一种香蕉枯萎病的生物防治方法及其生防制剂的利记博彩app
【技术领域】
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[0001 ]本发明属于香蕉病害生物防治领域，具体涉及一种香蕉枯萎病的生物防治方法及其生防制剂。
【背景技术】
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[0002]香蕉枯萎病是一种侵染香蕉植株维管束的病害，其主要特征是病株凋萎和维管束变色腐烂，是一种毁灭性病害，是国际植物检疫对象，由尖孢镰刀菌古巴专化型(Fusariumoxysporum f.sp.cubense)侵染引起。尖孢镰刀菌(F.0xysporum)是一种世界性分布的土传病原真菌，寄主范围广泛，可引起瓜类、茄科、香蕉、棉、豆科及花卉等100多种植物枯萎病的发生。尖孢镰刀菌属半知菌类(Imperfecti fungi)、从梗孢目(Moniliales)、瘤座孢科(Tuberculariaceae)、镰刀菌属(Fusarium)。病原菌在土壤中存活时间达数年之久，一般减产20%以上，严重的田块甚至绝收。
[0003]带病蕉苗和带病菌土壤是香蕉枯萎病初侵染源。高温多雨、土壤酸性、砂壤土、月巴力低、土质黏重、排水不良、下层土渗透性差和耕作伤根等因素，有利于病害发生。感病的春植蕉一般在6-7月开始发病，8-9月加重，10-11月进入发病高峰。香蕉枯萎病通过带菌的香蕉种苗、土壤和农机具等调运和搬移进行远距离传播;通过带菌的水、分生孢子进行近距离扩散。
[0004]香蕉枯萎病传统的防治方法主要有化学农药防治和栽种抗病品种。化学农药防治不仅效果一般，还会污染环境和影响香蕉品质;抗病品种大多只能抗香蕉枯萎病单个生理小种，在其他生理小种入侵时存在大面积爆发的危险。香蕉枯萎病的生物防治是目前最受关注的方法，因此，开发香蕉枯萎病的生物防治方法及其生防制剂对蕉农和香蕉产业意义重大。
【发明内容】
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[0005]本发明的目的在于提供一种香蕉枯萎病的生物防治方法及其生防制剂。
[0006]本发明的香蕉枯萎病的生物防治方法包括:香蕉组培苗移栽时枯萎病拮抗菌定殖、香蕉苗大田移栽时枯萎病拮抗菌定殖、香蕉植株生长期枯萎病拮抗菌定殖，具体为:
[0007]A.香蕉组培苗移栽时枯萎病拮抗菌定殖:在香蕉组培苗移栽后喷施香蕉枯萎病拮抗复合微生物菌剂或将香蕉枯萎病拮抗复合微生物菌剂拌入组培苗移栽基质或土壤;香蕉枯萎病拮抗复合微生物菌剂稀释200-1000倍喷施，每隔10-15天喷施一次，共三次;香蕉枯萎病拮抗复合微生物菌剂拌入组培苗移栽基质的量为每10kg基质中加入0.5-5.0kg香蕉枯萎病拮抗复合微生物菌剂。
[0008]B.香蕉苗大田移栽时枯萎病拮抗菌定殖:在香蕉苗大田移栽前塘施香蕉枯萎病拮抗生物有机肥，移栽后灌施香蕉枯萎病拮抗复合微生物菌剂;香蕉枯萎病拮抗生物有机肥在香蕉移栽前按每株2-10kg施入塘内；香蕉枯萎病拮抗复合微生物菌剂在香蕉苗移栽后稀释200-1000倍液灌施，每株2-10kg。
[0009]C.香蕉植株生长期枯萎病拮抗菌定殖:在香蕉生长期追施香蕉枯萎病拮抗生物有机肥和(或)香蕉枯萎病拮抗复合微生物菌剂;香蕉枯萎病拮抗生物有机肥在香蕉植株周围开沟穴施，每株5_20kg，每个月追施一次，共3-4次；香蕉枯萎病拮抗复合微生物菌剂稀释200-1000倍后灌施香蕉根部，每株5-20kg，每个月追施一次，共3-4次。
[0010]上述A步骤所述香蕉组培苗苗移栽时枯萎病拮抗菌的两种定殖方式能单独采用一种，亦能两种同时米用；
[0011 ]上述B步骤所述香蕉苗大田移栽时枯萎病拮抗菌的定殖，能单独采用含香蕉枯萎病拮抗菌剂的复合微生物菌剂或生物有机肥进行定殖，亦能两者同时采用进行定殖；
[0012]上述C步骤所述香蕉植株生长期枯萎病拮抗菌定殖，能单独追施含香蕉枯萎病拮抗菌剂的复合微生物菌剂或生物有机肥，亦能两者同时追施；
[0013]所述的香蕉枯萎病的生物防治方法，在香蕉组培苗移栽时枯萎病拮抗菌定殖、香蕉苗移栽时枯萎病拮抗菌定殖、香蕉植株生长期枯萎病拮抗菌定殖三个过程能单独采用其中一部分措施，亦能全部措施一同采用。
[0014]用于本发明的香蕉枯萎病的生物防治方法中的生防制剂包括:香蕉枯萎病拮抗复合微生物菌剂和香蕉枯萎病拮抗生物有机肥;该生防制剂经由如下步骤得到:
