一种假丝酵母菌菌株及其应用，以及加工普洱茶的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物技术领域，具体而言，设及一种假丝酵母菌菌株及其应用，W及加 工普巧茶的方法。
【背景技术】
[0002] 随着现代生物技术的发展，酵母菌已经广泛地应用于人民生活当中的很多方面， 如酿酒、发酵果汁、发酵面包、制作乳制品、制造美味等。酵母有着天然丰富的营养体系，是 一种纯天然、无污染、生物态的健康营养源。酵母被营养界誉为最有魅力的营养品。据报道， 酵母中含有50多种营养成分，人体健康所必须的蛋白质、维生素 B群、矿物质、核酸等都可 W从酵母中获得。
[0003] 在传统的普巧茶渥堆发酵中，微生物、湿热作用、氧化及酶促反应等综合作用使普 巧茶内含物质发生一系列转化，在6-8周的时间内形成普巧茶所独有的品质特征，运其中 微生物发挥着重要的作用。
[0004] 微生物资源丰富、代谢活跃，普巧茶发酵工艺革新的技术突破需要对微生物资源 进行挖掘和开发利用。目前还没有将假丝酵母菌（Candida blankii)用于普巧茶的发酵加 工中的报道。
【发明内容】
[0005] 本发明提供了一种假丝酵母菌菌株及其应用，W及加工普巧茶的方法。
[0006] 具体而言，本发明提供了：
[0007] 一种假丝酵母菌（Candida blankii)菌株，其保藏编号为CGMCC No. 8682,已于 2014年1月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中屯、（CGMCC)。
[0008] 本发明还提供了一种加工普巧茶的方法，包括将分离纯化的假丝酵母菌 (Candida blankii)接种于大叶种晒青毛茶中，进行发酵培养。
[0009] 优选地，所述大叶种晒青毛茶为已潮水的大叶种晒青毛茶。
[0010] 优选地，所述已潮水的大叶种晒青毛茶的含水量为基于潮水之前的晒青毛茶的总 重量计为20-40% (m/m)。
[0011] 优选地，将处于生长指数期的所述假丝酵母菌接种于所述的晒青毛茶中。
[0012] 优选地，所述假丝酵母菌的接种量为每克所述的晒青毛茶接种5. ΟΧΙΟ4至 1. ΟΧ1〇6个。
[0013] 优选地，在所述接种之前，对所述的晒青毛茶进行灭菌处理。
[0014] 优选地，所述发酵培养在20-50°C的条件下发酵2-6周。
[0015] 优选地，所述发酵培养在25-45Γ的条件下发酵2-4周。
[0016] 优选地，在所述发酵培养时，对培养物进行补水。
[0017] 优选地，在所述发酵培养时，对培养物进行翻堆。
[0018] 优选地，所述假丝酵母菌为保藏编号为CGMCC No. 8682的假丝酵母菌菌株。
[0019] 本发明还提供了假丝酵母菌（Candida blankii)在普巧茶加工中的应用。
[0020] 优选地，所述假丝酵母菌为保藏编号为CGMCC No. 8682的假丝酵母菌菌株。
[0021] 本发明与现有技术相比具有W下优点和积极效果：
[0022] 1.本发明从渥堆普巧茶发酵样品中分离得到假丝酵母菌（Candida blankii)， 并且首次将假丝酵母菌应用于普巧茶的发酵加工中。本发明发现，将该假丝酵母菌接种 到大叶种晒青毛茶中，经过一段时间的发酵后，可W得到汤色深红略浑、甜感明显、具有槐 花香高扬持久特点的普巧熟茶。在20-50°C条件下发酵2-4周，普巧茶中的茶氨酸含量为 1. 5-2. 1 % (m/m)，茶褐素含量为7. 4-12. 4% (m/m)，可溶性糖含量为1. 2-2. 9% (m/m)，水浸 出物含量为26. 3-38. 8% (m/m)。将假丝酵母菌（Candida blankii)用于普巧茶的加工不 仅能保持普巧茶原有的品质，而且能增加普巧茶的特殊香气和汤色的明亮程度，而且缩短 了发酵的周期。此外，本发明通过进一步摸索和优化该假丝酵母菌应用于普巧茶加工时的 发酵条件，进一步改善了上述有益效果。运为普巧茶滋味的丰富和新产品的开发提供了重 要的应用基础，对普巧茶产业的发展发挥了积极的作用。
[0023] 2.本发明提供了一种假丝酵母菌（Candida blankii)菌株，其保藏编号为CGMCC No. 8682。该菌株在普巧茶的发酵加工中尤其能够提供上述有益效果。
[0024] 生物材料保藏信息
[00巧]本发明提供的假丝酵母菌（Candida blankii)TMCC 70011菌株已于2014年1月 6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中屯、（CGMCC)，保藏地址：北京市朝 阳区北辰西路1号院3号，邮编：100101,保藏编号为：CGMCC No. 8682。
