]图5、PLGA/PT/DoX支架的(a)溶血实验和(b )凝血实验结果；(c、d)血常规分析结果；(e)各主要脏器中的H&E染色结果，实验兔瘤内注射30 yLPLGA/PT/Dox，并赋予HIFU治疗(180W，刺激时间400ms，间隔200ms，刺激次数6次)，在注射第28天处死裸鼠，照片放大倍数为 100X ο
[0024]
【具体实施方式】
[0025]下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
[0026]实施例1
称取I g PLGA(分子量为10000道尔顿，LA = GA=1:1，购自济南岱罡生物科技有限公司)，与2 mLNMP混合，室温下搅拌12小时，得澄清透明溶液。取0.1g柠檬酸和0.1g碳酸氢钠，与上述PLGA溶液混合均匀，室温下超声分散(输出功率为500W)0.5小时，使柠檬酸和碳酸氢钠均匀地分散于上述PLGA溶液中。称取5mgDoX(购自北京华丰制药公司)，室温下超声分散于上述PLGA/PT分散体系中(输出功率为500W)0.5小时，得PLGA/PT/Dox。取50yL PLGA/PT/Dox溶液，迅速注入水中，待溶液完全相变后，即得PLGA/PT/Dox支架。PLGA、PLGA/PT和PLGA/Dox支架的制备方法同上。
[0027]从图1可以看出，由于PLGA具有强疏水性，PLGA/PT/Dox与水接触后，会快速交换出溶剂，发生“固-液”相变，形成PLGA/PT/Dox多孔块状支架材料。泡腾崩解剂和Dox均可以均匀地分散于PLGA溶液中(图1 (b))，形成的PLGA/PT/Dox溶液具有良好的可注射性(图1 (c、d))。泡腾崩解剂遇水后会剧烈反应，快速释放出CO2气泡;而包裹于PLGA内的泡腾崩解剂遇水后不会发生明显的崩解、融化，说明PLGA可以很好地控制泡腾崩解剂的分解，为其HIFU增效应用奠定了基础。
[0028]
实施例2
分别取0.5mL实施例1中PLGA和PLGA/PT/Dox，注射至装满蒸馏水的冻存管中。待相变完成后，将此冻存管置于37 °C摇床中孵育。在每个预定时间点，吸取I mL含有DOX的蒸馏水，并加入I mL对应的新鲜缓冲溶液。通过标准曲线确定释放出的DOX的浓度，计算DOX在不同时间点的累计释放总量，分析PLGA/PT/Dox支架对DOX的释放情况。为了研究HIFU对气泡的产生速度和药物释放速度的影响，在孵育5min后，分别用HIFlX 180W，刺激时间400ms，间隔200ms，刺激次数6次)刺激PLGA和PLGA/PT/Dox支架，观察气泡和药物释放情况，结果如图2所示。HIFU刺激前后，PLGA支架均无气泡产生，而HIFU刺激PLGA/PT/Dox支架则可以产生明显的气泡。此外，HIFU刺激后，Dox的释放速度明显加快。这是因为在无HIFU刺激时，疏水的PLGA阻止了泡腾崩解剂和药物与水分子的接触，因而无气泡产生，药物释放缓慢;而在HIFU刺激下，PLGA分子间隙瞬时增大，水分子与泡腾崩解剂和药物接触，产生气泡并释放药物。
[0029]
实施例3
取18只荷VX2肿瘤的新西兰大白兔(肿瘤直径约为1.5-2.0cm)，随机平均分为6组。分别注射①30yL生理盐水(空白对照组)；②30yL PLGA/Dox ；③30yL PLGA，并辅以HIFU刺激；④30yL PLGA/PT，并辅以HIFU刺激；⑤30yL PLGA/Dox，并辅以HIFU刺激；⑥30yL PLGA/PT/Dox，并辅以HIFU刺激(180W，刺激时间400ms，间隔200ms，刺激次数6次)。治疗完毕后，隔日记录裸鼠肿瘤体积。在治疗后第14天从第⑥组中各只实验图耳静脉取血，测试血液指标;治疗后第28天对第⑥组实验兔施安乐死，对各主要器官进行组织切片，通过H&E染色分析各主要脏器的病理变化情况(另取一致健康兔作为对照)。
