奥贝胆酸杂质的制备方法
【技术领域】
[0001 ]本发明涉及奥贝胆酸杂质的制备方法。
【背景技术】
[0002] 奥贝胆酸(Obeticholic acid，I)，化学名：3α，7α-二羟基-6α-乙基-5β-胆烷-24-酸，结构式如下。它是一种法尼酯X受体(FXR)激动剂，为鹅去氧胆酸的6-乙基衍生产物，由 美国Intercept制药公司开发，临床研究中用于原发性胆汁性肝硬化(PBC)和非酒精性脂肪 性肝炎等肝脏和肠道疾病的治疗，目前原研公司对于PBC适应症已向FDA和EMA提交注册上 市的申请。
[0003]
[0004] 奥贝胆酸（I)的合成主要反应路线如下：
[0005] (1)以鹳去氧胆酸为原料，经过氯络酸吡啶盐氧化，再经过3,4-二氢-2H-吡喃对3-羟基进行保护，在LDA、正丁基锂催化下进行6位乙基化，最后在硼氢化钠作用下还原制备得 到奥贝胆酸(I)。
[0006] (2)以3-羟基-7-酮-5β-胆烷-24-酸为原料，经过3,4_二氢-2H-吡喃对3-羟基进行 保护，以LDA为催化剂，在-78 °C下进行6位烷基化反应，再在盐酸催化下进行羧基甲酯化反 应制备得到中间体，中间体经硼氢化钠还原后，在碱性条件下水解得到奥贝胆酸(I)。
[0007] (3)以3-羟基-7-酮-5β_胆烷-24-酸为原料，以次氯酸钠为氧化剂对7位羟基进行 氧化，再以溴苄在碳酸铯作用下进行羧基保护，n-BuLi为催化剂，采用三甲基氯硅烷在-78 °C下分别对3，7位羟基进行硅烷化保护，以三氟化硼乙醚溶液为催化剂，在-60°C对6位进行 亚乙基取代，再以硼氢化钠进行7位羰基还原，最后以Pd/C对6位亚乙基进行还原同时脱掉 苄基制备得到奥贝胆酸(I)。
[0008] (4)以3-羟基-7-酮-5β_胆烷-24-酸为起始原料，经甲酯化进行羧基保护，再以三 甲基氯硅烷对3，7位羟基进行硅烷化保护，以三氟化硼乙醚为催化剂，和无水乙醛反应，然 后在碱性条件下水解得到3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸（II)，最后经Pd/C催化 氢化以及硼氢化钠还原得到终产物奥贝胆酸(I)。
[0009] 其中，奥贝胆酸合成关键在于杂质的控制，因此奥贝胆酸杂质的合成研究具有重 要意义。文献指出奥贝胆酸需要研究的杂质包括:3a-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β_胆烷-24-酸 (II);3α-羟基-6α-乙基-7-酮-5β_胆烷-24-酸（III);3α，7α-二羟基-6β-乙基-5β_胆烷-24-酸（IV) ;3α，7β-二羟基-6-乙基-5β-胆烷-24-酸(V)。另外工艺研究过程中需要研究的杂质 包括：3α，7α-二羟基-6α-乙基-5β_胆烷-24-醇（VI); 3，7-二酮-6α-乙基-5β_胆烷-24-酸 (VII)。国内外对于奥贝胆酸杂质的合成报道文献较少。
[0010]
【发明内容】
[0011] 本发明涉及奥贝胆酸三个杂质：3α，7β-二羟基-6-乙基-5β-胆烷-24-酸(V); 3α，7 α_二羟基-6α-乙基-5β-胆烷-24-醇(VI);3，7-二酮-6α-乙基-5β-胆烷-24-酸(VII)。本发明 的合成路线如下：
[0012] 1 νπ
[0013] 杂质（V)以3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸（II)为原料，杂质（VI)和 (VII)以奥贝胆酸（I)为原料。其中3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸（II)是合成奥 贝胆酸(I)的关键中间体。
[0014] 本发明的合成步骤：
[0015] (1) 3α，7β-二羟基-6-乙基-5β-胆烷-24-酸(V)的制备
[0016] ①3α，7β-二羟基-6-乙基-5β-胆烷-24-酸（V)以3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆 烷-24-酸（II)为原料，通过钯炭氢化加氢，然后7位羰基还原得到，氢化条件为常压室温，还 原温度为-25°C~_30°C，制备液相分离得到。
[0017]②3α，7β-二羟基-6-乙基-5β-胆烷-24-酸(V)的制备方法中，氢化所用溶剂选自甲 醇、乙醇、异丙醇、正丁醇、丙酮、丁酮、四氢呋喃、二氯甲烷、氯仿、乙腈、乙酸乙酯、四氢吡 咯、吡啶、哌啶、Ν-甲基吡咯烷酮、Ν，Ν-二甲基甲酰胺、水、氢氧化钠水溶液、氢氧化钾水溶 液、碳酸钠水溶液、碳酸氢钠水溶液、碳酸钾水溶液、碳酸氢钾水溶液，以及两种或以上的混 合溶液。本发明优先选用甲醇和氢氧化钠水溶液的混合溶液作为溶剂。
