长梗冬青苷的制备方法

长梗冬青苷的制备方法
【技术领域】
[0001 ]本发明涉及中药材有效成分的分离技术，具体涉及一种从救必应中制备长梗冬青 苷的简易方法。
【背景技术】
[0002] 救必应为冬青科植物铁冬青（Ilex rotunda Thunb.)的干燥树皮，始载于《岭南采 药录》，现收载于《中华人民共和国药典》(2015年版一部），为我国岭南常用中草药。药材性 苦、凉，具有清热解毒，利湿止痛的功效，常用于治疗暑湿发热，咽喉肿痛，湿热泻痢，脘腹胀 痛，风湿痹痛，湿疹，疮疖，跌打损伤。救必应中含有紫丁香苷、长梗冬青苷、救必应酸等许多 化学成分。其中长梗冬青苷含量较丰富且具有突出的生物活性。长梗冬青苷具有显著的调 节血脂作用、抗炎作用和对肝损伤和平滑肌损伤的保护作用。长梗冬青苷是一种五环三萜 化合物，分子式C36H58016，分子量658.86，结构式为：
[0003]
[0004] 长梗冬青苷(Pedunculoside)
[0005] 近年来，有一些从救必应中提取分离长梗冬青苷的方法被研究报道，现有制备长 梗冬青苷的方法主要包括硅胶柱分离法、高效逆流色谱法和大孔树脂法。传统硅胶柱分离 方法花费时间长，有机溶剂用量大，产量低，已不适合现代工业要求;使用高效逆流色谱的 方法不适合于工厂放大生产;使用大孔树脂的方法，工艺复杂，产率低。专利CN103351419公 开了一种两步法同时制备长梗冬青苷和紫丁香苷的方法，取救必应粗粉用乙醇回流提取， 并使用重结晶或柱层析法对长梗冬青苷纯化，得到紫丁香苷和长梗冬青苷，纯度为98%，但 对于长梗冬青苷的提取分离而言，产率损失较大。
[0006] 综上所述，现有从救必应中提取纯化长梗冬青苷的方法，存在方法复杂、不适合工 业放大、使用较多有毒试剂、产率低、效率不高、成本高等问题。因此，有必要寻找一种较为 简单、高效提取分离长梗冬青苷的方法。

【发明内容】

[0007] 为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种制备长梗冬青苷的简易方 法，该方法操作简单、成本低，制备的长梗冬青苷产品产率纯度高。
[0008] 本发明包括以下步骤：
[0009] (1)取救必应药材，采用乙醇水溶液加热回流提取，过滤，收集救必应提取液。
[0010] (2)将滤液浓缩至无醇味，得浸膏。
[0011] (3)向浸膏加入适量乙酸乙酯水溶液，混匀后静置过夜，过滤，得滤渣。
[0012] (4)将滤渣干燥，直接得到长梗冬青苷产品2、根据权利要求1所述的方法，其特征 在于步骤（1)所述的乙醇水溶液的浓度按体积比为20%-70%，料液比为lg: 8~16ml，提取 次数为2~3次，每次60~120min。
[0013] 步骤（1)所述的乙醇水溶液的浓度优选40%-70%，料液比为1 g: 14~16ml。
[0014] 步骤(3)所述的乙酸乙酯水溶液的浓度优选50 %-60 %，次优选30 %-70 %。料液比 为lg:2~5ml，静置12~24h。
[0015] 最优选的提取参数为:步骤（1)所述的乙醇水溶液的浓度按体积比为70%，料液比 为lg: 16ml，提取次数为3次，每次120min;步骤(3)所述的乙酸乙酯水溶液的浓度是按体积 比为60%，料液比为lg:5ml，静置12h。
[0016] 本发明方法具有如下优势：（1)该方法为工艺简单易行，周期短，成本低，可实现大 规模的工业化生产。（2)长梗冬青苷产品产率高、纯度高。采用HPLC外标法测定，扣除水分与 残留溶剂后，所得到的长梗冬青苷产品纯度大于95%，产率约为3.1%，得到的长梗冬青苷 相对于原料救必应药材含有的长梗冬青苷转移率可达40%以上，最高可高达55.1%。
【附图说明】
[0017]图1为本发明实施例1制得的长梗冬青苷产品的HPLC图谱。
【具体实施方式】
[0018] 下面结合具体的实施例对本发明做进一步的详细说明，但本发明并不局限于此。
[0019] 实施例1
[0020] 取救必应药材lkg，加14倍量（14L)体积分数为40 %的乙醇水溶液回流提取2次，提 取时间为90min，过滤，收集两次提取液，合并滤液，得到救必应提取液。
[0021] 加热浓缩乙醇提取液，回收乙醇至无醇味，得浸膏，加入药材两倍量的水(2L)和乙 酸乙酯（2L)，搅拌混匀，于室温静置过夜（12h)，有白色片状沉淀于水层析出，过滤，得到白 色滤渣。
[0022]常压下烘干滤渣，即得到31.0g长梗冬青苷产品，产率为3.1 %。
[0023]以长梗冬青苷对照品（中检所，批号11868-201001)为外标，使用HPLC法检测得到 的长梗冬青苷产品，色谱条件为使用C18色谱柱(柱长:250mm，粒径:5μπι)，以乙腈为流动相 Α，水为流动相Β，梯度洗脱：0-10min，A: 10% ; 10-20min，A: 10-40%，20-60min，A:40%。 得到的长梗冬青苷产品扣除水分与残留溶剂后纯度为95.1%，面积归一化纯度大于98%， 整个工艺方法长梗冬青苷转移率达到44.8%。
[0024] 实施例2
[0025]取救必应药材lkg，加8倍量(8L)体积分数为30%的乙醇水溶液回流提取2次，提取 时间为90min，过滤，收集两次提取液，合并滤液，得到救必应提取液。
[0026]加热浓缩乙醇提取液，回收乙醇至无醇味，得浸膏，加入药材两倍量的水(2L)和乙 酸乙酯（2L)，搅拌混匀，于室温静置过夜（12h)，有白色片状沉淀于水层析出，过滤，得到白 色滤渣。
[0027] 常压下烘干滤渣，即得到27.8g长梗冬青苷产品，产率为2.8%。以长梗冬青苷对照 品（中检所，批号11868-201001)为外标，使用HPLC法检测得到的长梗冬青苷产品，色谱条件 为使用C18色谱柱(柱长:250mm，粒径:5μπι)，以乙腈为流动相A，水为流动相B，梯度洗脱:0- 10min，A: 10% ; 10-20min，A: 10-40%，20-60min，A:40%。得到的长梗冬青苷产品扣除水 分与残留溶剂后纯度为97.6%，面积归一化纯度大于98%，整个工艺方法长梗冬青苷转移 率达到40.6%。
[0028] 实施例3
[0029]取救必应药材1 kg，加14倍量（14L)体积分数为40 %的乙醇水溶液回流提取2次，提 取时间为90min，过滤，收集两