一种白藜芦醇亚甲胺及其制备方法与应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及白藜芦醇亚胺衍生物，特别是指一种白藜芦醇亚甲胺及其制备方法与 应用。
【背景技术】
[0002] 心血管疾病是严重危害人类健康的重大慢性疾病之一。据世界卫生组织(WHO)报 告，21世纪初期心血管疾病死亡率已占发达国家的近50%，发展中国家的25%，超过了艾滋 病的死亡率。在我国，随着生活方式的改变、人口老龄趋势的加快以及心血管疾病发病的年 轻化，心血管疾病问题也日益突出。目前冠心病已在我国致死性和残疾性疾病中居于首位， 每年有接近1〇〇万人死于心血管疾病。而不管是高血脂、高血压或者是高血糖引起的"三高 症"或是糖尿病等，最终都将引起动脉粥样硬化等一系列并发症，严重者甚至出现血栓、心 脑缺血等致命疾病。
[0003] 动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)是一种与血脂异常及血管壁成分改变有关 的疾病，主要累及弹性动脉及较多弹性纤维的肌性动脉。AS斑块会引发多种并发症，带来严 重的临床风险，这些并发症包括心肌梗塞、中风以及主动脉瘤。AS发生的细胞和分子机制尚 不明确，而目前被广泛接受的是Ross和Glomset于1973年提出的损伤反应假说，Ross[3]在 1999年继损伤反应假说后明确提出了炎症假说。研究常用的川芎嗪，其具有抗血小板凝集、 扩张小动脉、改善微循环和脑循环的作用，但是作为临床用药，仍然具有一系列的不良反 应。而已经作为临床用药的阿托伐他汀，则主要是降低血浆胆固醇和脂蛋白水平，减少低密 度脂蛋白的生产，但同样具有一系列不良反应，并且其抗AS能力仍不乐观。因此，寻求新的 毒副作用小、药效作用强的可应用于临床诊断的抗AS药物迫在眉睫。
【发明内容】
[0004] 本发明提出一种白藜芦醇亚甲胺及其制备方法与在制备抗动脉粥样硬化药物中 的应用，解决了现有技术中的抗动脉粥样硬化的药物治疗效果不显著，存在一系列的不良 反应的缺陷。
[0005] 本发明的技术方案是这样实现的：一种白藜芦醇亚甲胺，所述白藜芦醇亚甲胺的 结构式为：
[0007] -种白藜芦醇亚甲胺的制备方法，包括以下步骤：
[0008] 将白藜芦醇溶解于CH3CN和二甲基甲酰胺中，在冰水浴中逐滴P0C13，得到混合物， 将混合物置于室温下搅拌反应3h后加入到冰水混合物中得到黄色混合物，将黄色混合物置 于50-60°C下搅拌0.5-0.7h，再用乙酸乙酯提取，合并有机层后用清水洗涤，无水硫酸钠除 水，过滤，蒸发，并通过硅胶纯化，得到化合物1，为黄色粉末，产率89 %。熔点：210-212°C ; [0009]在室温下，将化合物1溶于乙醇的溶液中，加入氨水，50-55°C下加热搅拌反应大约 3_3.5h;使反应混合物冷却到0°C，结晶沉淀、过滤，在60-65Γ下烘干，并在乙醇中重结晶， 得到化合物2,化合物2即为白藜芦醇亚甲胺白藜芦醇亚甲胺的产率为83%;熔点：202-204 Γ。
[0010]所述的白藜芦醇亚甲胺的制备方法，包括以下步骤：
[0011 ] 将lmmo 1白藜芦醇溶解在95 · 7mmo 1 CH3CN和1 · 5mmo 1二甲基甲酰胺中溶解，在冰水 浴中0.5h内逐滴添加1.5mmolP0Cl3，混合物再在室温下搅拌反应3h后加到冰水混合物中得 到黄色混合物;将黄色混合物在50°C下搅拌0.5h，再用乙酸乙酯提取;合并有机层、用清水 洗涤，无水硫酸钠除水，过滤，蒸发，通过硅胶纯化，得到化合物1，为黄色粉末，产率89 %。熔 点：210-212°C;
[0012] 在室温下，，将lmmol化合物1溶于5ml乙醇中，再加入8mL氨水，50°C下加热搅拌反 应大约3h，使反应混合物冷却到0°C，结晶沉淀、过滤，在60°C下烘干，并在乙醇中重结晶，得 到化合物2,化合物2即为白藜芦醇亚甲胺白藜芦醇亚甲胺的产率为83%;熔点：202-204°C。 [0013]白藜芦醇-化合物1-化合物2:
[0015] -种白藜芦醇亚甲胺在制备抗动脉粥样硬化药物中的应用，将所述的白藜芦醇亚 甲胺应用于制备抗动脉粥样硬化药物中。
[0016] 本发明的有益效果为:本发明的白藜芦醇亚甲胺能显著抑制由油酸(0A)或PDGF诱 导的VSMCs的增殖与迀移，同时在整体水平上对主动脉粥样硬化有明显的改善作用，能够明 显降低血清TC、TG和LDL，并且显著升高HDL，同时能够显著减少动脉粥样硬化斑块的形成和 损伤，并且与其他应用于临床和医药研究上的常用药物阿托伐他汀和川芎嗪相比，仅10uM 即可达到常用药物30uM的药效，具有低用量、高疗效的显著特点。