[0018] 3α，7β-二羟基-6-乙基-5β-胆烷-24-酸(V)的制备方法中，3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸（II)与溶剂的重量体积比为1:25~35。
[0019] ③3α，7β_二羟基-6-乙基-5β_胆烧-24-酸(V)的制备方法中，所用还原剂选自Να、 Κ、氯化亚锡、硼氢化钠、硼氢化钾、红铝、四氢铝锂、三叔丁氧基氢化铝锂、三氯化铈，以及硼 氢化钠、硼氢化钾等与路易酸复合还原剂。本发明优先选用硼氢化钾和三氯化铈作为还原 剂。
[0020] ④3α，7β-二羟基-6-乙基-5β-胆烷-24-酸(V)的制备方法中，3α，7β-二羟基-6-乙 基 -5β-胆烧-24-酸米用制备液相分尚。
[0021] (2) 3α，7α-二羟基-6α-乙基-5β-胆烷-24-醇(VI)的制备
[0022] ①3α，7α-二羟基-6α-乙基-5β-胆烷-24-醇(VI)以奥贝胆酸（I)为原料，在酸性条 件下经酯化得羧基酯化物，酯化反应温度20~150Γ，再经还原制备得到。
[0023] ②3α，7α-二羟基-6α-乙基-5β-胆烷-24-醇(VI)的制备方法中，酯化所用溶剂选酯 化所用溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇、仲丁醇、新戊醇、苯甲醇、乙二醇、丙三醇。本发 明优先选择甲醇作溶剂进行酯化。
[0024] α，7α-二羟基-6α-乙基-5β_胆烷-24-醇(VI)的制备方法中，奥贝胆酸（I)与溶剂的 重量体积比为1:5~15;
[0025] ③酸性条件下酯化后经还原制得的3α，7α-二羟基-6α-乙基-5β-胆烷-24-醇(VI)， 其中，所述的酸的种类和用量均可为本领域此类反应的常规溶剂和用量，本发明优选下述 酸和酸的用量:其中，所述的酸较佳的为盐酸，硫酸，甲磺酸;所述的酸的用量较佳的为0.2 ~0.4当量，调节溶液βΗ至1~2。
[0026] ④酸性条件下酯化后经还原制得的3α，7α-二羟基-6α-乙基-5β-胆烷-24-醇(VI)， 其中，所用还原剂选自Na、K、氯化亚锡、硼氢化钠、硼氢化钾、红铝、四氢铝锂、三叔丁氧基氢 化铝锂、三氯化铈，以及硼氢化钠、硼氢化钾等与路易酸复合还原剂。本发明优先选用四氢 铝锂作为还原剂。
[0027] ⑤奥贝胆酸酯化物经还原制得的3α，7α-二羟基-6α-乙基-5β_胆烷-24-醇(VI)，提 取所用溶剂选自正丁醇、异丙醇、乙醇、甲醇、乙酸乙酯、甲苯、丙酮、二氯甲烷、氯仿、乙腈、 四氢呋喃。本发明优选乙酸乙酯溶剂。
[0028] ⑥3α，7α-二羟基-6α-乙基-5β_胆烷-24-醇(VI)的制备方法中，3α，7α-二羟基-6α- 乙基-5β-胆烷-24-醇(VI)精制采用硅胶柱层析方法，洗脱剂采用石油醚/乙酸乙酯体系，优 选乙酸乙酯:石油醚= 1:4~6。
[0029] (3) 3，7-二酮-6α-乙基-5β-胆烷-24-酸(VII)的制备
[0030] ①3，7-二酮-6α-乙基-5β-胆烷-24-酸(VII)以奥贝胆酸（I)为原料，经氧化得到， 反应温度-10~30°c。
[0031] ②3,7-二酮-6α-乙基-5β_胆烷-24-酸(VII)的制备方法中，所用氧化试剂选自 NBS、过氧化氢、过氧乙酸、重铬酸钠、三氧化铬、硝酸、高锰酸钾、过硫酸铵、次氯酸钠。本发 明优先选用Jones试剂(三氧化络）。
[0032] ③3，7-二酮-6α-乙基-5β-胆烷-24-酸(VII)的制备方法中，所用溶剂选自丙酮、四 氢呋喃、二氯甲烷、氯仿、乙腈、乙酸乙酯、四氢吡咯、三乙胺、吡啶、哌啶、Ν-甲基吡咯烷酮、 Ν，Ν-二甲基甲酰胺、Ν，Ν-二甲基乙酰胺，本发明优选丙酮作为溶剂。本发明优先选用丙酮溶 剂。
[0033] 3，7-二酮-6α-乙基-5β-胆烷-24-酸(VII)的制备方法中，奥贝胆酸（I)与溶剂的重 量体积比为1:15~25。
[0034] ④Jones试剂氧化制得的3,7_二酮-6α-乙基-5β-胆烷-24-酸(VII)，提取所用溶剂 选自正丁醇、异丙醇、乙醇、甲醇、乙酸乙酯、甲苯、丙酮、二氯甲烷、氯仿、乙腈、四氢呋喃。本 发明优选乙酸乙酯溶剂。
[0035] ⑤3，7-二酮-6α-乙基-5β_胆烷-24-酸(VII)的制备方法中，3，7-二酮-6α-乙基-5 β-胆烷-24-酸(VII)精制采用硅胶柱层析方法，洗脱剂采用甲醇/二氯甲烷体系，优选甲醇： 二氯甲烷= 1:20~30。
【具体实施方式】
[0036]下列实例进一步说明本发明，但本发明并不受其限制。
[0037] 实施例1:3α，7β_二羟基-6-乙基-5β_胆烷-24