一种合成地加瑞克的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及医药合成领域，具体涉及一种合成地加瑞克的方法。
【背景技术】
[0002] 地加瑞克是丹麦辉凌制药有限公司研发的促性腺激素释放激素(GnRH)受体抑制 剂类药物，可逆性抑制垂体GnRH受体来减少促性腺激素释放继而抑制睾酮的释放。本品通 过抑制对前列腺癌持续生长至关重要的睾酮来延缓前列腺癌的生长和恶化。以激素治疗前 列腺癌来降低睾酮浓度的初期却造成睾酮浓度激增，此初始刺激该激素受体可暂时性促进 肿瘤生长而不是抑制它，而地加瑞克则不会。美国FDA于2008年12月批准地加瑞克上市，主 要针对晚期前列腺癌患者，通过抑制睾丸激素来延缓前列腺癌的病程发展。
[0003] m期临床研究显示，地加瑞克降低睾酮浓度的效果至少可与亮丙瑞林储库型控释 注射剂(Lupron Depot)相媲美，而且降低睾酮浓度在统计学上显著快。在治疗的第3日，本 品组96%达到去生殖腺的睾酮浓度，亮丙瑞林组效果为0%。第14日，本品组99%达到去生 殖腺的睾酮浓度，亮丙瑞林组为18%。
[0004] 在临床研究中，前列腺特异抗原(PSA)浓度可作为监测的第2个疗效判断终点。使 用地加瑞克2周后降低PSA 64%，1月后85%，3月后95%，在治疗的整个1年中始终抑制PSA。
[0005] 地加瑞克结构式为：
[0006] Ac-D-Nal-D-Cpa-D-Pal-Ser-Aph(Hor)-D-Aph(Cbm)-Leu-Lys(iPr)-Pr〇-D-Ala- NH2
[0007] 国内外关于地加瑞克制备报道的报道很多，美国专利US5925730采用Boc固相合成 方法，该方法规模很小，仅报告了纯度，产品纯度为98%，同时该方法需要使用氢氟酸(HF) 裂解，对人和环境有较大的危害，不适合大规模工业合成。
[0008] 中国专利CN201310336446.7采用Fmoc合成方法，该方法报道的制备规模同样很 小，为了避免Aph(Hor)在碱性条件下重排产物乙内酰脲毒性降解产物的产生，在工艺过程 中采用了固相片段缩合法以及特有保护氨基酸Aph(Mmt/Dmt)和Aph(Cbm)，操作相对复杂， 所使用的保护氨基酸和片段价格昂贵，生产成本较高；中国专利CN201210460195.9采用 Fmoc固相合成方法，该方法报道的制备规模同样很小，为了避免Aph(Hor)在碱性条件下重 排产物乙内酰脲的产生，对Aph采用了可选择性脱保护的保护基Trt，但是其在脱保护过程 中采用TFA/DCM，会导致其采用的保护氨基酸Lys(iPr，Boc)中Boc部分脱落，从而让Lys (iPr)裸露的氨基与后续的L-4,5_，二氢乳清酸反应生成新杂质，同样其操作也相对复杂， 所使用的保护氨基酸价格昂贵，生产成本较高;此外上述2个专利还存在地加瑞克收率不高 的问题，在40%做左右，这些和其总体的合成工艺有关。
[0009] 中国专利CN201410427405.4采用Fmoc固相合成方法，该方法操作路线最简单，收 率也相对前述2个中国专利高一些，但其无法避免结构中的Aph(Hor)在碱性条件下重排产 物乙内酰脲降解产物的产生，同时所使用的Aph(Cbm)和Aph(Hor)的保护氨基酸同样非常昂 贵，工艺成本较高。
【发明内容】
[0010] 有鉴于此，本发明的目的在于提供一种新的合成地加瑞克的方法，使得本发明所 述方法在保证地加瑞克的纯度前提下提高其总收率，且同时避免重排产物乙内酰脲的产 生。
