-8°C下放置30天后再进行染色，结果显示，本发明阴性胞质内无色素沉淀物，阳性胞质内出现棕红色沉淀物，阴阳性区别显著。同现有方法比较，细胞形态维持完整，阳性棕红色沉淀定位好，染色背景清晰。样本储存30天本发明试剂盒染色胞质内棕红色颗粒明显，表明本方法保存的酶活性维持较好，而传统方法染色阴阳性区别不显著。
[0027]由以上技术方案可知，本发明调整了α-ΝΒΕ染色中的固定液配方组成，在甲醛基础上加入了能够完善固定效果以及增强染色效果的乙醇、海藻糖、海藻酸钠和多元醇，不仅能够降低甲醛的危害作用，而且在保证优异的染色效果前提下将样品保存时间延长至30天，弥补了现有α-ΝΒΕ染色方法的缺陷。
【附图说明】
[0028]图1所示为用本发明试剂盒染色的血细胞涂片镜检结果；
[0029]图2所示为用现有方法染色的血细胞涂片镜检结果；
[0030]图3所示为用本发明固定液固定30天后染色的血细胞涂片镜检结果；
[0031]图4所示为用现有甲醛固定方法固定30天后染色的血细胞涂片镜检结果。
【具体实施方式】
[0032]本发明实施例公开了一种α-丁酸萘酚酯酶染色试剂盒及其中的固定液。本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的固定液和试剂盒已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
【发明内容】
、精神和范围内对本文所述的产品及方法进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
[0033]为了进一步理解本发明，下面结合实施例对本发明提供的一种α-丁酸萘酚酯酶染色试剂盒及其中的固定液进行详细说明。
[0034]实施例1:本发明所述染色试剂盒及染色方法
[0035]1、本发明试剂盒的组成及制备方法
[0036]固定液:0.0IMTris、乙醇40% (>八)、甲醛0.8% (v/v)、海藻糖2.0% (w/v)、海藻酸钠0.03% (w/v)、甘油2% (v/v)，pH 7.0(25°C)。以2.5ml/瓶分装，2?8°C冰箱储存待用。
[0037]α-丁酸萘酚酯溶液:12g/La-丁酸萘酚酯的DMF溶液，以Iml/瓶分装。
[0038]重氮盐:坚牢紫GBC粉末，以30mg/瓶分装。
[0039]基础缓冲液:0.1M柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液，0.0I %泊洛沙姆407，pH 6.6，以29ml/瓶分装。
[0040]复染液:分别用20ml无水乙醇溶解2.5g苏木素，330ml蒸馏水溶解5g硫酸铝钾，然后两液混合后，依次加入250mg碘酸钠、150ml甘油和1ml冰醋酸。
[0041]2、本发明所述染色试剂盒的染色方法
[0042]步骤1:将样本与固定液在2?8°C按体积比为1:5比例混匀，取混匀后的样本制备2份相同的涂片，室温干燥30min，水洗。
[0043]步骤2:将α-丁酸萘酚酯溶液、重氮盐各I瓶置入基础缓冲液中充分混匀成为基质液。
[0044]步骤3:上述将步骤I所得2份涂片分别置入两缸基质液中，一缸中加入NaF，37°C孵育60min，然后连缸流水冲洗数分钟。
[0045]步骤4:用复染液复染I?2min，水洗待干镜检。
[0046]实施例2:现有α-ΝΒΕ染色方法
[0047]1、现有α-ΝΒΕ染色试剂的制备
[0048]固定液:40%甲醛；
[0049]染色液:将α-丁酸萘酚0.0Iml溶于0.5ml丙酮，再与0.1M磷酸缓冲液(pH 8.0)1ml和坚牢蓝BB盐15mg混匀，过滤后立即使用；
[0050]复染液:分别用20ml无水乙醇溶解2.5g苏木素，330ml蒸馏水溶解5g硫酸铝钾，然后两液混合后，依次加入250mg碘酸钠、150ml甘油和1ml冰醋酸。
[0051 ] 2、染色方法
[0052]步骤1:新鲜干燥涂片用甲醛蒸气固定5min，水洗，待干。
[0053 ]步骤2:置于染色液(37 °C)作用Ih，水洗，待干。
[0054]步骤3:苏木素复染2min，水洗，待干，镜检。
[0055]实施例3:染色效果对比试验
[0056]取正常人外周血，以实施例1本发明方法与实施例2现有染色方法分别进行染色，染色后的血涂片镜检并拍照，如图1和图2。
[0057]取正常人外周血，本发明方法与现有染色方法分别用固定液处理，放置30天后进行染色，镜检并拍照，如图3和图4。
