漾濞核桃青皮中一种异黄酮苷及其制备方法和抗炎用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于树木化学成分分析及天然产物应用领域，具体涉及一种文献中从未报 道过的异黄酮苷即3'-甲氧基-5'-羟基-异黄酮-7-0-(2〃，6〃_二-Ο-α-L-吡喃鼠李糖基)-β- 比喃葡萄糖苷（3' -methoxy-5' -hydroxy-isoflavone-7-〇-(2〃，6〃-di_〇-a-L-rhamnopyranosy 1) -β-D-glucopyranos ide)及其制备方法和抗炎用途。
【背景技术】
[0002] 漾擤核桃Juglans sigillata Dode，别名漾擤泡核桃、茶核桃等，是胡桃科 Juglandanceae胡桃属Juglans植物中的一种落叶乔木。在我国西南部地区的贵州、云南、西 藏、四川西部和雅鲁藏布江下游等地漾濞核桃分布较广(刘成娇等，大理学院学报，2015,14 (8): 15~17)。胡桃属植物具有悠久的药用历史，在民间广泛用其清热解毒、祛风疗癣、止痛 止痢，近年来被用以治疗肺癌、食道癌及胃癌等(李冬梅等，中药草，2015,46(7):962~965; Si，et al，Chemistry of Natural Compounds，2011，47(3)，442~445)〇
[0003] 漾濞核桃青皮为漾濞核桃未成熟之前的青果皮。此前，Si等从漾濞核桃青皮甲醇 提取物的水萃取部位中共分离得到5个化合物：（ + )_儿茶素、（-)_表儿茶素、（ + )_儿茶素(4 -8〃）-( + )-儿茶素、1，2，4,6_四-〇-没食子醜基-β-D-P比喃匍萄糖、1，2，3，4,6_五-〇-没食子 酰基-β-D-吡喃葡萄糖，并通过清除DPPH自由基实验揭示了提取鉴定的5种化合物具有显著 的抗氧化活性（Si，et al·，Journal of Biobased Materials and Bioenergy，2011，5(2): 287~292)。李冬梅等从漾濞核桃青皮甲醇提取物的石油醚部位和醋酸乙酯部位中共分离 得到11个化合物，分别鉴定为芥子醛、顺-A 1()-二十碳烯酸、5α，8α_表二氧化麦角留-6，22E-二烯-3β_醇、5,8_二羟基-4-甲氧基-α-四氢萘醌、核桃酮、4,5_二羟基-α-四氢萘醌、4,5,8_ 三羟基-α-四氢萘醌、5-羟基-4-甲氧基-α-四氢萘醌、5-羟基-2-甲氧基-1，4-萘醌、柚皮素、 β-谷甾醇(李冬梅等，中药草，2015,46(7):962~965)。
[0004] 本发明利用液液萃取和色谱分离技术从漾濞核桃青皮中制备得到一种新的且具 有显著抗炎活性的异黄酮苷化合物。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种具有显著抗炎活性的异黄酮苷即3'-甲氧基-5' _羟基_ 异黄酮-7-0-(2〃，6〃-二-Ο-α-L-吡喃鼠李糖基)-?Η)_吡喃葡萄糖苷(该化合物对应的英文 名为3' -methoxy-5' -hydroxy-isoflavone_7-〇-(2〃，6〃-di-〇-a-L_rhamnopyranosyl )-β_ D-glucopyranoside)〇
[0006] 本发明的另一个目的是提供从胡桃科胡桃属中的漾濞核桃树的青果皮即漾濞核 桃青皮中制备3'-甲氧基-5'-羟基-异黄酮-7-0-(2〃，6〃_二-Ο-α-L-吡喃鼠李糖基)-?Η)_吡 喃葡萄糖苷的方法。
[0007] 本发明的第三个目的是提供3'-甲氧基-5'-羟基-异黄酮-7-0-(2〃，6〃_二-Ο-α-L-吡喃鼠李糖基)-?Η)_吡喃葡萄糖苷的抗炎活性功效用途。
[0008] 本发明的技术方案概述如下：
[0009] 下述结构式的化合物：
[0010]
[0011 ]从漾濞核桃青皮中制备3'-甲氧基V -羟基-异黄酮-7-0-(2〃，6〃-二-Ο-α-L-啦喃 鼠李糖基)-β-D-吡喃葡萄糖苷的方法，包括如下步骤：
[0012] (1)取洗净、阴干并经深冷粉碎的漾濞核桃青皮，按质量吡为1:2~1:8加入体积百 分浓度为50 %~80 %的乙醇水溶液，常温提取或加热提取或微波辅助提取或超声波辅助提 取1~5次，每次0.5~72h，过滤，滤液减压浓缩至原体积的2%~10%，得粗提物：
