接至开花培养基中，每瓶接种12株小苗；其中开花培养基为I/2MS培养基添加1.0mg/L萘乙酸、8%椰汁、8%土豆、30g/L蔗糖、7.0g/L琼月旨;培养条件:温度25°C，光强20001x、相对湿度70%、每天光照16h。诱导后48天左右植株即可开花，开花率65?87%，单花鲜重为0.11-0.28g/朵。
[0016]步骤5): a、采花:在超净工作台上采集铁皮石斛鲜花，操作时，把步骤4)中的开花苗取出，夹住花托，用剪刀将花柄剪下，剩余的植株部分重新接入新的开花培养基中进行继续培养;或直接将无菌开花苗进行炼苗、移栽，制作观赏性花卉或盆景。
[0017]b、继代培养:采花后植株在新的开花培养基中继续培养，其中开花培养基为1/2MS培养基添加I.0mg/L萘乙酸、8%椰汁、8%土豆、30g/L蔗糖、7.0g/L琼脂;培养条件:温度25 °C，光强20001x、相对湿度70%、每天光照1611。40天左右植株即可开花，开花率67?88%，单花鲜重为0.10-0.29g/朵，可如此继代3次，每瓶共可采集鲜花32?45朵，鲜重7.46?10.25g。
[0018]实施例2与实施例1的区别在于步骤4)和步骤5)的不同:
步骤4):诱导开花:将步骤3)中的成苗转接至开花培养基中，每瓶接种12株小苗;其中开花培养基为1/2MS培养基添加1.011^/1萘乙酸、8%椰汁、3(^/1蔗糖、7.(^/1琼脂;培养条件:温度25°C，光强20001x、相对湿度70%、每天光照16h。诱导后48天左右植株即可开花，开花率63?84%，单花鲜重为0.10-0.26g/朵。
[0019]步骤5):a、采花:在超净工作台上采集铁皮石斛鲜花，操作时，把步骤4)中的开花苗取出，夹住花托，用剪刀将花柄剪下，剩余的植株部分重新接入新的开花培养基中进行继续培养;或直接将无菌开花苗进行炼苗、移栽，制作观赏性花卉或盆景。
[0020]b、继代培养:采花后植株在新的开花培养基中继续培养，其中开花培养基为1/2MS培养基添加I.0mg/L萘乙酸、8%椰汁、30g//L蔗糖、7.0g/L琼脂；培养条件:温度25 °C，光强20001x、相对湿度70%、每天光照16K43天左右植株即可开花，开花率64%?85%，单花鲜重为
0.1 Og/朵?0.27g/朵，可如此继代3次，每瓶共可采集鲜花32?42朵，鲜重7.35?10.12g。
[0021]实施例3与实施例1的区别在于步骤4)和步骤5)的不同:
步骤4):诱导开花:将步骤3)中的成苗转接至开花培养基中，每瓶接种12株小苗;其中开花培养基为1/2MS培养基添加1.0mg/L萘乙酸、8%椰汁、8%香蕉、30g/L蔗糖、7.0g/L琼脂；培养条件:温度25°C，光强20001x、相对湿度70%、每天光照16h。诱导后51天左右植株即可开花，开花率65?87%，单花鲜重为0.10-0.28g/朵。
[0022]步骤5):a、采花:在超净工作台上采集铁皮石斛鲜花，操作时，把步骤4)中的开花苗取出，夹住花托，用剪刀将花柄剪下，剩余的植株部分重新接入新的开花培养基中进行继续培养;或直接将无菌开花苗进行炼苗、移栽，制作观赏性花卉或盆景。
[0023]b、继代培养:采花后植株在新的开花培养基中继续培养，其中开花培养基为1/2MS培养基添加I.0mg/L萘乙酸、8%椰汁、8%香蕉、30g/L蔗糖、7.0g/L琼脂;培养条件:温度25 °C，光强20001x、相对湿度70%、每天光照16K42天左右植株即可开花，开花率66?87%，单花鲜重为0.10-0.28g/朵，可如此继代3次，每瓶共可采集鲜花32?43朵，鲜重7.39?10.22g。
[0024]图1为铁皮石斛在组培瓶内的开花情况，由图可看出，铁皮石斛开花情况良好。
[0025]图2为步骤4)诱导的铁皮石斛植株开花情况，由图可看出，铁皮石斛在此期间诱导情况好，生活力强。
