细胞和正 常滑膜组织细胞的总RNA。
[0065]1. 3逆转录
[0066] 利用TAKARA公司的逆转录试剂盒进行RNA的逆转录。
[0067] 1. 4QPCR
[0068] (1)引物设计
[0069] 根据Genbank中CYP2F1基因和GAPDH基因的编码序列设计QPCR扩增引物，由上 海生工生物工程技术服务有限公司合成。具体引物序列如下：
[0070] CYP2F1 基因：
[0071]正向引物为 5'-TCACCATTATCCGCCTTA-3'（SEQ ID N0. 3);
[0072]反向引物为5' -GGAAGATGTCGTACAACTC-3'（SEQ ID NO. 4)，
[0073] GAPDH基因：
[0074]正向引物为 5'-ITTAACTCTGGTAAAGTGGATAT-3'（SEQ ID NO.5);
[0075]反向引物为 5'-GGTGGAATCATAITGGAACA-3'（SEQ ID NO.6)。
[0076](2)按照表1配制PCR反应体系：
[0077] 其中，SYBR Green聚合酶链式反应体系购自Invitrogen公司。
[0078] 表1PCR反应体系
[0079]
[0080] (3)PCR 反应条件：95°C 12min，（95°C 20s，60°C 55s)*45 个循环。以 SYBR Green 作为荧光标记物，在Light Cycler荧光定量PCR仪上进行PCR反应，通过融解曲线分析和 电泳确定目的条带，△ ACT法进行相对定量。
[0081] 1.5统计学方法
[0082] 实验都是按照重复3次来完成的，结果数据都是以平均值土标准差的方式来表 示，采用SPSS13. 0统计软件来进行统计分析的，两者之间的差异采用t检验，认为当P〈0. 05 时具有统计学意义。
[0083] 1. 6结果
[0084] 结果如图1所示，与正常滑膜组织相