一种加香干红葡萄酒及其制备方法_2

文档序号:9882044阅读:来源:国知局
rum)、两岐双岐杆菌(Bifidobacterium bifidum)、婴儿双岐杆菌 (B. infantis)、长双岐杆菌(B. longum)、短双岐杆菌(B.breve)、青春双岐杆菌 (B.adolescentis)、乳双歧杆菌(Bifidobacterium lactis)、保加利亚乳杆菌 (Lactobacillus .Bulgaricus)、嗜酸乳杆菌(L.acidophilus)、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)、鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus )、嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus);
[0028] 优选地,所述益生菌粉剂由以下重量份数的粉剂均匀混合而成:植物乳杆菌30-40 份,两岐双岐杆菌25-35份,乳双歧杆菌20-30份,嗜热链球菌10-20份,保加利亚乳杆菌12-15份,干酪乳杆菌8-10份,鼠李糖乳杆菌5-10份;
[0029]更优选地,所述植物乳杆菌粉剂是以植物乳杆菌CGMCC N0.11763为出发菌按按常 规方法制备的,其中的冷冻保护剂以含有抗冻蛋白的动物或植物为原料,经高压脉冲电场 提取、超声波辅助微波提取和复配酶酶解而制得的,可有效提高植物乳杆菌粉剂在冷冻干 燥过程活菌存活率;
[0030]优选地,所述保护剂的制备方法,包括如下步骤:将冬黑麦、沙冬青、鲨鱼皮胶原蛋 白分别清洗、沥干,按质量比8-10: 3-5: 2-4均匀混合,加入混合物料质量0.1-1倍的pH值为 3.8-4.5的乳酸润湿3-811,于-18-22°(:冷冻1-211后立即进行粉碎,冷冻料层厚度3-5〇11,粉 碎物粒径0.5-3mm,接着加入粉碎物质量10-20倍的水,用乳酸调节pH值为3.5-5.5,于室温 下在电场强度25-35kV/cm,脉冲时间300-500ys,脉冲频率200-300Hz条件下进行高压脉冲 电场处理20-30min;然后于室温在功率150-300W条件下进行微波辐照提取15-20min,同时 在功率200-300W,频率30-40KHZ条件下进行超声波辅助提取;加入提取液质量1-2%的复配 酶,于45-55 °C酶解30-50min;酶解液过滤、滤液浓缩、低温粉碎至粒径为0.1-0.3mm即得保 护剂;
[0031]所述复配酶为纤维素酶、蛋白酶、淀粉酶、果胶酶、单宁酶按质量比3-5:2-4:1-3: 1-3:1-2均匀混合;
[0032]更优选地,所述微波辐照提取为间歇式提取,即微波辐照10s,间隔20s。
[0033] 本发明另一目的是提供上述加香干红葡萄酒的制备方法:包括以下步骤:
[0034] 1)按照配方,称取各组份原料,首先将玫瑰花分成花瓣,放入装有0.8-1.2%碳酸 氢钠溶液的超声波清洗机中于200-400W、20-40KHZ清洗3-5min,沥干,置微波干燥中于功率 3_5kW、料层厚度2-4cm、50-70°C、干燥4-6min,然后浸泡在质量百分比为8-12%的丝胶肽溶 液中10-15min,于-18-22°C冷冻30-50min后立即进行粉碎,冷冻料层厚度3-5cm,粉碎物粒 径0.3-0.5_,接着加入粉碎物质量4-6倍的水,用乳酸调节pH值为3.5-5.5,于室温下在电 场强度25-35kV/cm,脉冲时间300-500ys,脉冲频率200-300HZ条件下进行高压脉冲电场处 理20-30min;然后于室温在功率150-300W条件下进行微波辐照提取15-20min,同时在功率 200-300W,频率30-40KHZ条件下进行超声波辅助提取;加入提取液质量1.5-2.5%的混合 酶,于40-50 °C酶解30-50min得玫瑰花酶解液;
[0035] 所述混合酶为纤维素酶、蛋白酶、果胶酶、单宁酶按质量比3-5:2-4:1-3:1-2均匀 混合;