[0011] 为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
[0012] -种合成地加瑞克的方法，包括以下步骤：
[0013] 步骤1、保护的D-丙氨酸在缩合试剂和活化试剂作用下和氨基偶联有保护基的氨 基树脂进行酯化反应，得到肽树脂1;
[0014] 步骤2、按照地加瑞克氨基酸序列C端到N端的顺序，从肽树脂1出发，在缩合试剂和 活化试剂作用下，将保护的Pro、保护的Lys(ipr)、保护的Leu和Boc-D-Aph(Fmoc)进行逐一 延伸偶联，然后去除D-Aph(Fm 〇c)中的侧链Fmoc保护基生成D-Aph(NH2)，获得肽树脂2,所述 保护的Lys(ipr)为保护的Lys(ipr，Z);
[0015] 步骤3、将肽树脂2中D_Aph(NH2)中的侧链氨基在有机碱的催化下与叔丁基异氰酸 酯反应生成D-Aph( tBu-Cbm)，获得肽树脂3;
[0016] 步骤4、按照地加瑞克氨基酸序列C端到N端的顺序，从肽树脂3出发，在缩合试剂和 活化试剂作用下，依次延伸偶联保护的Aph(Boc)、保护的Ser(Bzl)、保护的D-Pal、保护的D-Cpa、保护的Ac-D-Nal，得到肽树脂4;
[0017] 步骤5、脱除肽树脂4中保护的Aph(Boc)中的侧链Boc保护基，在缩合试剂和活化试 剂作用下接入L-4，5-，二氢乳清酸，获得地加瑞克树脂；
[0018] 步骤6、地加瑞克树脂经酸解剂酸解后获得地加瑞克粗品，所述酸解剂为溴化氢的 三氟醋酸溶液；
[0019] 步骤7、地加瑞克粗品纯化后获得地加瑞克纯品。
[0020] 地加瑞克主链氨基酸有10个，组成如下：
[0021 ] Ac-D-Na 11-D-Cpa2-D-Pal 3-Ser4-Aph (Hor) 5-D~Aph (Cbm) 6-Leu7-Ly s (iPr) 8-Pro9- D_Ala10_NH2 〇
[0022] 其中，地加瑞克C端的氨基为采用酸解剂从氨基树脂上裂解下来的氨基，其并不属 于氨基酸上的氨基。
[0023] 本发明针对现有技术中采用的合成工艺易造成地加瑞克总收率较低，且易产生重 排产物乙内酰脲的缺陷，本发明整体将地加瑞克的合成从第5位和第6位氨基酸处分为两个 部分进行合成，并针对其中的部分保护氨基酸采用适宜的保护基，最后配合使用特定的酸 解剂完成整个合成过程，在保证纯度的前提下，提高地加瑞克的总收率，并完全避免排产物 乙内酰脲的产生。
[0024] 本发明所述保护基是在氨基酸合成领域常用的保护氨基酸主链以及侧链上氨基、 羧基等干扰合成的基团的保护基团，防止氨基、羧基等在制备目标产物过程中发生反应，生 成杂质，如本发明通过Bzl保护基保护丝氨酸的侧链;通过Z保护基保护N 6-(l-甲基乙基)赖 氨酸(Ly s (ipr))的侧链，通过Boc保护第五位Aph。此外，在本发明所述方法涉及的保护的氨 基酸中，N端均优选通过Fmoc保护基进行保护。被保护基保护的氨基酸称为保护的氨基酸。 作；为优选，骤1所述保护的D-丙氨酸为Fomc-D-Ala或Boc-D-Ala，步骤2所述保护的Pro、保 护的Lys (ipr)、保护的Leu为：
[0025] Fmoc-Pro、Fmoc_Lys(ipr，Z)、Fmoc_Leu;或Boc-Pro、Boc_Lys(ipr，Z)、Boc_Leu;
[0026] 步骤4所述保护的Aph(Boc)、保护的Ser (Bz 1)、保护的D-Pal、保护的D-Cpa、保护的 D-Nal 为：
