一种含棘孢木霉孢子粉的复配杀菌剂及其应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及生物防治领域，具体涉及一种含棘孢木霉孢子粉的复配杀菌剂及其应 用。
【背景技术】
[0002] 土传病害，病原菌通常通过侵染根部引起作物的根病乃至全株性病害，造成作物 减产甚至绝收，侵染作物广泛，如:水稻纹枯病、稻曲病、恶苗病等，小麦赤霉病、全蚀病等， 玉米大斑病、小斑病、茎基腐病等，大豆根腐病、棉花立枯病、烟草猝倒病、花生青枯病等，果 树根癌病，各种蔬菜的立枯病、猝倒病、枯萎病、根腐病、疫病、菌核病、黄萎病等，病菌都是 在土壤中或借助病残体在土壤中越冬，具有隐蔽、安全、难以防治等特点。
[0003] 土传病害的化学农药防治用药量大，超剂量使用导致残留严重超标。随着人们对 健康的重视和农业的可持续发展，生防菌的开发越来越受国家政策支持，但因生防菌产品 市场认识不足等问题导致推广具有局限性，生防菌产品开发成熟前生防菌与化学农药复配 产品具有重要的过渡作用，可以降低化学农药的用量，减少施药次数，从而降低了防治成本 以及对环境的污染。
[0004] 棘孢木霉：属于半知菌门，丝孢目，木霉属。是一类分布广、繁殖快、具有较高生防 价值且对一些广谱性杀菌剂不敏感的生防有益真菌，具有适应性强、抗菌谱广的特点，还能 促进植物生长，具有:重寄生作用、竞争作用、产生裂解酶、产生拮抗化合物，抑制或杀死病 原菌、诱导寄主植物对病原菌的防卫反应等作用方式，具有重要的经济意义。
【发明内容】
[0005] 本发明为解决上述中的技术问题，提供一种对作物土传病害见效快，产品中的棘 孢木霉孢子不受化学杀菌剂等影响的含棘孢木霉孢子粉的复配杀菌剂及其应用。
[0006] 本发明所采用的技术方案为：
[0007] -种含棘孢木霉孢子粉的复配杀菌剂，其组份及质量百分含量为： 棘孢木霉孢子粉 2-35% 化学杀菌剂 5-65%
[0008] 表面活性剂 5-10% 载体 补至100% ,
[0009] 所述的化学杀菌剂为氰烯菌酯、啶氧菌酯、烯酰吗啉、氰霜唑、氟吡菌胺、噁霉灵、 霜霉威盐酸盐、噻呋酰胺中的一种。
[0010] 所述表面活性剂为分散剂与润湿剂，所述分散剂为木质素磺酸盐、萘磺酸盐、聚羧 酸盐、聚萘甲醛磺酸盐、阴-非离子复合剂中一种或几种的混合;所述润湿剂为烷基苯磺酸 盐、烷基硫酸钠、硫酸盐类阴离子中一种或几种的混合。
[0011]所述载体为硫铵、轻钙、膨润土、高岭土、白炭黑中一种或几种的混合。
[0012]所述棘孢木霉孢子粉经热贮培养筛选并培养至少三代后，繁殖获得。
[0013]所述热贮培养的温度为40tC-55Γ。
[0014] 所述含棘孢木霉孢子粉的复配杀菌剂应用于防治农作物的土传病害。
[0015] 所述含棘孢木霉孢子粉的复配杀菌剂的施药方式为叶面喷雾、拌土、灌根、种子处 理。
[0016] 本发明的含棘孢木霉孢子粉的复配杀菌剂，具有以下技术效果：
[0017] 1、速效性好、持效期长、用量相对较少，可有效防治辣椒、番茄、草莓、黄瓜、葡萄、 棉花、油菜、西瓜、麦类、水稻等作物的土传病害，并降低对土壤环境的污染；
[0018] 2、产品中所选择的化学杀菌剂及表面活性剂，对棘孢木霉孢子粉的活性影响较 小；
[0019] 3、在润湿剂、分散剂等助剂的选择上，注重与棘孢木霉孢子粉的相容性，选择的助 剂对棘孢木霉孢子粉的没有影响或活性影响较小。
【具体实施方式】
[0020] 下面结合实施例对本发明作进一步地阐述。
[0021 ]实施例1耐高温棘孢木霉菌孢子粉的培育与筛选
[0022]对可湿性粉剂的热储稳定性的一般规定，FAO要求在(54 ± 2) °C储存14天或以上， 但当制剂既不适宜也不打算在炎热气候条件下使用，以及高温对制剂有负面影响时，可以 变更试验条件，变更条件(45 ± 2) °C储存6周或以上，（40 ± 2) °C储存8周或以上，（35 ± 2) °C 储存12周或以上，（30±2)°C储存18周或以上。故而，对于含棘孢木霉孢子粉的复配杀菌剂 来说，对其内的棘孢木霉孢子粉的可适应热储温度和可热储时长，均有较高的要求。
[0023] 1)将初代的棘孢木霉孢子粉分别在45°C和54°C的温度下热贮30天，并筛选出仍存 活的初代棘孢木霉孢子粉；
