033]与图1类似，所述试剂盒包括底部内置有凹槽的盒体，盒体内设置有酶联板、试剂瓶和样品管。
[0034]盒体内俯视图如图2所示，所述凹槽包括用于放置酶联板的凹槽21、用于放置试剂瓶的凹槽和用于放置样品管的凹槽41。所述试剂瓶凹槽为十个，凹槽31最大，用于放置终止液瓶;凹槽32最小，与其相同大小的凹槽用于放置酶标抗体瓶、标准品瓶(第一标准品瓶和第二标准品瓶)、检测抗体瓶(第一检测抗体瓶和第二检测抗体瓶)、底物瓶和稀释液瓶，凹槽33较大，与其相同大小的凹槽用于放置洗涤液瓶和封闭瓶。所述样品管为四个，排列于试剂瓶一侧。
[0035]其中，第一标准品组分为纤维蛋白原，第二标准品组分为D-二聚体，浓度分别为16yg/L，体积分别为15mL。
[0036]酶标抗体:为β-半乳糖苷酶标记的链霉亲和素，体积15mL。
[0037]底物液:TMB底物液，成分为3，3，5，5-四甲基联苯胺底物溶液，体积浓度为I%，体积为15mL。
[0038]洗涤液:PBS缓冲液，即磷酸缓冲盐溶液，浓度为12g/L，体积为50mL。
[0039]稀释液:稀释液为牛血清白蛋白，浓度为lg/L，体积为15mL。
[0040]封闭液:成分为牛血清白蛋白，体积浓度为I%，体积为50mL。
[0041 ] 终止液:终止液为双蒸水180ml，加浓硫酸至200ml。
[0042]第一捕获抗体:为兔抗人FIB抗体，组分为兔抗人FIB抗体、抗体稀释液5%，能与纤维蛋白原结合形成第一捕获抗体-抗原复合物。
[0043]第二捕获抗体:为兔抗人DDM抗体，组分为兔抗人DDM抗体，抗体稀释液5%，能和D-
二聚体结合形成第二捕获抗体-抗原复合物。
[0044]第一检测抗体:为鼠抗人FIB抗体，可与第一捕获抗体-抗原复合物形成第一捕获抗体-抗原-第一检测抗体复合物。
[0045]第二检测抗体:为鼠抗人DDM抗体，可与第二捕获抗体-抗原复合物形成第二捕获抗体-抗原-第二检测抗体复合物。
[0046]本实施例所述酶联板的制备过程如下:
[0047]本实施例选用96孔酶联板，包括间隔平行排列的第一样孔和第二样孔。用稀释液分别将第一捕获抗体和第二捕获抗体稀释为100yg/ml，取200μ1分别加入到酶联板第一样孔和第二样孔中，4°C放置过夜后，用洗涤剂洗板，用封闭液在4°C下封闭14小时，甩干后在30°C下烘干12小时，得到间隔平行包被有抗纤维蛋白原和D-二聚体抗体的酶联板。
[0048]本实施例所述试剂盒的使用过程如下:
[0049]1.标准曲线的绘制
[0050](I)纤维蛋白原标准曲线的绘制
[0051]将第一标准品稀释成不同浓度，分别为16、10.67、8、5.33、4、2.67、2、1.3、1、0.67、0.5、0.25、(^8/1111，取1648/1111第一标准品10(^1加入上述包被有抗纤维蛋白原抗体的酶联板第一样孔上，37°C下作用I小时，洗板后，将ΙΟΟμΙ第一检测标准品抗体加入酶联板中，37°C下作用I小时，洗板后，加入100μ1酶标抗体，37 °C下作用I小时，洗板后，加入10mL底物液TMB，37 °C下作用I小时，加入10mL终止液，37 °C下作用I小时后，用酶标仪在450nm处测定吸光度，以标准品浓度为横坐标、吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
[0052](2)D_ 二聚体标准曲线的绘制