[0058]结果判断:阴性胞质内无色素沉淀物，阳性胞内出现棕红色沉淀物。
[0059]染色结果分析:本发明阴性胞质内无色素沉淀物，阳性胞质内出现棕红色沉淀物，阴阳性区别显著。同现有方法比较，细胞形态维持完整，阳性棕红色沉淀定位好，染色背景清晰。样本储存30天本发明试剂盒染色胞质内棕红色颗粒明显，表明本方法保存的酶活性维持较好，而现有方法染色阴阳性区别不显著，胞质内棕红色颗粒不明显。
[0060]以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。
【主权项】
1.一种α-丁酸萘酚酯酶染色试剂盒，其特征在于，包括固定液、α-丁酸萘酚酯溶液、重氮盐、基础缓冲液、复染液，所述固定液为含有乙醇、甲醛、海藻糖、海藻酸钠和多元醇的缓冲液。2.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，所述固定液中乙醇的体积百分比浓度为15?70%、甲醛的体积百分比浓度为0.3?2.0%，海藻糖的质量体积百分比浓度为2.0?6.0%、海藻酸钠的质量体积百分比浓度为0.01?2.0 %、多元醇体积百分比浓度为0.5?4.0%。3.根据权利要求1或2所述试剂盒，其特征在于，所述多元醇为甘油。4.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，所述缓冲液为2-吗啉代乙磺酸缓冲液、I，3-二[三(羟甲基)甲氨基]丙烷缓冲液、4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液、哌嗪-1，4_二乙磺酸缓冲液、3-(Ν-吗啉基)丙磺酸缓冲液、N-三(羟甲基)甲基甘氨酸缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液、磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液、磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液中一种。5.根据权利要求4所述试剂盒，其特征在于，所述缓冲液浓度为0.005?0.1M，pH为6.5?7.5。6.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，所述基础缓冲液包含泊洛沙姆407。7.根据权利要求6所述试剂盒，其特征在于，所述基础缓冲液为2-吗啉代乙磺酸、I，3-二[三(羟甲基)甲氨基]丙烷、4-羟乙基哌嗪乙磺酸、呢嗪-1，4_二乙磺酸、3-(N-吗啉基)丙磺酸、N-三(羟甲基)甲基甘氨酸、三羟甲基氨基甲烷、柠檬酸-柠檬酸钠、磷酸氢二钠-磷酸二氢钠、磷酸氢二钠-磷酸二氢钾、磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液之一。8.根据权利要求6所述试剂盒，其特征在于，所述泊洛沙姆407在基础缓冲液中的质量体积百分比浓度为0.0 OI?1.0 %。9.根据权利要求根据权利要求7所述试剂盒，其特征在于，所述基础缓冲液浓度为0.0I?0.2Μ，ρΗ为6.0?7.0。10.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，所述重氮盐选自坚牢紫GBC、坚牢蓝B中的一种。11.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，所述复染液选自中性红、甲基绿、苏木素、核固红、沙黄中的一种。
【专利摘要】本发明涉及生物技术领域，公开了一种α-丁酸萘酚酯酶染色试剂盒。本发明所述试剂盒包括固定液、α-丁酸萘酚酯溶液、重氮盐、基础缓冲液、复染液，其中固定液为含有乙醇、甲醛、海藻糖、海藻酸钠和多元醇的缓冲液。本发明调整了α-NBE染色中的固定液配方组成，在甲醛基础上加入了能够完善固定效果以及增强染色效果的乙醇、海藻糖、海藻酸钠和多元醇，不仅能够降低甲醛的危害作用，而且在保证优异的染色效果前提下将样品保存时间延长至30天，同时在基础缓冲液中增加了泊洛沙姆407，可配合固定液进一步增强染色效果，弥补了现有α-NBE染色方法的缺陷。
【IPC分类】G01N1/30
【公开号】CN105651579
【申请号】
【发明人】谢永华, 王美龙, 朱美萍, 许付
【申请人】上海太阳生物技术有限公司
【公开日】2016年6月8日
【申请日】2015年12月7日