[0030]实验结果表明，空白对照组肿瘤生长不受影响，而其他5组中肿瘤生长均被不同程度地抑制(如图3和图4所示)。在不施加HIFU刺激的情况下，Dox可以从PLGA/Dox支架中缓慢释放出来，抑制肿瘤的生长。施加HIFU刺激后，一方面HIFU可以起到消融肿瘤的修够；另一方面，HIFU可以促进药物的释放，增强Dox对肿瘤的化疗疗效。更重要的是，HIFU可以促进泡腾崩解剂与水分子的接触，产生的气泡可以吸收HIFU的能量，并振动、膨胀、破裂，而增加焦点组织的热量、对肿瘤组织造成更大的损伤。因此，PLGA/PT/Dox
支架可以实现对肿瘤的HIFU增效治疗和化疗治疗联合治疗，并完全抑制肿瘤的生长。如图3所示，在治疗后第7天，肿瘤即被完全清除。随着时间的推移，肿瘤完全消失，愈合肿瘤无复发。而空白对照组、或单独施加HIFU、单独施加化疗，均无法完全抑制肿瘤的生长。通过与健康裸鼠对比分析发现，实验组中大白兔的各项血液指标均在正常范围内，表明材料具有良好的血液相容性;心、肝、脾、肺和肾各器官既没有显示出明显的应激性毒性，又无长期的组织毒性;实验兔的体重在整个治疗过程中没有明显的变化，证明了 PLGA/PT/Dox支架在活体水平的低毒性。
[0031]
实施例4
取肝素锂稳定的健康成年人全血5 mL，离心3 min(转速为3000 r/min)，用PBS洗涤沉淀3次，得血红细胞。用PBS按照1: 100的比例配置成人血红细胞悬浊液，于40C冰箱中备用。
[0032]称取3份一定质量(150 mg左右)的实施例1中制备的PLGA/PT/Dox支架。按照支架质量:人血红细胞悬浊液体积之比为100 mg:1 mL将支架人血红细胞悬浊液中(对照组设置
0.3 mL人血红细胞悬浊液溶于1.2 mLPBS中，以及0.3 mL人血红细胞悬浊液溶于1.2 mL蒸馏水中)，并在37 °C环境下孵育lh。然后，将浸泡过支架的人血红细胞悬浊液离心I min(1000 rpm)，取上清液并用Lamada 25型紫外分光光度计测试上清液在540 nm处的吸光值，以评价材料的溶血性。结果表明PLGA/PT/Dox支架不会使血红细胞发生溶血(见附图5a)。
【主权项】
1.一种产泡聚乳酸羟基乙酸泡腾药物，其特征在于:由聚乳酸-羟基乙酸、泡腾物、化疗药物和有机溶剂组成，所述的有机溶剂为1-甲基-2-吡咯烷酮或N，N-二甲基甲酰胺中的任一种;所述的聚乳酸-轻基乙酸在有机溶剂中的浓度为0.1g/mL?1.0 g/mL；所述的泡腾物由有机酸和碱性物质组成，所述的有机酸在有机溶剂中的浓度为0.lg/mL?0.5 g/mL，所述的碱性物质在有机溶剂中的的浓度为0.lg/mL?0.5 g/mL，所述的有机酸为柠檬酸、酒石酸、枸橼酸、果酸、或者谷氨酸中的任一种;所述的碱性物质为碳酸钠、或者碳酸氢钠中的任一种;所述的化疗药物为盐酸阿霉素、紫杉醇、喜树碱、或者康普瑞汀中的任一种，所述的化疗药物在有机溶剂中的浓度为1-lOmg/mL。2.