[0053]将第二标准品稀释成不同浓度，分别为16、10.67、8、5.33、4、2.67、2、1.3、1、0.67、0.5,0.25、0yg/ml，取16yg/ml第二标准品100μ1加入上述包被有抗D-二聚体抗体的酶联板第二样孔上，37°C下作用I小时，洗板后，将100μ1第二检测标准品抗体加入酶联板中，37°C下作用I小时，洗板后，加入100μ1酶标抗体，37 °C下作用I小时，洗板后，加入10mL底物液TMB，37 °C下作用I小时，加入10mL终止液，37 °C下作用I小时后，用酶标仪在450nm处测定吸光度，以标准品浓度为横坐标、吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
[0054]2.样品的检测
[0055]收集待测样品后，稀释100倍，按照上述标准曲线的测试步骤，将标准品换为待测样品，在450nm处检测吸光度，通过标准曲线分别计算出样品中纤维蛋白原和D-二聚体的浓度。
[0056]综上所述，本实用新型所述试剂盒可同时检测D-二聚体和纤维蛋白原的含量，使得诊断效果更加准确，更有效的进行弥漫性血管内凝血的诊断、静脉血栓栓塞症的排除诊断，血栓形成过程及溶栓治疗的检测以及肿瘤、妊娠高危症与先兆子痫的辅助诊断，具有广泛的应用前景。
【主权项】
1.一种D-二聚体和纤维蛋白原ELISA试剂盒，包括设置有凹槽的盒体(I)，其特征在于，所述盒体(I)内设置有酶联板(2)、封板膜和放置于凹槽上的试剂瓶(3); 所述酶联板(2)包括基板和设置于基板上的样孔，所述样孔包括间隔平行排列的第一样孔和第二样孔，所述第一样孔包被有抗纤维蛋白原抗体，所述第二样孔包被有抗D-二聚体抗体。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其中，所述第二样孔的半径为第一样孔直径的1-2倍。3.根据权利要求2所述的试剂盒，其中，所述第一样孔的数量为25-50个。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其中，所述第二样孔的数量为25-50个。5.根据权利要求4所述的试剂盒，其中，所述试剂瓶包括检测抗体瓶、标准品瓶、酶标抗体瓶和底物液瓶。6.根据权利要求5所述的试剂盒，其中，所述试剂瓶还包括洗涤液瓶、稀释液瓶和终止液瓶。7.根据权利要求6所述的试剂盒，其中，所述试剂瓶还包括用来盛装待测样品的样品管⑷。8.根据权利要求5所述的试剂盒，其中，所述检测抗体瓶的体积为1mL?20mL，标准品瓶的体积为I OmL?2 OmL。9.根据权利要求5所述的试剂盒，其中，所述酶标抗体瓶的体积为1mL?20mL，底物液瓶的体积为I OmL?2 OmL。10.根据权利要求6所述的试剂盒，其中，所述洗涤液瓶的体积为50mL?10mL，稀释液瓶的体积为I OmL?20mL，终止液瓶的体积为100_300mL。
【专利摘要】本实用新型涉及医疗检测仪器技术领域，具体涉及D-二聚体和纤维蛋白原ELISA试剂盒，该试剂盒包括设置有凹槽的盒体(1)，其特征在于，所述盒体(1)内设置有酶联板(2)、封板膜和放置于凹槽上的试剂瓶(3)；所述酶联板(2)包括基板和设置于基板上的样孔，所述样孔包括间隔平行排列的第一样孔和第二样孔，所述第一样孔包被有抗纤维蛋白原抗体，所述第二样孔包被有抗D-二聚体抗体。所述试剂盒能够联合检测D-二聚体和纤维蛋白原的含量，使得诊断效果更加准确，更有效地进行弥漫性血管内凝血的诊断、静脉血栓栓塞症的排除诊断、血栓形成过程及溶栓治疗的检测以及肿瘤、妊娠高危症与先兆子痫的辅助诊断，具有广泛的应用前景。
【IPC分类】G01N33/543, G01N33/68
【公开号】CN205301329
【申请号】
【发明人】刘鹏飞, 韩雪, 姬晓兵, 杨冰, 邹庆薇, 陈威潼
【申请人】天津脉络生物科技有限公司
【公开日】2016年6月8日
【申请日】2015年12月22日