大型溞测定农药颗粒剂毒性的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及养殖技术领域，尤其涉及一种大型潘测定农药颗粒剂毒性的方法。
【背景技术】
[0002] 大型潘作为试验物种的优点颇多，如体型小易于管理，极大减少了饲养空间和管 理成本，试验过程中能相应减少供试物用量和废液量;产卵量大，一尾雌鱼每周可产卵1~2 次，每次产卵量为100~300枚;大型潘胚胎透明，便于观察其早期发育形态。国内外均已将 大型潘作为化学品、农药登记中环境毒理试验的模式生物，广泛应用于生命科学、毒理学、 环境科学和农业科学等领域。
[0003] 目前，已经广泛采用大型潘进行农药环境安全性评价的研究，但是采用大型潘作 为农药颗粒剂毒性筛选模型的研究较少，缺乏相关的研究数据评估模型的实用性和可靠 性。因此，提供一种易操作、实用性强的大型潘筛选农药颗粒剂毒性的方法尤其重要。
【发明内容】
[0004] 本发明要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种大型潘测定农药颗粒 剂毒性的方法，具有操作简便、实用性强、检测速度快，精确度高等优势。
[0005] 为解决上述技术问题，提供了一种大型潘测定农药颗粒剂毒性的方法，包括以下 步骤：
[0006] (1)将农药颗粒剂溶解，制成农药储备液；
[0007] (2)将所述农药储备液与Elendt M4培养液混合配制成梯度浓度的混合液，将所述 混合液做为大型潘的生活用水，持续培养48h，培养过程中，每隔24h时记录大型潘的生物效 应参数和所述混合液的理化参数；
[0008] (3)根据大型潘的生物效应参数和农药储备液的理化参数计算农药对半数抑制浓 度EC 5Q，判断农药颗粒剂的毒性。
[0009] 上述的方法，优选的，所述步骤（1)具体为:将所述农药颗粒剂，用丙酮和吐温-80 的混合溶液溶解、超声、过滤得到所述农药储备液。
[0010] 上述的方法，优选的，所述丙酮和吐温-80的混合溶液中，吐温-80的质量浓度< 0.100g/L，所述丙酮的质量浓度< 0.100mL/L。
[0011] 上述的方法，优选的，所述步骤(2)中所述大型潘为来源于同一母系的孤雌繁殖3 代以上，出生时间小于24h的非头胎健康幼潘。
[0012] 上述的方法，优选的，在在所述步骤(2)进行的过程中，所述大型潘不喂食。
[0013] 上述的方法，优选的，所述步骤（2)中所述Elendt M4培养液为空气曝气栗曝气处 理24h以上的Elendt M4培养液，所述Elendt M4培养液的pH为6·0~9·0，硬度为140~250mg/ L，溶解氧2 3mg/L。
[0014] 上述的方法，优选的，所述步骤(2)中，所述生物效应参数为大型潘的抑制率;所述 理化参数为混合液的水温、pH值、溶解氧含量。判断所述大型潘抑制的标准为轻晃烧杯，潘 在15s内不游动视为活动抑制，但允许附肢微弱摆动。
[0015] 上述的方法，优选的，所述步骤(2)中，所述培养过程控制水温为18°C~22°C、每日 光照16h、溶解氧浓度不低于3. Omg/L。
[0016] 上述的方法，优选的，所述农药颗粒剂的毒性的判断标准为:EC5〇>10.0mg a. i ./L 表不低毒，l.OOmg a.i./L<EC5〇<10.0mg a.i./L 表不中毒，O.lOOmg a.i./L<EC5〇< l.OOmg a.i./L表不尚毒，EC5〇<0.100mg a.i./L表不剧毒。
[0017] 上述的方法，优选的，所述大型潘测定农药颗粒剂毒性的方法还设有空白对照组 和溶剂对照组;所述空白对照组以Elendt M4培养液为大型潘的生活用水;所述溶剂对照组 以丙酮和吐温-80的混合溶液为所述大型潘的生活用水;所述空白对照组和溶剂对照组中 大型潘的受抑制率不能超过10%则证明实验结果可信。
[0018] 溶剂对照组中丙酮和吐温-80的含量应为试验组使用量的最大值，在吐温-80的质 量浓度应< 0. l〇〇g/L，所述丙酮的质量浓度应< 0.100mL/L。