[0026]以上所述的仅是本发明的实施例，方案中公知的具体结构及特性等常识在此未作过多描述。应当指出，对于本领域的技术人员来说，在不脱离本发明结构的前提下，还可以作出若干变形和改进，这些也应该视为本发明的保护范围，这些都不会影响本发明实施的效果和专利的实用性。本申请要求的保护范围应当以其权利要求的内容为准，说明书中的【具体实施方式】等记载可以用于解释权利要求的内容。
【主权项】
1.人工诱导铁皮石斛在组培瓶内开花的方法，其特征在于，包括以下步骤: 步骤I):外植体的灭菌消毒:用无菌水将铁皮石斛蒴果表面的脏物冲洗干净，将铁皮石斛蒴果置于75%乙醇中浸15s，再放入0.1%的升萊溶液中浸15min后，用无菌水冲洗4?5次，每次冲洗5min，备用； 步骤2):无菌萌发及幼苗生长:用无菌滤纸擦干蒴果表面水后，切开蒴果，将种子取出接种于萌发培养基中，萌发培养基为1/2MS固体培养基添加0.2?1.0mg/L萘乙酸、6.5?8.5g/L琼脂、15?30g/L蔗糖;接种后摇动，使种子均匀散布于培养基中，封口，将接种后的组培瓶移入培养室，培养温度22?28 °C，光强1200?20001x、相对湿度65?80%、每天光照11?16h，5?8d后种子开始萌发，30?45d后长成2?3cm的幼苗； 步骤3):生根壮苗培养:将步骤2)中的幼苗转接至生根壮苗培养基中；壮苗培养基为I/2MS固体培养基添加3.5?4.5mg/L萘乙酸、O?10% 土豆、6.5?8.5g/L琼脂、15?30g/L鹿糖；在温度22?28°C，光强1200?20001x、相对湿度65?80%、光照14?16h/d，60?80d后长成成苗； 步骤4):诱导开花:将步骤3)中的成苗转接至开花培养基中，开花培养基为1/2MS固体培养基添加0.8?2.0mg/L萘乙酸、5?10%椰汁、O?10%土豆、O?10%香蕉、6.5?8.5g/L琼月旨、15?30g//L蔗糖；在温度25?30°C，光强1500?25001x、相对湿度65?80%、光照14?16h/d ；诱导35?50d后得到开花苗； 步骤5):采花、继代培养:把步骤4)中的开花苗取出，夹住花托，将花柄剪下，剩余的植株部分重新接入新的开花培养基中进行继续培养，诱导分蘖开花;同样在温度25?30°C，光强1500?25001x、相对湿度65?80%、光照14?16h/d。2.根据权利要求1所述的人工诱导铁皮石斛在组培瓶内开花的方法，其特征在于:所述步骤I)、步骤2 )、步骤3 )、步骤4)和步骤5 )均在超净工作台上进行。3.根据权利要求2所述的人工诱导铁皮石斛在组培瓶内开花的方法，其特征在于:所述铁皮石斛蒴果为成熟未开裂前采收的铁皮石斛蒴果。4.根据权利要求3所述的人工诱导铁皮石斛在组培瓶内开花的方法，其特征在于:将步骤5)中已开花的植株炼苗后移栽，制作成观赏性花卉或盆景。
【专利摘要】本发明公开了一种人工诱导铁皮石斛在组培瓶内开花的方法，具体步骤为，步骤1）：外植体的灭菌消毒；步骤2）：无菌萌发及幼苗生长：将种子取出接种于萌发培养基中，将接种后的组培瓶移入培养室；步骤3）：生根壮苗培养：将步骤2）中的幼苗转接至生根壮苗培养基中；步骤4）：诱导开花：将步骤3）中的壮苗转接至开花培养基中，诱导培养；步骤5）：采花、继代培养：把步骤4）中的开花苗取出，取下鲜花，剩余的植株部分重新接入新的开花培养基中进行继续培养。本发明在营养条件、温度、光照和水汽等可控环境下培养出无毒、无害的鲜花，且不使用对人体或环境有害的化学成分，对缓解铁皮石斛花的市场供需矛盾有积极意义。
【IPC分类】A01H4/00
【公开号】CN105638483
【申请号】
【发明人】徐德林, 吴贵英, 韦欣, 钱刚, 李林, 吴太玺, 郑明辉
【申请人】遵义医学院
【公开日】2016年6月8日
【申请日】2016年3月25日