[0036] 2)取干红葡萄酒质量的20-30 %,控制温度40-45°C,边搅拌边加入改性膳食纤维、 蜂蜜、乳糖和玫瑰花酶解液,充分溶解20_40min,加入益生菌粉剂质量的50-60 %恒温发酵 3_5h,接着以0.8-1.0°C/min的速率升温至50-55°C,加入益生菌粉剂质量的40-50%恒温发 酵1.5-3.5h,最后以0.6-0.8°C/min的速率降温至40-45°C,继续发酵0.5-lh,发酵液依次经 40目、80目双联过滤器过滤,滤液经超高压均质机于2-4°C、140-160MPa均质,均质液经130-135°C超高温瞬时灭菌4-6s,最后依次经微滤、循环超滤浓缩至固形物含量为20-30%得玫 瑰干红生物活性浓缩液;
[0037] 3)将剩余干红葡萄酒和玫瑰干红生物活性浓缩液均匀混合,向其中加入过氧乙酸 溶液,使过氧乙酸浓度为320-380ppm,混合液于功率200-400W,频率30-40KHZ条件下进行超 声波处理5-10min,控制混合液温度为25-35Γ,然后通过连续式高压脉冲处理室处理,静 置、过滤即得加香干红葡萄酒;
[0038]进一步地,所述过氧乙酸溶液的质量百分比浓度为10-30% ;
[0039] 进一步地,所述高压脉冲电场处理条件为电场强度25-30kV/cm、脉冲数40-50。
[0040] 本发明植物乳杆菌(1^〇1:(^&(3;[11118口1&1^&1'11111)乂!1于2015年11月30日保藏于中国 微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC),保藏号为CGMCC N0.11763,保藏 地址为:中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号,中国科学院微生物研究所,邮编:100101。 [0041 ] 植物乳杆菌益生特性如下:
[0042]本发明所提供的植物乳杆菌CGMCC N0.11763经实验发现能够在pH为1.50的条件 下存活,在1%胆盐培养4小时后仍处于存活状态;植物乳杆菌CGMCC N0.11763降解亚硝酸 盐速度快,分解能力达到10.9mg/h/kg,该菌种在生产泡菜时,整个发酵过程中亚硝酸盐浓 度在4.8mg/kg以下;CGMCC如.11763在发酵6011小时后,对胆固醇降解率可达到64.76%。 CGMCC NO · 11763黏附能力测定的自凝集率为95 · 71 %。
[0043] 植物乳杆菌CGMCC N0.11763对胆固醇降解能力研究和测定:
[0044] 取lml CGMCC N0.11763母液接种于10mL的MRS胆固醇液体培养基(胆固醇含量 0. 1mg/ml,pH 6.2)中,37°C的恒温静置分别培养20h、40h、60h备用,以接入lmL无菌水的MRS 胆固醇培养基为对照,取以上培养不同时间的菌液样品及对照液各lml,9000r/min,4°C下 离心10min,得到发酵上清液,邻苯二甲醛法测定上清液中胆固醇含量(具体为:取各上清液 0 . lml于相应的试管中,加冰醋酸0.3ml,lmg/ml的邻苯二甲醛0.15ml,缓缓加入浓硫酸 1. 〇ml,混合均匀。室温静置10min,于550nm下测吸光值)。每一处理3个重复,以同样方法制 作胆固醇标准曲线,计算上清液中胆固醇含量及降解率,结果见表1。可知,CGMCCN0.11763 对胆固醇有很好的降解作用,在发酵60h小时后,降解率可达到64.76%。
[0045] 表1对胆固醇的降解情况。
[0046]
[0047] 植物乳杆菌CGMCC NO. 11763菌株的耐胆盐试验:
[0048] 取CGMCCN0.11763菌液lmL接种菌种于含有不同胆盐(含量梯度为0.0%、0.2%、 0.4%、0.6%、0.8%、1%)的1011^]\?5液体培养基(?!1=6.4),置于37°(:下分别培养0、2、411, 每个处理3个重复。各取lml样品菌液于9ml生理盐水中混匀,制备稀释度溶液,取0.1ml稀释 液于MRS中涂布,于37°C生化培养箱中倒置培养48小时(每个稀释度做3个平行)记录计算平 板上的菌数个数。结果见表2。可知该菌在胆盐浓度为1 %处理4h后菌的生长量依然达到 0· 59±0·92 X 107(cfu/ml),有很好的耐胆盐能力。
[0049] 表2耐胆盐能力检测[(土s) X 107cfu/ml]
[0050]
[0051 ] 植物乳杆菌CGMCC NO. 11763菌株的耐酸试验