【具体实施方式】
[00%] W下通过【具体实施方式】的描述对本发明作进一步说明，但运并非是对本发明的限 审IJ，本领域技术人员根据本发明的基本思想，可W做出各种修改或改进，但是只要不脱离本 发明的基本思想，均在本发明的范围之内。
[0027] 本发明一个方面提供了一种假丝酵母菌（Candida blankii)菌株（即，TMCC 70011菌株）。该菌株已于2014年1月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微 生物中屯、（CGMCC，北京市朝阳区北辰西路1号院3号），保藏编号为CGMCC No. 8682。
[0028] 本发明所述的假丝酵母菌（Candida blankii)是一种布朗克假丝酵母菌。下文将 该假丝酵母菌（Candida blankii)统称为"布朗克假丝酵母菌"。
[0029] 本发明的发明人通过大量的实验研究，应用罗氏高通量454测序技术和Miseq测 序技术对普巧茶不同时期的渥堆发酵样品进行了分析，发现了布朗克假丝酵母菌的存在， 之后通过纯培养技术得到了所述TMCC 70011菌株。
[0030] 所述TMCC 70011菌株在普巧茶的渥堆发酵过程中，利用传统渥堆普巧茶发酵样 品，经平板稀释涂布、初筛、复筛、纯化培养等工序而获得。TMCC 70011菌株可使用常规的 PDA培养基（葡萄糖20g，±豆200g，琼脂糖2g，蒸馈水1000血，pH自然化8-7. 3))、ISP2号 培养基（蛋白腺4g，葡萄糖4g，酵母浸膏5g，琼脂糖2g，蒸馈水lOOOmL，抑自然化.8-7. 3)) 等多种培养基进行复苏活化。
[0031] 所述TMCC 70011菌株的形态学特征为：在ISP 2号培养基上培养48小时后观察， 菌落整齐呈奶油色，表面湿润有光泽，边缘无權皱，直径约0. 5mm左右。显微镜下观察，细胞 呈长楠圆形，有假丝菌。在无氧条件下也能缓慢生长，为兼性厌氧菌，生长溫度在20-5(TC之 间。
[0032] 所述TMCC 70011菌株的理化特征为：
[0033] (1)对TMCC 70011菌株进行唯一碳源或唯一氮源利用实验呈阳性的物质如下：
[0034]
[0035] (2)TMCC 70011菌株的酶活性实验阳性结果如下：
[0036]
[0037] 通过测序，所述TMCC 70011菌株的18S rRNA基因序列如序列表中的序列1所示， ITS序列如序列表中的序列2所示。
[0038] 本发明的TMCC 70011菌株在普巧茶的发酵加工中具有特别良好的效果，其不仅 能保持普巧茶原有的品质，而且能增加普巧茶的特殊香气和汤色的明亮程度，得到汤色深 红略浑、甜感明显、具有槐花香高扬持久特点的普巧熟茶。此外还能缩短发酵的周期。运为 普巧茶滋味的丰富和新产品的开发提供了重要的应用基础，对普巧茶产业的发展发挥了积 极的作用。
[0039] 然而，传统的普巧茶发酵需要大概6-8周的时间，且刚出堆的熟茶堆味较重，汤色 红褐略混，需要经过一段时间的纯化才能达到较好的品质。
[0040] 本发明另一个方面提供了一种加工普巧茶的方法，包括将分离纯化的假丝酵母 菌（Candida blankii)接种于大叶种晒青毛茶中，进行发酵培养。
[0041] 本发明的发明人发现当将布朗克假丝酵母菌接种到已潮水的普巧晒青毛茶中，经 过一段时间的发酵后，可W得到汤色深红略浑、甜感明显、具有槐花香高扬持久特点的普巧 熟茶。将布朗克假丝酵母菌用于普巧茶的加工不仅能保持普巧茶原有的品质，而且能增加 普巧茶的特殊香气和汤色的明亮程度，而且缩短了发酵的周期。因此，本发明首次将纯化的 布朗克假丝酵母菌应用到了普巧茶的发酵加工中。
[0042] 本发明的布朗克假丝酵母菌是普巧茶发酵中的优势菌群之一，其发达的酶系对普 巧茶内含物质的转化发挥着重要的作用，同时酵母还有着丰富的营养物质，如蛋白质、维生 素等，运对普巧茶品质的形成有着重要的意义。
[0043] 优选地，在本发明的方法中，所述大叶种晒青毛茶为已潮水的大叶种晒青毛茶。 所述已潮水的大叶种晒青毛茶的含水量优选为基于潮水之前的晒青毛茶的总重量计为 20-40% (m/m)。
[0044] 本文所用的术语"潮水"是指在渥堆前对晒青普巧毛茶人为加水至一定含水量。如 本领域已知的，大叶种晒青毛茶是由大叶种茶树鲜叶经摊惊、杀青、揉抢、渥黄、干燥等工序 制作而成。
[0045] 在提及已潮水的大叶种晒青毛茶的含水量时，其含水量按照W下公式计算：
[0046] 含水量=所加水的质量/加水之前晒青毛茶的总质量