[0027] Fmoc-Aph(Boc)、Fmoc-Ser(Bzl)、Fmoc-D_Pal、Fmoc-D-Cpa、Fmoc-D_Nal〇
[0028] 作为优选，所述氨基树脂为MBHA树脂。
[0029] MBHA树脂的结构式如下，左侧的圆球表示聚苯乙烯树脂：
[0031]作为优选，所述保护的D-丙氨酸和氨基偶联有保护基的氨基树脂的摩尔比为1-6: 1，更优选为2.5-3.5:1。
[0032]作为优选，所述氨基树脂的取代值为0.2-1.8mm〇l/g氨基树脂，更优选为0.5_ 1.0mmol/g氨基树脂。
[0033] 作为优选，所述缩合试剂优选为N，N-二异丙基碳二亚胺(DIC)、N，N-二环己基碳二 亚胺(DCC)，六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷/有机碱(PyBOP/有机碱）、2-(7_氮 杂-1H-苯并三氮唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸酯/有机碱(HATU/有机碱）、苯并三 氮唑-N，N，N'，N'-四甲基脲六氟磷酸盐/有机碱(HBTU/有机碱）、0-苯并三氮唑-N，N，N'，N'_ 四甲基脲四氟硼酸酯/有机碱(TBTU/有机碱）中的一种。所述缩合试剂的摩尔用量优选为多 肽树脂中氨基总摩尔数的1~6倍，更优选为2.5~3.5倍。
[0034] 需要说明的是，所述PyBOP/有机碱、HATU/有机碱、HBTU/有机碱、TBTU/有机碱，在 本发明中属于四种双体系的缩合试剂，即PyBOP、HATU、HBTU在使用时需要分别和有机碱组 合在一起成为一种缩合试剂使用，其中所述有机碱和?780?、撤1'1]、冊1'1]381'1]的摩尔比优选 为为1.3-3.0:1，更优选为1.3-2:1。
[0035]作为优选，所述缩合试剂中的有机碱优选为N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)、三乙胺 (TEA)或N-甲基吗啡啉(NMM)，更优选为DIPEA。
[0036]作为优选，所述活化试剂为1-羟基苯并三唑(HOBt)或N-羟基-7-氮杂苯并三氮唑 (HOAt)。所述活化试剂的用量优选为肽树脂中氨基总摩尔数的1~6倍，更优选为2.5~3.5 倍。
[0037] 作为优选，所述酯化反应和延伸偶联的反应溶剂均采用DMF。
[0038] 本发明所述延伸偶联是指在第一个氨基酸与氨基树脂偶联后，剩余氨基酸按照地 加瑞克氨基酸的C端到N端的顺序逐个和前一个偶联的氨基酸发生缩合反应(主链氨基和羧 基的缩合反应)进行偶联。本发明偶联时，每次延伸偶联时所述保护的氨基酸和对应肽树脂 的摩尔比优选为1-6:1，更优选为2.5-3.5:1;所述偶联反应时间优选为60~300分钟，更优 选为120~180分钟。需要说明的是，本发明所述肽树脂指任意个数氨基酸按照地加瑞克氨 基酸顺序和氨基树脂相连接形成的肽树脂，这其中也包括肽树脂1。所述对应的肽树脂是指 D-Ala和氨基树脂偶联形成的肽树脂l、Pro和肽树脂1偶联形成的肽树脂5、LyS(iPr)和肽树 月旨5偶联形成的肽树脂6、Leu和肽树脂6偶联形成的肽树脂7、B 〇C-D-Aph(Fm〇C)和肽树脂7偶 联形成的肽树脂2、Aph(Boc)和肽树脂2偶联形成的肽树脂8、Ser和肽树脂8偶联形成的肽树 月旨9、D-Pal和肽树脂9偶联形成的肽树脂10、D-