一种苏木素伊红混合染色液的利记博彩app
【技术领域】：
[0001] 本发明属于生物医药领域，具体涉及一种苏木素伊红混合后进行一步法染色的样 本处理类试剂及其制备、染色方法。
【背景技术】：
[0002] 苏木素 (Hematoxyl in)和伊红(Eosin，又称曙红)联合染色简称HE染色，是病理学 常规制片中最基本的染色方法，应用极其广泛。在病理诊断、教学和科研工作中，常用HE染 色对正常组织和病变组织进行形态结构观察。对于确定或鉴别病变组织、细胞中出现的某 些异常物质与特殊成分，而需要采用的特殊染色方法、酶组织化学方法、免疫组织化学方法 等也均是在观察HE染色组织切片的基础上进行的。在HE染色的组织切片中，细胞核呈蓝色， 细胞浆呈红色，二者形成鲜明的对比，易于观察分析。
[0003] 苏木精是从原产中南美的洋苏木中提取出来的浅黄褐色的结晶，是一种碱性染色 剂，它在被氧化后生成苏木素，同媒染剂(常用的是三价的铝或盐铁)一起使用，能够使细胞 核染色。苏木素的分子式为C6Hl4〇6,具体结构式如下：
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[0005] 传统的经典苏木素伊红染色液有Harris苏木素染色液、Mayer苏木素染色液、Core 苏木素染色液Carazz i苏木素染色液、改良Li 11 ie-Mayer苏木素染色液等，大多需要经过苏 木素染色、盐酸乙醇分化、返蓝、水洗、伊红染色等系列步骤，其操作复杂、耗时长，另外存在 染料沉淀和假性蓝色染色的问题。
[0006] 伊红(eosin)又称曙红，属于人工合成的酸性染料，伊红最适宜与苏木素配合染色 以显示正常或病理组织的形态结构，分为水溶性伊红Y和醇溶性伊红Y以及伊红B等，主要使 细胞质和细胞外基质中的成分着红色。
[0007] 水溶性伊红的结构式为：
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[0011] 伊红染色液在水中可解离为带负电荷的阴离子，与蛋白质的氨基正电荷结合，从 而使细胞质染成深浅不一的红色，目前国内采用的伊红染色液主要为水溶性伊红的水溶液 和醇溶性伊红的95%乙醇溶液。上述伊红染色液均加有乙酸作为促染剂以加强染色强度， 而乙酸会弱化染色色彩层次感，同时在后续的处理过程中需要清洗酸性物质，否则易造成 切片易褪色。
[0012] 目前常规HE染色液，苏木素染色易产生染料沉淀、假性蓝色染色，而伊红染色易出 现色彩层次不清、需要清洗酸性物质。非常重要的是，科研工作者往往要求染色效果好即 可，不太在意操作复杂和耗时长的问题，但是对于大量染色操作的临床检验人员来说，操作 复杂和耗时长的问题就急需要解决了。
【发明内容】
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[0013] 为了解决传统苏木素伊红染色操作复杂、耗时长、假性蓝色、层次不清问题，本发 明"一种苏木素伊红混合染色液"旨在提供一种苏木素和伊红混合在一起，只需对细胞、组 织等样本染色一次，既能使苏木素上色亦可使伊红上色的新型染色液。本发明提供了所述 苏木素伊红混合染色液的制备方法和染色方法，所述的可用于染色样本的类型有石蜡切 片、冰冻切片、血液涂片、培养细胞以及体液涂片(如宫颈粘液涂片、脑脊液涂片等)等。
[0014] -种苏木素伊红混合染色液，其特征是所述的每1000ml苏木素伊红混合染色液中 包括如下组分:苏木素3-10g;氧化剂0.2-23g;媒染剂5-100g;伊红l-10g;醇50-500ml;弱酸 3_60g;防腐剂0. l-5g;其余为水。
[0015] 进一步地，所述的苏木素与所述氧化剂的质量比小于2.5。
[0016] 进一步地，所述的醇占所述苏木素伊红混合染色液的体积比例小于0.5。
[0017] -种苏木素伊红混合染色液，所述的氧化剂为氧化汞、碘酸钠、碘酸钾、高碘酸钠、 高碘酸钾、高锰酸钾、过氧化氢、次氯酸钠、次氯酸钙的一种或多种的混合物。进一步地，每 1000ml所述苏木素伊红复合染色液中，所述的氧化汞优选0.4-4g，最优选2.3g;所述的碘酸 钠优选〇. l_2g，最优选0.25g;所述的碘酸钠优选0. l-2g，最优选0.26g;所述的高碘酸钠优 选0.1-0.5g，最优选0.24g;所述的高碘酸钾优选0.1-0.5g，最优选0.25g;所述的高锰酸钾 优选0.2-2g，最优选0.95g;所述的过氧化氢优选4-22g，最优选1 lg;所述的次氯酸钠优选3-20g，最优选9.5g;所述次氯酸妈优选3-20g，最优选10g。
