市场上广泛应用，各种提取物的制备是已有的技术，得到的产品只是在物质浓度上有 所差别，其各种产品均可在本发明中实施应用。
[0037] 2)将各菌种发酵液混合后离心，弃上清，菌体沉淀洗涤，离心，灭菌，得菌泥；
[0038] 3)配制干粉保护剂;干粉保护剂的配方组成为:β-环状糊精10g、乳糖2_5g、海藻糖 0 · 5-2g、酵母膏0 · 5-2g、维生素EO · 05-0 · Ig、蒸馏水IOOmL;
[0039] 4)将干粉保护剂和菌泥混合，进行成膜反应，然后，将混合物预冻，再冷冻干燥，制 成具有包埋层的活性益生菌干粉；
[0040] 上述乳杆菌为保加利亚乳杆菌、德氏乳杆菌乳亚种和嗜酸乳杆菌中的至少两种等 比例混合菌，优选保加利亚乳杆菌、嗜酸乳杆菌两种等比例混合菌。
[0041] ⑵过筛
[0042]将步骤(1)中的益生菌干粉、黄芪提取物粉、枸杞提取物粉分别过80~100目筛。
[0043] (3)配料
[0044]称量过筛后的原料，按益生菌干粉70%、黄芪提取物粉20%、枸杞提取物粉10%配 料，以上含量均为重量百分比含量。
[0045] (4)混合
[0046] 将配好的益生菌干粉、黄芪提取物粉、枸杞提取物粉于三维混合机中混合至色泽 均匀一致，无色差，即得到具有提高免疫力功能的益生菌组合物。
[0047] 实施例2
[0048] 具体步骤同实施例1，不同之处在于：步骤(3)中配料:称量过筛后的原料，按益生 菌干粉60%，黄芪提取物粉30%，枸杞提取物粉10%配料，以上含量均为重量百分比含量。
[0049] 实施例3
[0050] 具体步骤同实施例1，不同之处在于：步骤(3)中配料:称量过筛后的原料，按益生 菌干粉60%，黄芪提取物粉20%，枸杞提取物粉20%配料，以上含量均为重量百分比含量。 [0051 ] 实施例4
[0052]具体步骤同实施例1，不同之处在于：步骤(3)中配料:称量过筛后的原料，按益生 菌干粉65%，黄芪提取物粉25%，枸杞提取物粉10%配料，以上含量均为重量百分比含量。 [0053] 实施例5
[0054]具体步骤同实施例1，不同之处在于：步骤(3)中配料:称量过筛后的原料，按益生 菌干粉65%，黄芪提取物粉20%，枸杞提取物粉15%配料，以上含量均为重量百分比含量。
[0055] 实验例1具有提高免疫力功能的益生菌组合物对ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化 反应的影响
[0056] (D实验动物
[0057] 选用SPF级昆明种雌性小白鼠48只，6-8周龄(体重18~22g)，在武汉大学生命科学 学院实验动物中心饲养室饲养。
[0058] (2)剂量与分组
[0059]实验按人体每日推荐量（以儿童体重30kg计，推荐量为0.05g/kg · BW)的5倍 (0.25g/kg · BW)、10倍(0.5g/kg · BW)和30倍（1.5g/kg · BW)分成对照组和低、中、高剂量组 共四组，每组12只。
[0060] (3)灌喂方法
[00611 实验时分别称取样品0.50、1.00、3. OOg，用纯净水配制成20mL的样液，分别供低、 中、高三个剂量组动物灌胃使用。动物在实验室条件下适应三天后，随机将48只鼠分为四 组，每组12只，每日灌胃给予实施例1组合物，给样量根据每周体重增减调整，连续灌胃四 周。对照组灌服无菌纯净水。
[0062] (4) ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验(MTT法）
[0063] 淋巴细胞增殖反应：将细胞悬液分两孔加入24孔培养板中，每孔ImL，一孔75yL (：〇1^液(相当于7.5以8/111〇，另一孔作为对照，置5%0)2,37°(：培养7211。培养结束前4小时，每 孔吸去上清液0.7mL，加入0.7mL无血清RPMI 1640培养液，同时加入MTT(5mg/mL)50yL/孔， 继续培养4h。培养结束后，每孔加入ImL异丙醇，吹打混匀，使紫色结晶溶解，分加于96孔培 养板中，作3个孔的平行样，以570nm波长测定光密度值。
[0064] (5)实验结果
[0065]对ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化反应，其高剂量组光密度差值高于对照组，差 异有显著性意义(见表1)。表明益生菌冲剂的脾淋巴细胞转化试验结果为阳性，受试样品具 有增强细胞免疫功能作用。
[0066]表1实施例1组合物对小鼠脾淋巴细胞转化反应的影响(X ± s)
[0068]实验例2具有提高免疫力功能的益生
菌组合物对受试动物NK细胞活性的影响 [0069] (1)实验动物
[0070] 选用SPF级昆明种雌性小白鼠48只，6-8周龄(体重18~22g)，在武汉大学生命科学 学院实验动物中心饲养室饲养。
[0071] (2)剂量与分组
[0072]实验按人体每日推荐量（以儿童体重30kg计，推荐量为0.05g/kg · BW)的5倍 (0.25g/kg · BW)、10倍(0.5g/kg · BW)和30倍（1.5g/kg · BW)分成对照组和低、中、高剂量组 共四组，每组12只。
[0073] (3)灌喂方法