[0024] 2)将上述中存活的初代棘孢木霉孢子粉进行繁殖获得下一代孢子粉Fl，并批量培 育；
[0025] 3)再次分别以45°C和54°C的温度下对所得的棘孢木霉孢子粉热贮，获得孢子粉 F2;
[0026] 4)重复上述步骤两次，获得可耐高温的棘孢木霉孢子粉。
[0027] 由上述中获得的棘孢木霉孢子粉萌发为棘孢木霉菌株，并于各温度下热贮8周，再 于40 °C热贮30天，测定活孢率如下：
[0028] 表1高温培育棘孢木霉活孢率
[0030]结果表明，通过高温热贮筛选出的孢子通过培育后较原孢子具有耐高温的特性， 且经过试验大量数据得知，经高温热贮后并繁殖的的棘孢木霉菌株，具有存活率高、萌发快 的优势。
[0031 ]实施例2化学杀菌剂的筛选
[0032] (1)不同杀菌剂对木霉菌丝生长的抑制作用
[0033] 采用菌丝生长速率测定法测定不同杀菌剂对棘孢木霉菌丝生长的抑制作用，筛选 出能与棘孢木霉孢子粉复配的化学杀菌剂。
[0034] 方法:测定各药剂登记用量范围内对棘孢木霉菌丝生长抑制情况。首先将各药剂 配制成一定浓度母液，根据设定的浓度吸取所需要的体积，加入到三角瓶中。三角瓶含有融 化了的PDA培养基，通常45 °C加入，混合均匀后分别倒入到灭菌的培养皿，为使观察更持久， 选用12cm培养皿。用5mm打孔器切取在PDA培养基培养2天的木霉，接种在带药培养基中央， 置于28°C培养，每隔浓度3次重复。4天后测量各处理的菌落直接，与对照比较计算各药剂处 理对菌落扩展的生长抑制率。并观察各处理长满培养皿的天数。
[0035] 表2药剂对木霉菌丝生长抑制效果
[0039] 备注:推荐用量信息来自中国农药信息网登记用量。每亩地按两桶水60L计算。实 验分两次完成，采用两个对照，处理1-12参照CK-I，处理13-19参照CK-2。
[0040] 结果表明，12种杀菌剂中，登记使用剂量情况下，对棘孢木霉菌丝生长抑制效果较 强的杀菌剂有:啶酰菌胺、多菌灵、咪鲜胺、苯醚甲环唑，即不考虑做复配研究。对棘孢木霉 菌丝生长抑制效果较弱的杀菌剂，即可能与棘孢木霉孢子粉复配的杀菌剂有:氰烯菌酯、啶 氧菌酯、吡唑醚菌酯、嘧菌酯、氰霜唑、噁霉灵、烯酰吗啉、氟吡菌胺、霜霉威盐酸盐、噻呋酰 胺。
[0041 ] (2)不同杀菌剂对棘孢木霉孢子萌发抑制效果
[0042]测定各药剂登记用量范围内对棘孢木霉孢子萌发抑制情况。首先将各药剂配制成 一定浓度母液，根据设定的浓度吸取所需要的体积，加入到棘孢木霉孢子悬浮液中，混合震 荡2小时后，吸取200微升涂布在HM培养基上，28°C培养10-12小时后，显微镜下观察并计算 萌发抑制率。
[0043]表3化学杀菌剂对棘孢木霉孢子萌发抑制效果
[0047] 备注:推荐用量信息来自中国农药信息网登记用量。每亩地按两桶60L计算。
[0048] 本次实验分三次完成，处理2、4、5、6、7、8、9、10参照CK-I对照，处理11和12参照CK-2对照，处理1、处理3和处理13-19参照CK-3对照，CK-3孢子采用新一批特殊培养后收集的棘 孢木霉孢子粉。
[0049] 结果表明，12种杀菌剂中，在登记推荐使用剂量情况下，对棘孢木霉孢子萌发抑制 效果较好的杀菌剂有：啶酰菌胺、多菌灵、咪鲜胺、苯醚甲环唑，即不考虑进一步复配研究； 对棘孢木霉孢子萌发抑制效果较差的杀菌剂有:啶酰菌胺、氰烯菌酯、啶氧菌酯、噁霉灵、氰 霜唑、烯酰吗啉、氟吡菌胺、霜霉威盐酸盐、噻呋酰胺。
[0050] 综上述两个实验，考虑与木霉复配杀菌剂有:氰烯菌酯、啶氧菌酯、烯酰吗啉、氰霜 唑、氟吡菌胺、噁霉灵、霜霉威盐酸盐、噻呋酰胺。
[0051 ]实施例3表面活性剂的筛选
[0052]筛选出对棘孢木霉孢子粉活性影响较小的表面活性剂。首先将气粉后的表面活性 剂与棘孢木霉按一定比例混合均勾，于常温储存，7天、30天、60天、半年后测定各处理棘孢 木霉的活孢率，设置不加任何表面活性剂的棘孢木霉孢子粉为对照。
[0053] 表4表面活性剂筛选
[0055]结果表明，分散剂中，木质素磺酸盐、萘磺酸盐、聚羧酸盐、聚萘甲醛磺酸盐、阴-非 离子复合剂，润湿剂中，烷基苯磺酸盐、烷基硫酸钠、硫酸盐类，对木霉孢子粉活性影响最 小。
[0056]实施例4含棘孢木霉孢