荷叶离褶伞菌株及其栽培方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于食用菌技术领域，具体涉及荷叶离褶伞菌株及其栽培方法及其栽培方 法和应用。
【背景技术】
[0002] 荷叶离裙伞（拉丁文名称Lyophyllum decastes)，隶属担子菌亚门、层菌纲、伞菌 目、白蘑科、离褶伞属，是国内外食用菌界竞相研究培育的优良食用菌。荷叶离褶伞菌肉肥 厚细腻、清香扑鼻、口感脆滑、味道鲜美、营养丰富，并且在对人体细胞的修复作用和在治疗 心血管性疾病、抗衰老等方面已显示出极大的优越性，是一种食药兼用的名贵食用菌，其食 药用价值被越来越多的人所接受和认可，未来具有广阔的市场前景。
[0003] 食用菌的常规育种方法主要包括选择育种、杂交育种、诱变育种和原生质体融合 育种。选择育种是指人工定向选择自然条件下发生的有益变异，通过长期去劣存优逐步选 育出新品种的方法。杂交育种是指种内不同品种间进行杂交，使遗传基因重新组合，并在杂 交后代中筛选出优良新品种的方法。杂交育种的方向性和目的性都比较明确，与选择育种 相比，育种周期短并且收效显著。
[0004] 迄今为止，荷叶离褶伞新品种主要以野生驯化即选择育种方法获得，但是，由于过 度的采摘，野生的荷叶离褶伞已经少之又少，选择育种愈加困难。而目前的荷叶离褶伞品种 还不能很好适应工厂化栽培的条件，在培养过程中会出现吐黄水、污染、原基发生率低、畸 形菇严重等问题，这极大的限制了它的发展。基于此，选育荷叶离褶伞新品种成为当务之 需。
【发明内容】
[0005] 本发明提供了一种荷叶离褶伞菌株及其栽培方法及其栽培方法和应用，用以解决 目前菌株栽培周期长、良品率低，无法满足工厂化栽培的条件和市场需求的问题。
[0006] 本发明提供的荷叶离褶伞菌株名称为Finc-LlO,其是通过菌株Finc-LD-2和菌株 Finc-LD-3作为亲本杂交，经系统选育获得，属于荷叶离褶伞（Lyophyllum decastes)，保藏 于中国科学院微生物研究所，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No. 11202,保藏日期为 20150813。
[0007] 其中荷叶离褶伞菌株Finc-LD-2已在中国专利CN103202175A中公开，保藏于中国 典型培养物保藏中心，地址：中国武汉市武汉大学，保藏编号为CCTCC NO.M2013006。
[0008] 荷叶离褶伞菌株Finc-LD-3已在中国专利CN103210849A中公开，保藏于保藏于中 国典型培养物保藏中心，地址：中国武汉市武汉大学，保藏编号为CCTCC NO.M2013007。
[0009] 培养所述荷叶离褶伞Finc-LlO得到的孢子也属于本发明的保护范围。
[0010] 所述荷叶离褶伞Finc-LlO作为亲本进行杂交育种中的应用也属于本发明的保护 范围。
[0011] 培养所述荷叶离褶伞Finc-LlO得到的菌丝体也属于本发明的保护范围。
[0012] 栽培所述荷叶离褶伞Finc-LlO得到的子实体也属于本发明的保护范围。
[0013] 本发明还提供了所述荷叶离褶伞Finc-LlO的子实体的一种栽培方法，包括如下 步骤：
[0014] 1)接种与发菌：将所述荷叶离褶伞Finc-LlO的栽培种接入栽培种培养基，在温度 23~28 °C，空气相对湿度75 %，二氧化碳浓度2000~3500ppm条件下培养50~55天；
[0015] 2)子实体原基形成：出菇温度设定为15°C~18°C，空气相对湿度93 %~100%， 二氧化碳浓度1000~2000ppm，前6天，光照强度10~50Lux，之后光照强度200~ 300LUX，每天间隙式开启层架灯刺激出菇，菇盖接近成熟时采收。
[0016] 优选地是，步骤1)中，所述栽培种培养基按重量百分比计，包括34-36%的栽培 种培养料和64~66 %的水，所述栽培种培养料包括木肩20%、玉米芯15%、森林腐殖质 40%、米糠10%、麸皮5%和玉米粉10%。
[0017] 本发明所述荷叶离褶伞Finc-LlO的形态特征如下：
[0018] 菌丝：白色，气生菌丝发达，菌丝致密，菌落边缘圆整；
[0019] 菌盖：直径为2± 1.8cm，颜色为浅黄色，菌盖边缘呈条状环纹，断面呈圆山型，菌 盖表面有细小绒毛，质地脆嫩；菌褶：乳白色、笔直排列；孢子印颜色为白色；
[0020] 菌柄：长度为5-13cm，中粗、菌柄上部浅黄色，下部乳白色，靠近菌盖处的菌柄内 部致密紧实，远离菌盖处菌柄中空，菌柄有鳞片，鳞片主要着生在靠近菌盖的中上部，分布 不规律，菌柄簇生。
[0021] 通过对其子实体、菌丝体及孢子形态特征的观察，判断该菌株的生物学分类命名。
[0022] 所述荷叶离褶伞Finc-LlO的子实体在食品加工中的应用也属于本发明的保护范 围。
[0023] 与现有技术相比，本发明荷叶离褶伞菌株Finc-LlO具有以下优点：
[0024] (1)子实体栽培周期短，单产高，大大提高了生产效率，降低了生产成本；
[0025] (2)单株之间以及单株内单根子实体之间的外观均一度高，有利于机械化和自动 化作业；
[0026] (3)有效圣重量比例尚达95%以上，大幅提尚了广品的可食率；
[0027] (4)采收周期集中，适宜大面积推广种植。
[0028] (5)目前荷叶离褶伞种植资源稀缺，本发明提供的菌株综合特性优良，可以作为重 要亲本从而培育出更多性能优良的菌株，丰富荷叶离褶伞种类。
