从海洋微藻中提取epa的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及EPA的提取技术领域，具体涉及一种从海洋微藻中提取EPA的方法。
【背景技术】
[0002] EPA，即二十碳五稀酸(Eicosapntemacnioc Acid)，属于Ω-3系列多不饱和脂肪 酸，其分子中含有20个碳原子和5个双键，首个双键位于甲基端的第三个碳原子上，是人体 自身不能合成的必需脂肪酸，大量研究证明，EPA具有多种生理功能。神经系统方面:EPA可 促进胎儿大脑皮层发育，预防阿尔兹海默症;免疫系统方面:EPA可以辅助治疗自身免疫缺 陷疾病，例如风湿性关节炎;能量代谢方面:EPA可综合调节人体内糖、脂代谢平衡，降低血 液中低密度脂蛋白胆固醇的含量，有效改善糖尿病、脂肪肝及各类心脑血管疾病等代谢综 合征。因此，EPA成为功能性食品的研究热点。
[0003] 早期EPA产品以富含DHA和EPA等多不饱和脂肪酸的深海鱼油为主。鱼油的生产过 程相对简单，成本较低，在较长一段的时间内占据着功能性油脂类产品的主要市场份额。然 而，随着近年来海洋渔业资源的日益萎缩，深海鱼类资源变得越发难以捕获。此外，全球水 体污染的加剧，使得鱼油中出现富集的DDT、二噁英及多联氯苯类物质等持续性有机污染 物，使得鱼油类EPA产品的生产面临诸多问题。
[0004] 鉴于以上原因，从海洋微藻中提取藻油EPA成为新的研究热点，而目前从海洋微藻 中提取EPA的方法，提取率通常较低，或者提取不完全，导致纯度低等问题。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种从海洋微藻中提取EPA的方法，该方法结合酶解法和 C02超临界萃取法来提取EPA，通过对提取压力等多种因素综合考虑，可以提取得到纯度为 95%以上的EPA。
[0006] 其技术解决方案包括：
[0007 ] -种从海洋微藻中提取E P A的方法，所述海洋微藻为钝顶螺旋藻和亚心形扁藻的 混合物，所述方法依次包括以下步骤：
[0008] a酶解，称取重量比为1:1的钝顶螺旋藻和亚心形扁藻，向其中加入碱性蛋白酶酶 解进行酶解，控制pH为7.5~8，温度50~60°C，酶解时间8~10小时，得酶解物；
[0009] b超临界C02萃取，将所述酶解物放置在萃取槽中，向所述萃取槽中加入改性剂，所 述改性剂的加入量为钝顶螺旋藻和亚心形扁藻总重量的5~8 %，控制温度为30~35°C，压 力为35MPa，萃取时间为30~40分钟；
[001 0] c精制，通过减压蒸馏的方式将萃取槽中的改性剂去除，收集得到EPA，EPA的提取 率通过下式(1)来计算：
[0012] 式中，mi为收集得到的EPA重量；
[0013] m为钝顶螺旋藻和亚心形扁藻的总重量。
[0014] 作为本发明的一个优选方案，所述改性剂为石油醚、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、乙醇或 甲醇中的一种。
[0015] 作为本发明的另一个优选方案，所述改性剂为乙酸乙酯。
[0016] 优选的，所述改性剂的加入量为钝顶螺旋藻和亚心形扁藻总重量的6 %。
[0017] 优选的，步骤b中，萃取温度为32°C，萃取时间为35分钟。
[0018]本发明所带来的有益技术效果：
[0019]本发明海洋微藻选用钝顶螺旋藻和亚心形扁藻的混合物，与单一的藻类相比，混 合后的海洋微藻中的油脂含量更高;在提取方法上，首先选用酶解法破壁技术，可将藻类细 胞中的蛋白物降解并释放出来，接着选用超临界C0 2进行萃取，由于EPA主要存在与极性脂 中，要在极性脂中提取EPA必须采用的是极性改性剂，因此本发明选用了石油醚、氯仿、乙 醚、乙酸乙酯、乙醇或甲醇中的一种作为极性改性剂，然而，实验发现选用不同的改性剂提 取率不同，我们在温度为32°C，压力为35MPa，选用等量的改性剂石油醚、氯仿、乙醚、乙酸乙 酯、乙醇和甲醇对酶解物进行处理，萃取30min，脂质用乙醇吸收，经浓缩后进行薄层分析， 从薄层分析结果来看，以石油醚作为改性剂只能萃取其中的低极性物质，用乙醇和甲醇作 为改性剂时，甘油酯斑点模糊或者不出现，而用乙酸乙酯则脂质的斑点较明显，多种改性剂 进行对比，选用乙酸乙酯作为改性剂时提取率最高。
[0020] 本发明可提高海洋微藻的EPA产量，降低了成本，减少有害物质的排放，减少环境 污染。
【具体实施方式】
[0021] 下面结合具体实施例对本发明做详细说明。
[0022] 本发明所用原料，亚心形扁藻通过商业渠道购买获得，将购买得到的亚心形扁藻 接种在海水中，控制温度为26~30°C，自然光照下培养4~5天，收集培养池中的上层藻液， 离心除去水分，干燥备用；
[0023] 钝顶螺旋藻也可通过商业渠道购买获得。
[0024] 实施例1:
[0025] 本发明，从海洋微藻中提取EPA的方法，具体包括以下步骤：
[0026] 步骤一、称取重量比为1: l(100g和100g)的钝顶螺旋藻和亚心形扁藻，向其中加入 5g碱性蛋白酶酶解进行酶解，控制pH为7.5，温度60 °C，酶解时间10小时，得酶解物；
[0027] 步骤二、超临界C02萃取，将酶解物放置在萃取槽中，向萃取槽中加入石油醚，石油 醚的加入量为l〇g，控制温度为35°C，压力为35MPa，萃取时间为30分钟；
[0028] c精制，通过减压蒸馏的方式将萃取槽中的改性剂去除，收集得到EPA的重量为 190g，EPA的提取率通过下式(1)来计算：
[0030]式中，im为收集得到的EPA重量；
[0031] m为钝顶螺旋藻和亚心形扁藻的总重量；
[0032] 计算得到EPA的提取率为95%。
[0033] 实施例2:
[0034]本发明，从海洋微藻中提取EPA的方法，具体包括以下步骤：
[0035] 步骤一、称取重量比为1: l(100g和lOOg)的钝顶螺旋藻和亚心形扁藻，向其中加入 5g碱性蛋白酶酶解进行酶解，控制pH为8，温度50°C，酶解时间8小时，得酶解物；
[0036] 步骤二、超临界C02萃取，将酶解物放置在萃取槽中，向萃取槽中加入甲醇，甲醇的 加入量为16g，控制温度为35°C，压力为35MPa，萃取时间为30分钟；
[0037] c精制，通过减压蒸馏的方式将萃取槽中的改性剂去除，收集得到EPA的重量为 195g，EPA的提取率通过下式(1)来计算：
[0039] 式中，im为收集得到的EPA重量；
[0040] m为钝顶螺旋藻和亚心形扁藻的总重量；