[0013] ⑵加入粗提物质量1~5倍的水，搅拌，加入粗提物质量2~6倍的氯仿萃取1~5 次，分离掉氯仿层，向剩余水层中加入粗提物质量2~6倍的正丁醇萃取1~5次，分离正丁醇 层和最后水层，将正丁醇层减压浓缩得正丁醇萃取相；
[0014] (3)正丁醇萃取相经硅胶柱层析和凝胶柱层析之至少一种制备得到3'-甲氧基-5/-羟基-异黄酮-7-〇-(2〃，6〃-二-〇-€?-吡喃鼠李糖基)-0-〇-吡喃葡萄糖苷。
[0015] 3'-甲氧基-5'-羟基-异黄酮-7-0-( 2〃，6〃 -二-Ο-α-L-吡喃鼠李糖基)-β-D-吡喃葡 萄糖苷在制备抗炎产品中的应用。
[0016]实验证实本发明的化合物分子式为C34H42O19,化学名为3'-甲氧基-5'-羟基-异黄 酮-7-〇-(2〃，6〃-二-〇-€?-吡喃鼠李糖基)-0-〇-吡喃葡萄糖苷，该化合物对应的英文名为 3'-methoxy-5 7-hydroxy-isoflavone_7-〇-(2〃，6〃-di-〇-a-L_rhamnopyranosyl)-0_D- 区111(：(^71311〇8丨(16。该化合物为白色无定型粉末，其恪点为174~176<€，旋光度为[?]^ )-23 · 2。（c，0 · 5，MeOH) Positive FAB-MS m/z[M+H]+为755，m/z[M+Na]+为777，m/z[M+K]+为 793〇
[0017] 本发明提出的制备方法具有原料成本低、天然分子不被破坏、产物得率高、操作方 法易捷、适合大规模生产等特点。
[0018] 实验证实RAW264.7巨噬细胞经LPS诱导后，甲氧基-δ'-羟基-异黄酮-7-0-(2〃， 6〃 -二-Ο-α-L-吡喃鼠李糖基)-?Η)_吡喃葡萄糖苷可引起细胞释放Ν0和TNF-α明显减少，且 同条件下腸释放量小于正对照组如-11161：1171-1^-3找；[11；[116。试验结果充分表明3 /-甲氧基- 羟基-异黄酮-7-0-(2〃，6〃-二-Ο-α-L-吡喃鼠李糖基)-i3-D-吡喃葡萄糖苷具有显著的抗 炎活性，可广泛应用在抗炎药品、食品和保健品等产品中。
【具体实施方式】
[0019] 参考下列实施例将更全面、更容易地理解本发明，给出实施例是为了更清楚地阐 明本发明，而不是以任何方式限制本发明。
[0020] 实施例1:
[0021 ] 3'-甲氧基-5'-羟基-异黄酮-7- 0-( 2〃，6〃 -二-Ο-α-L-吡喃鼠李糖基)-β-D-吡喃葡 萄糖苷的制备
[0022] (1)取洗净、阴干并经深冷粉碎的漾濞核桃青皮，按质量比为1:3加入体积百分浓 度为75%的乙醇水溶液，常温提取4次，每次60h，过滤，滤液减压浓缩至原体积的5%，得粗 提物；
[0023] (2)加入粗提物质量4倍的水，搅拌，加入粗提物质量5倍的氯仿萃取4次，分离掉氯 仿层，向剩余水层中加入粗提物质量5倍的正丁醇萃取4次，分离正丁醇层和最后水层，将正 丁醇层减压浓缩得正丁醇萃取相；
[0024] (3)正丁醇萃取相经硅胶柱层析制备得到甲氧基-5夂羟基-异黄酮_7-0-(2〃， 6〃_二-Ο-α-L-吡喃鼠李糖基)-?Η)-吡喃葡萄糖苷。
[0025]该化合物的结构鉴定：
[0026] 快原子轰击质谱数据显示该化合物的m/z[M+H]+为755，m/z[M+Na]+为777，m/z[M+ K]+为793,即其分子量为754。结合该化合物的1Η和13C核磁共振图谱数据得出其分子式为 C34H42〇19。以质量百分比为1 %的三氯化铁乙醇溶液进行TLC薄层色谱喷雾显色，反应呈深绿 色，表明该化合物分子中含有酚羟基（Si，et al，Holzforschung，2013,67(4):357~363)。 该化合物的红外光谱在1645CHT1(异黄酮羰基）、1750〇1^(乙酸羰基)和3410CHT 1(羟基)处有 强吸收峰。其咕匪1?谱在6(18.35(1!1，8，!1-2)处的特征质子峰，结合紫外光谱中211、255和 295nm处的强吸收峰，揭示该化合物是一个异黄酮类化合物（Rukachaisirikul，et al.， Phytochemistry，2002，60:827 ~834)。在 13CNMR 谱中，Sc153.6(C-2)和 Sc174.9(C-4)表明该 化合物是C-5位无羟基的异黄酮苷(曹正中，等，药学学报，1999，34(5): 392~394)。
[0027]在1HNMR谱中，显示该化合物中含有一个β-D-吡喃葡萄糖苷（1个端基质子δΗ5.16 (lH，d，J = 7.5Hz，Η-1〃））、三个甲氧基质子)、两个α-L-吡喃鼠李糖