一种产泡聚乳酸羟基乙酸泡腾药物的制备方法，其特征在于包括如下步骤: 1)将聚乳酸-羟基乙酸溶解于有机溶剂中，搅拌使聚乳酸-羟基乙酸完全溶解，所述的聚乳酸-羟基乙酸在有机溶剂中的浓度为0.lg/mL?1.0 g/mL;所述的有机溶剂为1-甲基-2-吡咯烷酮或N，N-二甲基甲酰胺中的任一种； 2)在搅拌下，将泡腾物和化疗药物均匀分散于步骤(I)所得的聚乳酸-羟基乙酸溶液中，得聚乳酸-羟基乙酸/泡腾/化疗药物溶液;所述的泡腾物由有机酸和碱性物质组成，分散后，所述的有机酸的浓度为0.lg/mL?0.5 g/mL，所述的碳酸氢钠的浓度为0.lg/mL?0.5g/mL，所述的有机酸为柠檬酸、酒石酸、枸橼酸、果酸、或者谷氨酸中的任一种;所述的碱性物质为碳酸钠、或者碳酸氢钠中的任一种;所述的化疗药物为盐酸阿霉素、紫杉醇、喜树碱、或者康普瑞汀中的任一种，分散后，所述的化疗药物的浓度为1-lOmg/mL。3.根据权利要求1所述的一种产泡聚乳酸羟基乙酸泡腾药物的制备方法，其特征在于:所述的聚乳酸-羟基乙酸的分子量为1000?10000道尔顿，其中，单体乳酸和羟基乙酸的摩尔比为10:90?90:10。4.根据权利要求1所述的一种产泡聚乳酸羟基乙酸泡腾药物的制备方法，其特征在于:步骤(I)中所述的搅拌为磁力搅拌，其速率为50-200 r/min，时间为30分钟-12小时。5.—种产泡聚乳酸羟基乙酸泡腾药物支架材料的制备方法，其特征在于包括如下步骤: 1)将聚乳酸-羟基乙酸溶解于有机溶剂中，搅拌使聚乳酸-羟基乙酸完全溶解，所述的聚乳酸-羟基乙酸在有机溶剂中的浓度为0.lg/mL?1.0 g/mL;所述的有机溶剂为1-甲基-2-吡咯烷酮或N，N-二甲基甲酰胺中的任一种； 2)在搅拌下，将泡腾物和化疗药物均匀分散于步骤(I)所得的聚乳酸-羟基乙酸溶液中，得聚乳酸-羟基乙酸/泡腾/化疗药物溶液;所述的泡腾物由有机酸和碱性物质组成，分散后，所述的有机酸的浓度为0.lg/mL?0.5 g/mL，所述的碳酸氢钠的浓度为0.lg/mL?0.5g/mL，所述的有机酸为柠檬酸、酒石酸、枸橼酸、果酸、或者谷氨酸中的任一种;所述的碱性物质为碳酸钠、或者碳酸氢钠中的任一种;所述的化疗药物为盐酸阿霉素、紫杉醇、喜树碱、或者康普瑞汀中的任一种，分散后，所述的化疗药物的浓度为Ι-lOmg/mL; 3)将该聚乳酸-羟基乙酸/泡腾/化疗药物溶液加入水中，所述的聚乳酸-羟基乙酸/泡腾/化疗药物溶液和水的体积比为I: 10~30，形成产泡聚乳酸羟基乙酸泡腾药物支架材料。6.权利要求1所述的方法获得的一种产泡聚乳酸羟基乙酸泡腾药物在制备治疗肿瘤药物中的应用。7.通过权利要求5所述的方法获得的一种产泡聚乳酸羟基乙酸泡腾药物支架材料在制备治疗肿瘤药物中的应用。
【专利摘要】本发明一种产泡聚乳酸羟基乙酸泡腾药物，由聚乳酸-羟基乙酸、泡腾物、化疗药物和有机溶剂组成，聚乳酸-羟基乙酸在有机溶剂中的浓度为0.1g/mL～1.0？g/mL；泡腾物由有机酸和碱性物质组成，有机酸的在有机溶剂中的浓度为0.1g/mL～0.5？g/mL，所述的碱性物质在有机溶剂中的浓度为0.1g/mL～0.5？g/mL；所述的化疗药物在有机溶剂中的浓度为1-10mg/mL。还提供了一种产泡聚乳酸羟基乙酸泡腾药物和一种产泡聚乳酸羟基乙酸泡腾药物支架材料的制备方法。在HIFU的刺激下，支架材料中泡腾物产生气泡而增强HIFU对肿瘤的消融效果；负载的化疗药物释放出来，赋予支架化疗治疗肿瘤的能力。
【IPC分类】A61K31/704, A61K47/34, A61P35/00
【公开号】CN105641704
【申请号】
【发明人】王世革, 李想, 安潇, 刘璐, 黄明贤
【申请人】上海理工大学, 上海交通大学附属第一人民医院
【公开日】2016年6月8日
【申请日】2015年12月30日