[0018] -种苏木素伊红混合染色液，所述的氧化汞与所述的苏木素的质量比应小于 0.51;所述的碘酸钠与所述的苏木素的质量比应小于0.21;所述的高碘酸钠与所述的苏木 素的质量比应小于0.05;所述的高碘酸钾应与所述的苏木素的质量比应小于0.05;所述的 高锰酸钾与所述的苏木素的质量比应小于0.19;所述的过氧化氢与所述的苏木素的质量比 应小于2.25;所述的次氯酸钠与所述的苏木素的质量比应小于2;所述的次氯酸钙与所述的 苏木素的质量比应小于2。
[0019] -种苏木素伊红混合染色液，所述的媒染剂为硫酸铝钾、硫酸铝铵、硝酸铝、氯化 铝、硫酸铝的一种或多种的混合物。进一步地，每l〇〇〇ml所述的苏木素伊红复合染色液中， 所述的硫酸铝钾优选26.5g，所述的硫酸铝铵29.6g，所述的硝酸铝优选24.4g，所述的氯化 铝优选14.9g;所述的硫酸铝优选18.6g。
[0020] -种苏木素伊红混合染色液，所述的伊红为水溶性伊红Y、醇溶性伊红Y、焰红B的 一种或多种的混合物。优选水溶性伊红Yl-10g、醇溶性伊红Yl-10g、焰红B0.2_2g三种联合 使用。
[0021] 一种苏木素伊红混合染色液，所述的醇为乙醇、甲醇、乙二醇、丙三醇、异丙醇中的 一种或多种的混合物。优选乙醇、丙三醇两种联合使用。
[0022] 一种苏木素伊红混合染色液，所述的弱酸为冰乙酸、柠檬酸、水杨酸的一种或多种 的混合物。进一步地，每1 〇〇〇ml苏木素伊红混合染色液中，所述的冰乙酸优选5.6-33.3g，最 优选10.6g;所述的梓檬酸优选0.54-3.2g，最优选lg;所述的水杨酸优选0.16-lg，最优选 0 · 32g〇
[0023] -种苏木素伊红混合染色液，所述的防腐剂为叠氮钠、甲醛、氯仿的的一种或多种 的混合物。进一步地，每l〇〇〇ml苏木素伊红混合染色液中，所述的叠氮钠优选0.1-2g，最优 选0.2g;所述的甲醛优选0.5-5g，最优选lg;所述的氯仿优选0.5-5g，最优选lg。
[0024] -种苏木素伊红混合染色液，所述的水为蒸馏水或去离子水中的一种。
[0025]优选的用于石蜡切片染色的苏木素伊红混合染色液，每1000ml包括如下组分：苏 木素5g，醇溶性伊红1.0g，无水乙醇250ml，硫酸铝钾50g，丙三醇150ml，碘酸钠0.4g，水溶性 伊红5g，焰红0.5g，冰乙酸18ml，甲醛0. lg，其余为去离子水，共计1000ml。
[0026] 优选的用于冰冻切片染色的苏木素伊红混合染色液，每1000ml包括如下组分：苏 木素3.5g，醇溶性伊红1.0g，无水乙醇250ml，硫酸铝钾30g，丙三醇150ml，碘酸钠0.3g，水溶 性伊红3g，焰红0.4g，冰乙酸14ml，甲醛0. lg，其余为去离子水，共计1000ml。
[0027] 优选的用于细胞染色的苏木素伊红混合染色液，每1000ml包括如下组分:苏木素 2.6g，醇溶性伊红1.7g，无水乙醇250ml，硫酸铝钾25g，丙三醇150ml，碘酸钠0.22g，水溶性 伊红0.5g，焰红0.2g，冰乙酸10ml，甲醛0. lg，其余为去离子水，共计1000ml。
[0028] 本发明"一种苏木素伊红混合染色液"的制备方法，包括如下步骤：
[0029] 配制醇溶试剂:按选定的体积分数取醇并按选定的比例加入苏木素、醇溶伊红，充 分溶解，即获得醇溶试剂，备用。
[0030] 配制媒染试剂:按选定的体积分数取水并按选定的比例加入媒染剂，充分溶解，即 获得媒染试剂，备用。
[0031] 配制混合染色液:取适量的上述配制好的醇溶试剂和配制媒染试剂，充分混匀后， 按选定的体积分数取氧化剂加入前述混合液中，取适量的水溶性伊红、焰红B、弱酸、防腐剂 加入，补去离子水至1000ml，充分混匀，过滤，即得苏木素伊红混合染色液。
[0032] 需要说明的是，在所述的苏木素伊红混合染色液的制备过程