[0074] 实验时分别称取样品0.50、1.00、3.OOg，用纯净水配制成20mL的样液，分别供低、 中、高三个剂量组动物灌胃使用。动物在实验室条件下适应三天后，随机将48只鼠分为四 组，每组12只，每日灌胃给予实施例1组合物，给样量根据每周体重增减调整，连续灌胃四 周。对照组灌服无菌纯净水。
[0075] (4)NK细胞活性测定(LDHfe)
[0076] NK细胞活性检测：取浓度为4*105个/mL的YAC-I靶细胞和效应细胞各IOOyL(效靶 比50:1 )，加入U型96孔培养板;靶细胞自然释放孔加靶细胞和培养液各IOOyL，靶细胞最大 释放孔加靶细胞和1%ΝΡ4〇各IOOyL;上述各项均设三个复孔，于37°C，5%C0 2培养箱中培养4 小时，然后将96孔培养板以1500rpm离心5分钟，每孔吸取上清IOOyL置平底96孔培养板中， 同时加入LDH基质液100yL，反应3分钟，每孔加入I mol/L Hcl30yL，在酶联仪492nm处测定 光密度值。
[0077] (5)实验结果
[0078]中、高剂量组的NK细胞活性高于对照组，差异均有显著性意义（见表2)。表明益生 菌冲剂对受试动物NK细胞活性试验结果为阳性，受试样品具有增强NK细胞活性作用。
[0079] 表2实施例1组合物对小鼠NK细胞活性的影响(n = ll，x土s)
NK细胞活性转换值:* = Sin-1 (P)1/2
[0081]上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的 限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所做的改变、修饰、替代、组合、简化， 均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 一种具有提高免疫力功能的益生菌组合物，其特征在于：它包含如下按质量百分比 计的组分:益生菌干粉60~70%，黄芪提取物粉20~30%，枸杞提取物粉10~20%。2. 根据权利要求1所述的具有提高免疫力功能的益生菌组合物，其特征在于:它包含如 下按质量百分比计的组分:益生菌干粉70%，黄芪提取物粉20%，枸杞提取物粉10%。3. 根据权利要求1或2所述的具有提高免疫力功能的益生菌组合物，其特征在于:所述 益生菌干粉由婴儿双歧杆菌、乳杆菌按质量比为1:1的比例组成。4. 一种制备如权利要求1所述的具有提高免疫力功能的益生菌组合物，其特征在于:它 包含如下步骤： (1) 选料:选取含有婴儿双歧杆菌、乳杆菌的益生菌干粉，优质黄芪提取物粉，枸杞提取 物粉； (2) 过筛:将选好的益生菌干粉、黄芪提取物粉、枸杞提取物粉分别过80~100目筛； (3) 配料:将过筛后的益生菌干粉、黄芪提取物粉、枸杞提取物粉称量备用;所述各组分 质量百分比为益生菌干粉60~70%，黄芪提取物粉20~30%，枸杞提取物粉10~20% ; (4) 混合:将配好的原料于三维混合机中混合至色泽均匀一致，无色差，即得到具有提 高免疫力功能的益生菌组合物。5. 根据权利要求4所述具有提高免疫力功能的益生菌组合物的制备方法，其特征在于： 所述益生菌干粉制备方法步骤如下： 1) 分别将婴儿双歧杆菌、乳杆菌经培养基活化后，接种于发酵培养基中，振荡培养，使 菌体浓度达到对数生长期0.5~1.0 X 109cfu/ml; 2) 将步骤1)中各菌种发酵液混合后离心，弃上清，菌体沉淀洗涤，离心，灭菌，得菌泥； 3) 配制干粉保护剂;所述的干粉保护剂的配方组成为:β-环状糊精10g、乳糖2-5g、海藻 糖0 · 5_2g、酵母膏0 · 5_2g、维生素 E0 · 05-0 · lg、蒸馏水 100mL; 4) 将干粉保护剂和菌泥混合，进行成膜反应，然后，将混合物预冻，再冷冻干燥，制成具 有包埋层的活性益生菌干粉。6. -种如权利要求1或2所述具有提高免疫力功能的益生菌组合物在制备提高免疫力 食品/保健品中的应用。7. 根据权利要求6所述的具有提高免疫力功能的益生菌组合物在制备提高免疫力食 品/保健品中的应用，其特征在于:所述具有提高免疫力功能的益生菌组合物使用在粉剂、 片剂、胶囊剂、颗粒、冲剂、果冻、饮料、乳制品、酸奶或小点心烘烤品中；所述保健品为粉剂、 片剂、胶囊剂、液体剂、悬浮液、乳剂、口服液、果冻或冲剂中任一种。8. -种提尚免疫力食品/保健品，其特征在于:它包含如权利要求1或2所述的具有提尚 免疫力功能的益生菌组合物。
【专利摘要】本发明公开了一种具有提高免疫力功能的益生菌组合物及其制备方法与应用，该益生菌组合物包含如下质量百分比计的组分:益生菌干粉60～70％，黄芪提取物粉20～30％，枸杞提取物粉10～20％。有益菌和中药是两类国际公认的益生物质，两者作用机理一脉相通，在具体使用过程中也能完美互补，共同发挥优势。本发明将益生菌与中药完美结合，利用中药的增菌作用，促进益生菌增殖，调节肠内微生态平衡，从而达到提高免疫力的效果。
【IPC分类】A61P37/04, A61K35/742, A23L33/135, A61K35/747, A61K35/745, A61K36/815
【公开号】CN105641209
【申请号】
【发明人】王业富, 胡诗梦, 董艳山, 向好
【申请人】武汉万德瑞生物技术有限公司
【公开日】2016年6月8日
【申请日】2016年2月2日