[0052] 取HLX37母液按lml接种菌种于不同pH值(pH梯度为1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0)的 lOmLMRS液体培养基,置于37°C下分别培养0、2、4h,每一处理3个重复。各取lml样品菌液于 9ml生理盐水中混匀,制备稀释溶液,取0 . lml稀释液于MRS中涂布,于37 °C生化培养箱中倒 置培养48小时(每个稀释度做3个平行)记录平板上的菌落个数。结果见表3。说明该菌具有 很强的耐酸能力。
[0053]表3耐酸能力检测[(土s) X 107cfu/ml]
[0054]
[0055] 植物乳杆菌CGMCC NO. 11763的黏附能力测定
[0056] 培养CGMCC NO. 11763(MRS液体培养基)、大肠杆菌DH5a(LB液体培养基)24h得发酵 液,分别置于3000r/min、4°C下离心10min,收集菌泥,分别用pH = 7.0的无菌磷酸盐缓冲液 (PBS)洗涤菌泥2次(即在菌落中加入PBS,震荡混合均匀后,置于3000r/min、4°C下离心 lOmin,收集菌体)。自凝集率(% :用无菌的roS将菌泥CGMCC NO. 11763制成在波长600nm处 的吸光值为0.4 ±0.1 (A 0)的悬浮菌液及菌悬液,静置24h后测定吸光值A 24,自凝集率 (%)公式为(A 0-A 24)/A 0。;他凝集率(%):将CGMCC如.11763和大肠杆菌0耶€[的悬菌 液调节成在波长600nm处的吸光值为0.6±0.1 (A 0)的混合悬浮菌液。静置24H后测定吸光 值A 24,他凝集率(% )公式为(A 0 -A 24)/A 0。测定结果见表5,可知CGMCC N0.11763的自 凝集率为95.71 %,有很强的黏附能力。
[0057]表4黏附能力表
[0058]
123456 植物乳杆菌CGMCC N0.11763的菌株生理特性 2 所述植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)XH于2015年11月30日保藏于中国微 生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC),保藏号为CGMCC N0.11763,保藏地 址为:中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号,中国科学院微生物研究所,邮编:100101。 3 该菌株特点如下:在显微镜下观察,该菌株为短杆状,革兰氏染色呈阳性,无鞭毛, 不产芽孢;在固体培养基上,该菌菌落为白色,表面光滑,致密,形态为圆形,边缘较整齐。 4 理化特征为:过氧化氢酶(-),明胶液化(-),吲哚实验( + ),运动性(-),发酵产气 (_),亚硝酸盐还原(_),发酵产气(_),产硫化氢气体(_),pH4.0MRS培养基中生长(+ )。经过 生理生化鉴定为为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum),命名为植物乳杆菌 (Lactobacillus plantarum)XH〇 5 菌株能够在57°C下生长良好,葡萄糖耐受能力为275g/L。 6 本发明植物乳杆菌由采集人李建树,从新疆维吾尔族老乡家中酸奶中分离得到, 采集时间2015年6月2日。
[0065]本发明植物乳杆菌CGMCC N0.11763经实验发现能够在pH为1.50的条件下存活,在 1 %胆盐培养4小时后仍处于存活状态;植物乳杆菌CGMCC N0.11763降解亚硝酸盐速度快, 分解能力达到10.9mg/h/kg,该菌种在生产泡菜时,整个发酵过程中亚硝酸盐浓度在4.8mg/ kg以下;CGMCCN0.11763在发酵60h小时后,对胆固醇降解率可达到64.76 %。CGMCC NO. 11763黏附能力测定的自凝集率为95.71 %,菌株能够在57°C下生长良好,葡萄糖耐受能 力为 275g/L。
[0066] 有益效果:
[0067] 本发明以干红葡萄酒和玫瑰花为原料,首先采用超声清洗对玫瑰花进行杀虫灭 卵、杀灭微生物、去除农药残留和重金属离子等,大大提高了加香干红葡萄酒的食品安全 性;采用微波干燥在使得玫瑰花膨化干燥的同时主要是灭酶、固色,最大限度地保留了玫瑰 花的天然色泽,经微波固色后的玫瑰花天然色泽在后续的加工过程中非常稳定,不会变色、 褪色,色泽非常鲜艳;在含有丝胶肽的水溶液中浸泡复水,可最大限度地减少经冷冻而造成 的玫瑰花活性物质的损失,提高了玫瑰花有效成分的提取率,同
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