C6H4)，7.36(d，J = 8.2Hz，2H，-C6H4)，6.53(s，2H，-C6H3)，6.48(s，1H，-C6H3)，3.82(s，6H，-0CH3)，3.78(s，2H，-CH2)，3.75(s， 2H，-NCH3)，2 · 46(s，3H)，1 · 35(s，9H，-CH3) · Elemental analysis( % )calcd · for C26H31NO3 (405.52):C77.01,H 7.71,N 3.45；Found:C 77.04,H 7.74,N 3.41.
[0039] 实施例5
[0040] 3-(4-叔丁基苯亚甲基)-5-(3,4,5-三甲氧基苯亚甲基)-4-哌啶酮(E)的合成 [0041 ] 将O.Olmol的N-甲基-4-哌啶酮与0.012mol的4-叔丁基苯甲醛和O.OlOmol 3,4,5-三甲氧基苯甲醛混合于20mL甲醇和水的溶液中，室温下加入0.5mL吡咯，常温搅拌反应10h， 通过薄层色谱法(TLC)薄层分析确定反应终点。反应完毕后沉淀抽滤，所得沉淀用200~300 目硅胶柱层析(洗脱剂:石油醚/乙酸乙酯= 2:1)得亮黄色粉末，即发明产物3-(4-叔丁基苯 亚甲基)-5-(3,4,5_三甲氧基苯亚甲基)-4-哌啶酮(E)，2.7g，收率为62%。
[0042] Mp:124~126Γ·IR(cm-3 :2950(s)，2776(m)，1666(m)，1579(s)，1506(s)，1452 (8),1330(8),1268(8),1180(111),1015(8),930(8),823(8).? NMR(400MHz，αχη3)δ7· 81 (s， lH，-C = CH)，7.75(s，lH，-C = CH)，7.46(d，J = 8.0Hz，2H，-C6H4)，7.36(d，J = 8.0Hz，2H，-C6H4)，6.63(s，2H，-C6H2)，3.90(d，9H，-0CH 3)，3.79(d，4H，-CH2)，2.48(s，3H，-NCH3) ,1.35 (s,9H,-CH3). Elemental analysis( % )calcd. for C27H33N〇4(435.55): C 74.45,H 7.64,N 3.22；Found:C 74.52,H 7.60,N 3.20.
[0043] 实施例6
[0044] 3-(4-叔丁基苯亚甲基)-5-(2-溴-4-氟苯亚甲基)-4-哌啶酮(F)的合成
[0045] 将O.Olmol的N-甲基-4-哌啶酮与O.Olmol的4-叔丁基苯甲醛和O.Olmol 2-溴-4-氟苯甲醛混合于18mL异丙醇和水的溶液中，室温下滴加14mLl5%氢氧化钠溶液，35°C搅拌 反应10h，通过薄层色谱法(TLC)薄层分析确定反应终点。反应完毕后沉淀抽滤，所得沉淀用 200~300目硅胶柱层析(洗脱剂:石油醚/乙酸乙酯= 3:1)得亮黄色粉末，即发明产物3-(4-叔丁基苯亚甲基)-5-(2-溴-4-氟苯亚甲基)-4-哌啶酮(F)，3.18g，收率为68%。
[0046] Mp:89~91Γ·IR(cm-4 :2957(s)，2863(m)，1666(m)，1598(s)，1477(s)，1267(s)， 1162(8),977(8),856(8),817(8),680(8).^^^(40010^,0)(:13)37.84((1,211,-0 = 00, 7.45(d ,J = 8.2Hz,2H,-C6H4) ,7.41 (d ,J = 8.2Hz , 1H,-C6H3), 7.36(d ,J = 8.1Hz , 2H,-C6H4), 7.20(m,lH,-C6H3),7.07(t ,J = 8.2Hz,1H,-C6H3),3.79(s,2H,-CH2),3.55(s,2H,-CH2),2.42 (s , 3H, -NCH3 ),1.35(s,9H, -CH3). Elemental analysis (%)calcd.for C24H2 5BrFN0 (442.36):C 65.16,H 5.70,N 3.17；Found:C 65.21,H 5.73,N 3.12.