[0015]—、将保藏在北京市海淀区中关村北一条13号、中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为CGMCC N0.1211、保藏日为2004年8月30日的褐球固氮菌(Azotobacter chroococcum)YKT41 株，保藏号为CGMCC N0.1212、保藏日为2004年8月30 日的越南伯克霍尔德氏菌(Burkholderia vietnamiensis)P418株，保藏号为CGMCC N0.1213、保藏日为2004年8月30日的巨大芽孢杆菌(Baci I Ius megaterium)Ap25株，保藏号为CGMCCN0.1498，保藏日为2005年10月20日的绿色木霉(Trichoderma viride)LTR_2株，保藏号为CGMCC N0.7938，以及保藏在北京市朝阳区北辰西路I号院3号、中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏日为2013年7月19日的哈茨木霉(Trichoderma harzianum)Tl 1-W株五种菌种分别按常规方法进行液体或固体发酵;具体如下:
[0016]1、褐球固氮菌YKT41的液体发酵
[0017]褐球固氮菌YKT41的液体发酵按以下步骤进行:
[0018](I)斜面菌种:采用固体无氮培养基(K2HP04 0.64g,KH2PO4 0.16g,MgS04.7H200.2g、NaCl 0.2g、CaS04.2H20 0.05g^Na2MoO4 O-OOlg^FeSO4 0.03g、蔗糖20g、琼脂 15g、水1000ml、pH7.0-7.2)，将菌种接种在试管培养基中，28-32 °C培养18-24小时。
[0019](2)摇瓶菌种:采用液体无氮培养基(K2HP04 0.64g,KH2PO4 0.16g,MgS04.7H200.2g、NaCl 0.2g、CaS04.2H20 0.05g^Na2MoO4 O-OOlg^FeSO4 0.03g、蔗糖20g、水 1000ml、pH7.0-7.2)，将斜面菌种的单菌落接种在液体无氮培养基中置摇床上28-32°C培养18-24小时。
[0020](3)液体发酵:采用含蔗糖I %、玉米粉4%、黄豆饼粉I %、硫酸铵0.2%、硫酸镁
0.02%、磷酸二氢钾0.1 %、磷酸氢二钾0.1 % (前述物料均按质量百分比添加)、pH7.0-7.2培养基，121°C灭菌20min，将摇瓶液体培养的菌种接种到发酵罐内(接种量为2-10% )，28-32°C条件下培养，每分钟通发酵罐容积1-1.5倍的气量，搅拌速度为150-250r/min，培养时间36-48小时。在接种量为10%，30°C恒温培养的情况下，32小时进入稳定期，此时可作为发酵终点，获得褐球固氮菌YKT41的孢子发酵液，留作配制复合微生物菌剂用。[0021 ] 2、越南伯克霍尔德氏菌P418的液体发酵
[0022]越南伯克霍尔德氏菌P418的液体发酵按以下步骤进行:
[0023](I)斜面菌种:采用固体无氮培养基(K2HP04 0.5g,MgS04.7H20 0.2g、NaCl 0.02g,CaCl2 0.2g、Fe-EDTA 0.066g,Na2MoO4 0.002g、L_谷氨酸(或味精)0.05g、葡萄糖5g、琼脂15g、pH7.2-7.4)将菌种接种在试管培养基中，28-32°C培养18_24小时。
[0024](2)摇瓶菌种:称取蛋白胨1g、酵母浸出物Ig、氯化钙0.2g配制成pH7.0的液体培养基，将斜面菌种的单菌落接种在液体无氮培养基中置摇床上28-32Γ培养18-24小时。
[0025](3)液体发酵:采用含蔗糖I %、玉米粉4%、黄豆饼粉I %、硫酸铵0.2%、硫酸镁0.02%、磷酸二氢钾0.1 %、磷酸氢二钾0.1 % (前述物料均按质量百分比添加)、pH7.2-7.4培养基，121°C灭菌20min，将摇瓶液体培养的菌种接种到发酵罐内(接种量为2-10% )，28-32°C条件下培养，每分钟通发酵罐容积1-1.5倍的气量，搅拌速度为150-250r/min，培养时间36-48小时。在接种量为10%，30°C恒温培养的情况下，32小时进入稳定期，此时可结束发酵，获得越南伯克霍尔德氏菌P418的孢子发酵液，留作配制复合微生物菌剂用。
[0026]3、巨大芽孢杆菌Ap25的液体发酵
[0027]巨大芽孢杆菌Ap25的液体发酵按以下步骤进行:
[0028](I)斜面菌种:采用固体无氮培养基(K2HP04 0.5g,MgS04.7H20 0.2g、NaCl 0.02g,CaCl2 0.2g、Fe-EDTA 0.066g,Na2MoO4 0.002g、L_谷氨酸(或味精)0.05g、葡萄糖5g、琼脂15g、pH7.2-7.4)将菌种接种在试管培养基中，28-32°C培养18_24小时。
[0029](2)摇瓶菌种:称取蛋白胨1