[0019] 与现有技术相比，本发明的优点在于：
[0020] (1)本发明提供了一种操作简便、实用性强的模式生物大型潘筛选农药颗粒剂毒 性的方法;并将农药颗粒剂有效成分充分提取出来，评价其对大型潘的毒性，具有速度快， 精确度高的优点。
【具体实施方式】
[0021] 以下结合具体优选的实施例对本发明作进一步描述，但并不因此而限制本发明的 保护范围。
[0022] 实施例
[0023] 以下实施例中所采用的材料和仪器均为市售。
[0024] 实施例1:
[0025] (1)农药储备液的配制：
[0026] 称取10 %噻唑膦颗粒剂1.3889g，用50.00mL丙酮溶解，然后用0.1 %吐温-80水溶 液定容至100mL容量瓶中，经过2h超声振荡后，弃去固体颗粒，取上清液过0.4μπι水膜，得到 浓度为2.50 X 103mg a. i . /L分散均匀的溶液。
[0027] 移取1 .OOOrnL的溶液用蒸馏水定容至100mL容量瓶中，配制成浓度为25.0mg a. i ./ L的农药储备液。
[0028] (2)试验液的配制：
[0029] Elendt M4培养液的制备:将Elendt M4培养液进行空气曝气栗曝气处理24h以上， 检测Elendt M4培养液的pH为7.15，硬度为1891^/1，溶解氧为7.8211^/1。
[0030] 实验组：依次移取 0 · 300mL、0 · 600mL、1 · 200mL、2 · 400mL、4 · 800mL 步骤（1)中的农药 储备液分别用Elendt M4培养液定容至250mL容量瓶中，得到浓度为3.00 X l(T2mg a. i ./L、 6.00X10-2mg a.i./L、0.120mg a.i./L、0.240mg a.i./L、0.480mg a.i./L的试验液。
[0031] 空白对照组(CKi):以Elendt M4培养液作为试验液。
[0032] 溶剂对照组（CK2):移取0.024mL丙酮和0.024mL 0.1 %吐温-80水溶液至250ml容 量瓶中，并用Elendt M4培养液定容。
[0033] (3)染毒
[0034] 挑选来源于同一母系的孤雌繁殖4代，出生时间在6h~24h的非头胎健康幼潘，随 机加入到上述步骤(2)的试验液中。每烧杯5只潘，进行培养，培养过程控制水温为20°C、每 日光照下培养16h，黑暗培养8h、溶解氧浓度不低于3.Omg/L。大型潘在染毒过程中不喂食。 [0035]在染毒开始后，于第24h、48h测定并记录烧杯中试验液的温度、pH值、溶氧量等。于 染毒后24h、48h观察并记录大型潘的抑制数。判断所述大型潘抑制的标准为轻晃烧杯，潘在 15s内不游动视为活动抑制，但允许附肢微弱摆动。
[0036]表1为10%噻唑膦颗粒剂对大型潘急性毒性活动抑制试验数据记录结果。表2为试 验期间各浓度组的水温，pH值，溶解氧的检测结果。
[0037] 表1:10%噻唑膦颗粒剂对大型潘急性毒性试验数据记录表
[0038]
[0039] 仕处埋33：桎甲，入型渔出炒U游功个枳极，原地转，附肢和触用儆弱搭功等生物 抑制效应，浓度越高时间越久，症状也会更加的严重。
[0040]表2:水缸中生活用水的水温、pH值、溶解氧的检测结果表
[0041]
[0042] 实验组2至4的Ph、温度、溶解氧含量等均在实验组1和实验组5组成的范围内。
[0043] (4)数据处理
[0044]采用统计软件SPSS12.0,以处理浓度的对数值为自变量X，以（校正)死亡率的机率 值为因变量y，建立毒力回归方程。计算10 %噻唑膦颗粒剂对大型潘的的抑制浓度EC5〇和 95 %置信限，具体计算结果参见表3。
[0045] 表3:10%噻唑膦颗粒剂对大型潘急性毒性试验结果表
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[0047] (5)结果评价
[0048] 根据EC5Q值判断农药毒级。毒性分级标准为：低毒(EC5Q> 10 . Omg a. i . /L)，中毒 (l.OOmg a.i./L<EC5〇<10.0mg a.i.