由于改造后的培养基自身具有 杀菌、抗菌或抑菌作用，能有效控制组织培养过程中的污染问题，又不会对巨芒生长产生毒 害或抑制，即不影响巨芒的正常生长，从根本上简化了巨芒组织培养。
[0030] 本发明具有如下有益效果：
[0031] 1.本发明的巨芒化学消毒组培方法中，培养容器和培养基都无需高温高压灭菌， 减少了工作量和能源消耗，简化了巨芒组培环节，降低了巨芒组培成本。
[0032] 2.本发明的巨芒化学消毒组培方法，操作简单，只要按不同的培养基配方配制后 即可，实用性强，推广性好。
[0033] 3.本发明的巨芒化学消毒组培方法与常规的巨芒组培方法对比，可以降低成本 10%以上。
【具体实施方式】
[0034] 为了进一步阐明本发明而不是限制本发明，以下结合实施例加以说明。
[0035] 实施例一：一种巨芒化学消毒组培方法
[0036] 一种巨芒化学消毒组培方法，包括以下步骤：
[0037] 1.培养容器消毒：将培养瓶、瓶盖及接种用的不锈钢盘在100mg/L次氯酸钠 +10mg/L乳酸链球菌素+100mg/L丙酸妈的水溶液中浸泡不少于10h，保存备用；
[0038] 2?培养基配制：愈伤组织诱导培养基为MS+3mg/L 2,4-D+lg/L AC+70mg/L次氯酸 钠+0. 3mg/L+60mg/L特美汀十二烷基磺酸钠+30g/L蔗糖+3. 5g/L琼脂粉，pH5. 8 ;分化培养 基为：MS+5mg/L 6-BA+O. 3mg/L NAA+70mg/L 次氯酸钠 +60mg/L 特美汀 +0? 3mg/L 十二烷基 磺酸钠+30g/L蔗糖+3. 5g/L琼脂粉，pH5. 8 ;生根培养基为1/2MS+0. 3mg/L NAA+70mg/L次 氯酸钠+60mg/L特美汀+0. 3mg/L十二烷基磺酸钠+30g/L蔗糖+3. 5g/L琼脂粉，pH5. 8 ;配 制培养基时，先称各培养基配方中蔗糖和琼脂粉，加培养基总体积1/2的自来水，加热至琼 脂粉完全溶解，再按各培养基配方配齐其他原料后，定容，然后用lmol/L的NaOH或lmol/L 的HCl调pH值至5. 8,分装到消毒过的培养容器中，封口，冷却凝固后备用；
[0039] 3.愈伤组织诱导培养：于巨芒的旗叶期，截取幼穗的长度为10-20cm，去除外层苞 叶，仅留一片内叶。先用70%的酒精表面消毒lmin，蒸馏水清洗3次，再用镊子剥去内叶， 2%的次氯酸钠消毒10min，无菌水冲洗3-4次。在超净工作台上将幼穗切成2mm的小段， 放在愈伤组织诱导培养基上培养，每周转接一次。培养室温度为25~28°C，暗培养；4周后 转到光照培养，光照强度为1500~20001x。
[0040] 4.分化培养：挑取诱导培养的部分黄绿色愈伤组织，接种到分化培养基中，培养4 周成为不具根的小苗，每30d转接一次；培养室温度为26°C，光照12h，光照强度为2000~ 30001x ；
[0041] 5.生根培养：将分化培养获得的不具根小苗，接种到生根培养基上，培养25d后成 为完整植株；培养室温度为25°C，光照16h，光照强度为2000~30001x;
[0042] 6.瓶苗移栽：将生根培养获得的完整植株取出，洗净根部的培养基，用800倍的 多菌灵浸泡30min后移栽至大棚的耕作土中，大棚上层用遮光网遮盖，移栽的环境温度为22 ~28。。。
【主权项】
1. 一种巨芒化学消毒组培方法，包括培养容器消毒、培养基配制、愈伤组织诱导培养、 分化培养、生根培养和瓶苗移栽，其特征在于： (1) 培养容器消毒：将培养瓶、瓶盖及接种用的不锈钢盘在l〇〇mg/L次氯酸钠+10mg/L 乳酸链球菌素+l〇〇mg/L丙酸钙的水溶液中浸泡不少于10h，保存备用； (2) 培养基配制：愈伤组织诱导培养基为MS+2~5mg/L2,4-D+0. 5~2g/LAC+50~ 100mg/L次氯酸钠+50~100mg/L特美汀+0? 1~0? 5mg/L十二烷基磺酸钠+30g/L鹿糖 +3. 