【附图说明】
[0017] 为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现 有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本 发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可 以根据这些附图获得其他的附图。
[0018] 图1为0A对于VSMC异常增殖和迀移的影响结果示意图；
[0019] 图2为RMI对0A诱导的VSMCs异常迀移的影响结果示意图；
[0020] 图3为与常用药物对照，川芎嗪（100uM TMP)和阿托伐他汀30uM(AC)对0.4mM 0A诱 导的VSMCs异常迀移的影响结果示意图；
[0021]图4为RMI对0A诱导的VSMCs异常迀移的影响结果示意图【具体实施方式】；
[0022]图5为酶法测定血液结果示意图；
[0023]图6为血管石蜡切片结果示意图；
[0024]图7为HE染色得到的结果示意图；
[0025]图8为肝脏石蜡切片和HE染色得到的结果示意图；
[0026]图9为采用蛋白化学方法检测RMI是否对MAPK信号通路中ERK1/2的磷酸化产生影 响结果示意图。
[0027]下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完 整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于 本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他 实施例，都属于本发明保护的范围。
[0028]本发明中所选用的新化合物白藜芦醇亚甲胺(RMI)，为白藜芦醇亚胺衍生物。所谓 的白黎芦醇(resveratrol，3，4'，5-三羟基二苯乙稀），为天然植物的单体物质，是一种含有 茂类结构的非黄酮类多酚化合物，结构类似于雌激素乙蔗酚(如图1所示），主要存在于百合 科、寥科、豆科植物及葡萄皮、花生、虎杖、决明子、黎芦等70多种植物中。其抗氧化、抗炎、抗 增殖及延长寿命等作用受到广泛关注，近年来对其在心血管疾病治疗方面的药理学作用成 为研究热点。研究表明白藜芦醇，一典型的多酚化合物，对动脉粥样硬化、高血压、心衰等心 血管疾病具有潜在的多靶点的保护效应.。红葡萄酒的血管保护作用和白藜芦醇的对血管 平滑肌细胞的抗诱变功效，归因其具有多效性，包括雌激素受体调变(ER)，抗炎作用等，刺 激心脏保护基因以及热休克蛋白以及抗氧化应激的抗氧化蛋白的蛋白，诱发抗氧化应激。 白藜芦醇的几种保护效应的胞内通路都与氧化应激有关。
[0029] 但由于白藜芦醇的化学不稳定性，很易被氧化，并且在细胞中生物利用度较低。为 达到更好的生物利用度和更好的抗动脉粥样硬化的作用，我们在白藜芦醇有效功效框架的 基础上，对其改性，我们合成了大量的白藜芦醇衍生物，通过初步药理筛选这些衍生物，白 藜芦醇亚甲基亚胺(RMI)因其可能的抗氧化和抗动脉粥样硬化而被选用。尽管白藜芦醇对 体外血管细胞的保护作用都进行了广泛的研究，但是新合成RMI，作为其亚胺衍生物，RMI在 动脉粥样硬化方面的应用未见报道，是否在体内和体外对动脉粥样硬化具有更有效的改善 作用，特别是否通过氧化应激，抑制血管平滑肌细胞增殖，和保护血管内皮细胞，这仍然不 可知。因此，本研究的目的是评估新合成RMI在氧化损伤和降低动脉粥样硬化的严重性，改 善内皮细胞凋亡以及降低大鼠脂肪肝的潜力。因此，设计和其他临床药物阿托伐他汀(AC) 在抗动脉粥样硬化的作用的比较。
[0030] 发明人根据本发明提供的方法制备得到白藜芦醇亚甲胺(RMI):
[0031] 将白藜芦醇溶解于CH3CN和二甲基甲酰胺中，在冰水浴中逐滴P0C13，得到混合物， 将混合物置于室温下搅拌反应3h后加入到冰水混合物中得到黄色混合物，将黄色混合物置 于50-60°C下搅拌0.5-0.7h，再用乙酸乙酯提取，合并有机层后用清水洗涤，无水硫酸钠除 水，过滤，蒸发，并通过硅胶纯化，得到化合物1，为黄色粉末，产率89 %。熔点：210-212°C ;
[0032] 在室温下，将化合物1溶于乙醇的溶液中，加入氨水，50_55°C下加热搅拌反应大约 3_3.5h;使反应混合物冷却到0°C，结晶沉淀、过滤，在60-65Γ下烘干，并在乙醇中重结晶， 得到化合物2,化合物2即为白藜芦醇亚甲胺白藜芦醇亚甲胺的产率为83%;熔点：202-204 Γ。
[0033]发明人对白藜芦醇亚甲胺做了如下试验：