[0047] 抗肿瘤活性评价
[0048] 本发明的叔丁基取代的不对称哌啶酮化合物A~F的抗肿瘤活性评价。
[0049] 本发明中抗肿瘤活性评价采用MTT法(MTT为[3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基 四氮唑溴盐])。本发明选用人单核粒细胞白血病细胞系THP-1细胞实验，细胞来自滨州医学 院国家中医药管理局"方剂效应与临床评价"重点研究室。阿霉素(D0X)作为阳性对照药。
[0050] 取对数生长期的细胞配制成4X 104个/mL的细胞悬液，接种于96孔培养板中，每孔 加200yL，培养24h后加入20yL不同浓度的合成化合物，继续培养24h后，向每孔加入20yL的 MTT试剂，37°C孵育4小时后，弃上清液，每孔加150yL DMS0，振荡lOmin充分溶解结晶，用酶 标仪测定在570nm处的吸光度，计算IC5Q。所用化合物A~F的浓度分别是10、8、5、3、2、1、0.5、 0.1、0.05、0.01yg/mL，用阿霉素(DOX)作阳性对照，所用的浓度分别是8、6、5、3、1.5、1、0.8、 0.5、0. lyg/mL，每个浓度设6个复孔。
[0051 ] 表1.化合物A~F对THP-1细胞的半数抑制浓度IC50
[0053] 从表1中可以看出化合物D、E对THP-1肿瘤细胞系的IC5Q值低于ΙΟμΜ，特别是化合物 Ε 对 ΤΗΡ-1 的 IC5Q 值只有 2·76μΜ。
[0054] 参考文献：
[0055] [1]Dimmock，J.R;Elias，D.W;Beazely，M.A;Kandepu，Ν·Μ·Bioactivities of chalcones[J].Curr. Med.Chem.,1999,6(12):1125-1149.
[0056] [2]Subramaniam D；May R；Sureban S.M；Lee,K.B；George R；Kuppusamy P； Ramanujam ,R.P；Hideg K；Dieckgraefe,B.K；Houchen,C.ff；Anant S. Diphenyl difluoroketone:a curcumin derivative with potent in vivo anticancer activity [J].Cancer Res,2008,68(6),1962-1969.
[0057] [3]Kia Y；0sman H；Kumar,R.S；Murugaiyah V；Basiri A；Perumal S；ffahab,H.A； Bing,C.S. Synthesis and discovery of novel piperidone-grafted mono-and bis- spirooxindole-hexahydropyrrolizines as potent cholinesterase inhibitors[J] .Bioorg Med Chem，2013,21(7)，1696-1707.
[0058] [4]Sun,J.F；Zhang,S.P；Yu C；Hou,G.G；Zhang,X.F；Li ,K.K；Zhao F.Design, synthesis and bioevaluation of novel N-substituted_3，5_bis(arylidene)_4_ piperidone derivatives as cytotoxic and antitumor agents with fluorescent properties[J].Chem Biol Drug Des,2014,83(4):392-400.
[0059] [5]刘文帅，陈琴，孙居锋，王春华，赵峰，侯桂革.两个α，β_不饱和酮药物的合成及 抗肿瘤活性研究[J].分析测试学报，2015,34(8)，900-904.
[0060] [6]刘文帅，孙居锋，王春华，侯桂革.双吡啶α，β-不饱和酮抗肿瘤药物的细胞摄取 研究[J].化学试剂，2015,37(11) ,885-888.