5g/L琼脂粉，pH5. 8 ;分化培养基为：MS+3 ~8mg/L6-BA+0. 1 ~0? 5mg/LNAA+50 ~ 100mg/L次氯酸钠+50~100mg/L特美汀+0? 1~0? 5mg/L十二烷基磺酸钠+30g/L鹿糖 +3. 5g/L琼脂粉，pH5. 8 ;生根培养基为 1/2MS+0. 1 ~0? 5mg/LNAA+50 ~100mg/L次氯酸 钠+50~100mg/L特美汀+0. 1~0. 5mg/L十二烷基磺酸钠+30g/L蔗糖+3. 5g/L琼脂粉， pH5. 8 ;所述MS培养基为1962年，Murashige和Skoog公开的MS培养基；所述6-BA，指6-苄 氨基嘌吟；所述NAA，指^ -萘乙酸；所述AC，指活性炭；配制培养基时，先称各培养基配方 中蔗糖和琼脂粉，加培养基总体积1/2的自来水，加热至琼脂粉完全溶解，再按各培养基配 方配齐其他原料后，定容，然后用lmol/L的NaOH或lmol/L的HCl调pH值至5. 8,分装到消 毒过的培养容器中，封口，冷却凝固后备用； (3) 愈伤组织诱导培养：于巨芒的旗叶期，截取幼穗的长度为10-20cm，去除外层苞叶， 仅留一片内叶；先用体积比为70%的酒精表面消毒lmin，蒸馏水清洗3次，再用镊子剥去内 叶，体积比为2%的次氯酸钠消毒lOmin，无菌水冲洗3-4次。在超净工作台上将幼穗切成 2mm的小段，放在愈伤组织诱导培养基上培养，每周转接一次；培养室温度为25~28°C，暗 培养；4周后转到光照培养，光照强度为1500~20001x; (4) 分化培养：挑取诱导培养获得的部分黄绿色愈伤组织，接种到分化培养基中，培养 4周成为不具根的小苗，每30d转接一次；培养室温度为26°C，光照12h，光照强度为2000~ 30001x； (5) 生根培养：将分化培养的不具根小苗，接种到生根培养基上，培养25d后成为完整 植株；培养室温度为25°C，光照16h，光照强度为2000~30001x; (6) 瓶苗移栽：将生根培养获得的完整植株取出，洗净根部的培养基，用800倍的多菌 灵浸泡30min后移栽至大棚的耕作土中，大棚上层用遮光网遮盖，移栽的环境温度为22~ 28。。。2. 根据权利要求1所述的一种巨芒化学消毒组培方法，其特征在于所述愈伤组织诱导 培养基为MS+3mg/L2,4-D+lg/LAC+70mg/L次氯酸钠 +60mg/L特美汀 +0? 3mg/L十二烷基 磺酸钠+30g/L蔗糖+3. 5g/L琼脂粉，pH5. 8。3. 根据权利要求1所述的一种巨芒化学消毒组培方法，其特征在于所述分化培养基 为：MS+5mg/L6-BA+O. 3mg/LNAA+70mg/L次氯酸钠 +60mg/L特美汀 +0? 3mg/L十二烷基磺 酸钠+30g/L蔗糖+3. 5g/L琼脂粉，pH5. 8。4. 根据权利要求1所述的一种巨芒化学消毒组培方法，其特征在于所述生根培养基为 1/2MS+0. 3mg/LNAA+70mg/L次氯酸钠+60mg/L特美汀+0? 3mg/L十二烷基磺酸钠+30g/L蔗 糖+3. 5g/L琼脂粉，pH5.8。
【专利摘要】本发明涉及一种巨芒化学消毒组培方法，包括培养容器消毒、培养基配制、愈伤组织诱导培养、分化培养、生根培养和瓶苗移栽。本发明的巨芒化学消毒组培方法，利用化学试剂达到灭菌或抑菌的目的，在配制培养基的过程中，培养容器和培养基都无需高温高压灭菌，减少了工作量和能源消耗，简化了巨芒组培环节；并且操作简单，只要按不同的培养基配方配制即可；实用性强，推广性好，还可以有效降低巨芒的组培成本，一般可降低成本10％以上。
【IPC分类】A01H4/00
【公开号】CN104885941
【申请号】CN201510274038
【发明人】袁照年, 林庆良
【申请人】福建农林大学
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2015年5月26日