027]动态法制备细菌纤维素(BC)颗粒的方法，包括如下步骤:将木醋杆菌在无菌的条件下按接种量为8 %转接至复苏专用培养液(200mL)中，在31°C、80rpm条件下复苏培养，然后将复苏的培养菌液接种至培养液中，在30°C、转速为80rpm、通气量为0.3v/v.min条件下动态发酵3d，得颗粒状细菌纤维素；将所获细菌纤维素用沸腾的0.5mol/L的NaOH溶液煮15min；放入质量分数为I %的NaOH溶液中静置2天，再在去离子水中浸泡至中性，进行称重，记为NaOH处理后湿重，干燥后再进行称重。
[0028]本实施例发酵液pH为5.95，NaOH处理后湿重为7.45g，处理后干重为0.16g，含水率为89.97%。
[0029]实施例5
[0030]动态法制备细菌纤维素(BC)颗粒的方法，包括如下步骤:将木醋杆菌在无菌的条件下按接种量为10%转接至复苏专用培养液(200mL)中，在28°C、120rpm条件下复苏培养，然后将复苏的培养菌液接种至培养液中，在28°C、转速为120rpm、通气量为0.5v/v.min条件下动态发酵4d，得颗粒状细菌纤维素;将所获细菌纤维素用沸腾的0.5mol/L的NaOH溶液煮15min;放入质量分数为1%的NaOH溶液中静置2天，再在去离子水中浸泡至中性，进行称重，记为NaOH处理后湿重，干燥后再进行称重。
[0031 ] 本实施例发酵液pH为6.19，NaOH处理后湿重为4.59g，处理后干重为0.1323g，含水率为86.80 %。
[0032]实施例6
[0033]动态法制备细菌纤维素(BC)颗粒的方法，包括如下步骤:将木醋杆菌在无菌的条件下按接种量为12%转接至复苏专用培养液(200mL)中，在28°C、120rpm条件下复苏培养，然后将复苏的培养菌液接种至培养液中，在28°C、转速为120rpm、通气量为0.5v/v.min条件下动态发酵4d，得颗粒状细菌纤维素;将所获细菌纤维素用沸腾的0.5mol/L的NaOH溶液煮15min;放入质量分数为1%的NaOH溶液中静置2天，再在去离子水中浸泡至中性，进行称重，记为NaOH处理后湿重，干燥后再进行称重。
[0034]本实施例发酵液pH为6.16,NaOH处理后湿重为9.29g，处理后干重为0.3g，含水率为89.68%。
[0035]实施例7
[0036]动态法制备细菌纤维素(BC)颗粒的方法，包括如下步骤:将木醋杆菌在无菌的条件下按接种量为20 %转接至复苏专用培养液(200mL)中，在28 V、120rpm条件下复苏培养，然后将复苏的培养菌液接种至培养液中，在28°C、转速为120rpm、通气量为0.5v/v.min条件下动态发酵4d，得颗粒状细菌纤维素;将所获细菌纤维素用沸腾的0.5mol/L的NaOH溶液煮15min;放入质量分数为1%的NaOH溶液中静置2天，再在去离子水中浸泡至中性，进行称重，记为NaOH处理后湿重，干燥后再进行称重。
[0037]本实施例发酵液pH为5.65，NaOH处理后湿重为15.29g，处理后干重为0.36g，含水率为89.55%。
[0038]实施例8
[0039]将实施例1?7制得的细菌纤维素颗粒，经NaOH处理后浓缩至含水量为50?70%，然后在-80?-20°C下冻结，再用气流粉碎设备进行流化床式粉碎至粒径为800?1200目的颗粒，真空干燥即可。经过此步骤处理，能够将细菌纤维素中的纤维完全破碎，然后可以直接成加工产品，如组织工程支架或人工骨支架。
[0040]其中3D打印人工骨支架的方法如下:首先CT扫描人体损伤处的骨组织，获取损伤骨图像数据导入Mimics软件，建立人体指定部位的骨骼三维模型；通过3D打印系统控制软件，生成运动轨迹代码;利用3D打印系统以超微粉碎后的细菌纤维素为打印基本原料，进行人工骨支架的打印，直至完成整个人工骨支架的打印过程。本发明通过3D打印制作人工骨支架，制作的支架对人体无害。
[0041]最后说明的是，以上优选实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管通过上述优选实施例已经对本发明进行了详细的描述，但本领域技术人员应当理解，可以在形式上和细节上对其作出各种各样的改变，而不偏离本发明权利要求书所限定的范围。
【主权项】
1.动态法制备细菌纤维素颗粒的方法，其特征在于，包括如下步骤:将复苏的木醋杆菌菌液加入特制培养液中，在26?30°C、转速为80?180rpm、通气量为0.3?0.6v/v.min条件下动态发酵3?5d，得颗粒状细菌纤维素； 所述特制培养液由土豆废渣加水后在800?100°C条件下加温不低于I小时而得。2.根据权利要求1所述动态法制备细菌纤维素颗粒的方法，其特征在于:所述复苏的木醋杆菌由以下方法制得，将木醋杆菌转接至特制培养液中，在26?31°C、80?ISOrpm条件下增菌培养至细菌数为106cuf/mL。3.根据权利要求1所述动态法制备细菌纤维素颗粒的方法，其特征在于:所述动态发酵后还包括如下步骤:培养所获细菌纤维素用0.5mol/L的NaOH溶液煮15min，再放入质量分数为I %的NaOH溶液中静置2天，用去离子水中浸泡至中性，得细菌纤维素颗粒。4.根据权利要求3所述动态法制备细菌纤维素颗粒的方法，其特征在于:将NaOH处理后的细菌纤维素颗粒浓缩至含水量为50?70%，然后在-80?-20 °C下冻结，再用超微粉碎设备粉碎至粒径为800?1200目的颗粒，真空干燥即可。5.根据权利要求1?4任一项所述动态法制备细菌纤维素颗粒的方法，其特征在于:所述复苏的木醋杆菌的接种量为2?20%。6.根据权利要求5所述动态法制备细菌纤维素颗粒的方法，其特征在于:所述复苏的木醋杆菌的接种量为12?20%。7.由权利要求1?6任一项所述方法制得的细菌纤维素颗粒。
【专利摘要】本发明公开了动态法制备细菌纤维素颗粒的方法及其产品，包括如下步骤：将木醋杆菌在无菌的条件下转接至复苏专用培养液中，在26～31℃、80～180rpm条件下复苏培养，然后将复苏的培养菌液接种至特制培养液中，在26～30℃、转速为80～180rpm、通气量为0.3～0.6v/v·min条件下动态发酵3～5d，得颗粒状细菌纤维素，所获细菌纤维素经NaOH处理后浓缩至含水量为50～70％，然后在-80～-20℃下冻结，再用气流粉碎设备进行流化床式粉碎至粒径为800～1200目的颗粒，真空干燥得细菌纤维素颗粒干品。利用本发明的获得的细菌纤维素产量高，呈颗粒状，应用范围广，具有很好的市场应用前景。
【IPC分类】C12P19/04, C12R1/02
【公开号】CN105647991
【申请号】
【发明人】吴力克, 张娟
【申请人】中国人民解放军第三军医大学第一附属医院
【公开日】2016年6月8日
【申请日】2016年4月11日