[0061 ] [7]Liu,L.-D.；Liu,S.-L.；Liu,Z；-X.；Hou.G.-G. Synthesis , structure , antitumor activity of novel pharmaceutical cocrystals based on bispyridyl-substituteda,β-unsaturated ketones with gallic acid[J].J Mol Struct.2016 , 1112，l-8〇
【主权项】
1. 具有抗肿瘤活性的叔下基取代的不对称赃晚酬化合物，分别命名为3-(4-叔下基苯 亚甲基)-5-(2-甲氧基苯亚甲基)-4-赃晚酬A、3-(4-叔下基苯亚甲基)-5-(4-甲氧基苯亚甲 基)-4-赃晚酬B、3-(4-叔下基苯亚甲基)-5-(3,4-二甲氧基苯亚甲基)-4-赃晚酬C、3-(4-叔 下基苯亚甲基)-5-(3,5-二甲氧基苯亚甲基)-4-赃晚酬D、3-(4-叔下基苯亚甲基)-5-(3,4, 5-S甲氧基苯亚甲基)-4-赃晚酬E、3-(4-叔下基苯亚甲基)-5-(2-漠-4-氣苯亚甲基)-4-赃 晚酬F，特征在于，其结构式为：2. 具有抗肿瘤活性的叔下基取代的不对称赃晚酬化合物的制备方法，特征在于，它包 括如下具体步骤： 将N-甲基-4-赃晚酬、4-叔下基苯甲醒和另一种芳醒按照一定摩尔比混合在醇水溶液 中，加入适量催化剂，控制反应溫度和反应时间，薄层分析跟踪反应进程，反应完全后，沉淀 抽滤，硅胶柱层析纯化得到具有抗肿瘤活性的叔下基取代的不对称赃晚酬化合物A~F;并 通过红外光谱、核磁共振和元素分析验证其结构的正确性。3. 如权利要求2所述的具有抗肿瘤活性的叔下基取代的不对称赃晚酬化合物的制备方 法，其特征在于 所述另一种芳醒是2-甲氧基苯甲醒、4-甲氧基苯甲醒、3,4-二甲氧基苯甲醒、3,5-二甲 氧基苯甲醒、3,4,5-S甲氧基苯甲醒、2-漠-4-氣苯甲醒中的一种。4. 如权利要求2所述的具有抗肿瘤活性的叔下基取代的不对称赃晚酬化合物的制备方 法，其特征在于 所述一定摩尔比是指4-叔下基苯甲醒与另一种芳醒的比值0.5:1.5~1.5:0.5,运两种 醒的摩尔量之和为N-甲基-4-赃晚酬的1.8~2.5倍。5. 如权利要求2所述的具有抗肿瘤活性的叔下基取代的不对称赃晚酬化合物的制备方 法，其特征在于 所述醇水溶液的醇为甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇中的任意一种。6. 如权利要求2所述的具有抗肿瘤活性的叔下基取代的不对称赃晚酬化合物的制备方 法，其特征在于 所述催化剂是指氨氧化钢溶液、氨氧化钟溶液、赃晚、化咯中的一种，氨氧化钢溶液、氨 氧化钟溶液的质量浓度为5%~25%。7. 如权利要求2所述的具有抗肿瘤活性的叔下基取代的不对称赃晚酬化合物的制备方 法，其特征在于 所述反应溫度是指20~80°C。8. 如权利要求2所述的具有抗肿瘤活性的叔下基取代的不对称赃晚酬化合物的制备方 法，其特征在于 所述反应时间是指2~12小时。9. 如权利要求2所述的具有抗肿瘤活性的叔下基取代的不对称赃晚酬化合物的制备方 法，其特征在于 所述硅胶柱层析是指选用200~300目硅胶、300-400目硅胶中的一种，洗脱剂选用石油 酸/乙酸乙醋= 10:1~1:1，进行柱层析。10. 权利要求1-9任一权利要求所述的具有抗肿瘤活性的叔下基取代的不对称赃晚酬 化合物在制备新型抗肿瘤药物中的应用。
【专利摘要】本发明涉及六个具有抗肿瘤活性的叔丁基取代的不对称哌啶酮化合物及其制备方法，属于抗肿瘤药物及其制备方法技术领域。其制备方法是通过N-甲基-4-哌啶酮、4-叔丁基苯甲醛和另一种芳醛，进行克莱森-施密特缩合反应得到发明产物A～F。该化合物抗肿瘤活性好，可避免现在使用的抗肿瘤药的基因毒性，对正常细胞的毒性小。制备方法操作简便，反应条件温和，合成产率高，利于其在抗肿瘤领域的广泛推广。
【IPC分类】C07D213/68, A61P35/00, A61P35/02
【公开号】CN105646337
【申请号】
【发明人】侯桂革, 王春华, 孙居锋, 李宁, 陈琴, 燕珂
【申请人】滨州医学院
【公开日】2016年6月8日
【申请日】2016年3月18日