[0029] 综上所述，本发明提供的技术方案，填补了荷叶离褶伞杂交育种的空白，并且获 得的新菌株具有栽培周期短且出菇时间较为集中，单产高，朵型优美，畸形菇少且外观均 一，有效菇蕾数高，非常适合于大面积推广种植，市场前景广阔。
【附图说明】
[0030] 图1是实施例2中荷叶离褶伞Finc-L10和Finc-LD-Ι的拮抗试验正面图；
[0031] 图2是实施例2中荷叶离褶伞Finc-L10和Finc-LD-2的拮抗试验正面图；
[0032] 图3是实施例2中荷叶离褶伞Finc-L10和Finc-LD-3的拮抗试验正面图；
[0033] 图4是实施例2中荷叶离褶伞Finc-L10和Finc-LD-4的拮抗试验正面图；
[0034] 图5本发明所述荷叶离褶伞Finc-LlO栽培的子实体照片；
[0035] 图6本发明所述荷叶离褶伞Finc-LD-1栽培的子实体照片；
[0036] 图7本发明所述荷叶离褶伞Finc-LD-2栽培的子实体照片；
[0037] 图8本发明所述荷叶离褶伞Finc-LD-3栽培的子实体照片；
[0038] 图9本发明所述荷叶离褶伞Finc-LD-4栽培的子实体照片。
[0039] 图中所示：
[0040] 1-Finc-LlO、2-Finc-LD-l、3-Finc-LD_2，4-Finc-LD_3，5-Finc-LD_4〇
【具体实施方式】
[0041 ] 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0042] 下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0043] 以下实施例中的Finc-LD-1、Finc-LD-2、Finc-LD-3和Finc-LD-4菌株是上海丰科 生物科技股份有限公司自主驯化的菌株，保藏于中国典型培养物保藏中心，Finc-LD-1菌 株保藏号CCTCC N0:M2013005 ;Finc-LD-2菌株保藏号CCTCC N0:M2013006 ;Finc-LD-3菌株 保藏号 CCTCC N0:M2013007;Finc-LD-4 菌株保藏号 CCTCC N0:M2013008。
[0044] 下述实施例所用各种培养基的配方如下：
[0045] 母种培养基（PDA培养基）：每1L培养基用马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g ;
[0046] 原种培养基：按重量百分比计包括38-40 %的原种培养料和60%~62%的水，所 述原种培养料按重量百分比计包括木肩50%、米糠25%、麸皮15%和玉米粉10%。
[0047] 栽培种培养基：按重量百分比计包括34-36%的栽培种培养料和64 %~66 %的 水，所述栽培种培养料按重量百分比计包括木肩20%、玉米芯15%、森林腐殖质40%、米糠 10%、麸皮5%和玉米粉10%。
[0048] 实施例1杂交获得Finc-L10
[0049] 采用杂交育种方法获取荷叶离褶伞菌株Finc-LlO。
[0050] 具体步骤如下：
[0051] 1)选择亲本菌株：选取由上海丰科生物科技股份有限公司通过野生驯化的菌株 Finc_LD_2 和 Finc_LD_3 为未本；
[0052] 2)配制母种培养基、原种培养基和栽培种培养基：各培养基配方已经给出，在此 不再赘述；
[0053] 3)担孢子的分离：将Finc-LD-2和Finc-LD-3的菌盖分别置于培养皿中，24小 时后，收集落在培养皿中的孢子，在无菌水中稀释成适当的浓度，并涂布在PDA培养基平板 上。在23°C下培养25天，待孢子萌发后用接种环分别接种到PDA斜面试管上。将这些试 管在23°C下培养25天，然后从所述的试管中分离出菌丝，并在显微镜下观察锁状联合的形 成。将没有锁状联合的菌株储存在冰箱中备用；
[0054] 4)杂交：将一个单核体和另一个单核体彼此相隔2. 5cm接种到新鲜的马铃薯琼脂 板中，然后在恒温培养箱中23°C下培养20天。分离菌丝并通过显微镜观察以确定锁状联合 的形成，选择具有锁状联合的菌株。通过所述单单杂交的方法获得杂合子300个；
[0055] 5)把获得的杂合子根据常规的方法进行栽培试验和筛选；
[0056] 6)获得目标菌株：通过系统筛选，从300个杂合子中，获得一个荷叶离褶伞菌 株，培养及栽培周期短，单产高，朵型优美，瘤盖菇出现率低，可食率高，该菌株被命名为 Finc-LlOo
[0057] 实施例2拮抗实验
[0058] 本发明Finc-L10和2个亲本菌株Finc-LD-2、Finc-LD-3以及2株对照菌株 Finc-LD-3, Finc-LD-4为试验材料，所用培养基为PDA培养基。
[0059] Finc-L10 和 Finc-LD-1，Finc-LD-2, Finc-LD-3, Finc-LD-4 在平板培养基上分别 对峙接种和培养，接种点相距2. 5cm，23°C恒温培养25天，本试验结果请参阅表1。
[0060] 表1不同荷叶离褶伞菌株间拮抗试验
[0062] 如图1-4所示，在对峙培养菌落交界处，Finc-L10和Finc-LD-1，Finc-LD-2， Finc-LD-3, Finc-LD-4 之间有明显拮抗线，说明 Finc-L10 是与 Finc-LD-1，Finc-LD-2， Finc-LD-3, Finc-LD-4不同的荷叶离裙伞菌株。<