检测金黄色葡萄球菌的方法及试剂盒的利记博彩app
【技术领域】
[0001] 本发明涉及微生物检测领域，具体的，本发明涉及食品微生物检验领域，更具体 的，本发明涉及一种检测金黄色葡萄球菌的方法和一种检测金黄色葡萄球菌的试剂盒。
【背景技术】
[0002] 金黄色葡萄球菌是一种人畜共患病的重要致病菌，由于其形状为球型，在显微镜 下排列成葡萄串状而得名，该菌广泛存在于空气、水、尘埃及人和动物的排泄物中。因而，食 品及食品原料受其污染的机会很多。
[0003] 目前国内外对于金黄色葡萄球菌的检测方法主要可分为两大类，一类是传统的微 生物培养分离鉴定检测方法，另一类是一些基于分子生物学的方法，其目的是检测特定基 因存在与否，以检测样品中是否存在金黄色葡萄球菌。
[0004] 金黄色葡萄球菌检测方法有很多，如：微生物学方法、生物学方法、免疫学方法、 基因探针技术、耐热核酸酶法、生物传感技术、超抗原技术、聚合酶链反应技术，这些检测技 术中，除微生物学方法外，其它检测技术一方面其只在研究开发阶段，推广应用价值有待研 究；另一方面对于企业检测，成本及操作简便程度，对操作人员的技术能力要求均较高。
【发明内容】
[0005] 本发明旨在至少解决现有技术中的存在的技术问题之一或者提供一种商业选择。 为此，本发明的一个目的是提供一种检测食品中的金黄色葡萄球菌的方法。
[0006] 依据本发明的一方面，本发明提供一种检测金黄色葡萄球菌的方法，该方法包括 以下步骤：（1)称取定量的待测样品至定量的预制的培养基中，进行增菌培养，获得增菌 液；（2)取定量的（1)中的增菌液置于测试片中培养，所述测试片能够使金黄色葡萄球菌菌 落显示为紫红色菌落；（3)对（2)中的培养的结果进行判定，以检测所述金黄色色葡萄球 菌，其中包括，当（2)中的培养的结果显示为无菌落时，判定所述待测样品中无金黄色葡萄 球菌，当（2)中的培养的结果中显示有紫红色菌落时，判定所述待测样品中有金黄色葡萄 球菌，当（2)中的培养的结果显示有非紫红色的其它颜色的菌落时，在所述测试片中置入 确认片进行培养，以确定所述待测样品中是否含有金黄色葡萄球菌，所述确认片能够使含 有金黄色葡萄球菌的菌落显示为带粉红色晕的菌落。所称测试片是一种预先制备好的快速 检验系统，它含有显色功能的培养基，对金黄色葡萄球菌具有很强的选择性，并含有冷水可 溶性凝胶，测试片上的紫红色菌落为金黄色葡萄球菌。当测试片上出现除紫红色以外的其 它颜色，则必须使用确认反应片，即使用所称的确认片，确认片上含有显色剂和脱氧核苷酸 (DNA)，金黄色葡萄球菌产生的脱氧核糖核酸酶（DNase)会和确认片中的显色剂形成粉红 色晕圈。
[0007] 本发明的这一方面的金黄色葡萄球菌的检测方法，通过将被检测样品进行检测前 增菌，接着使用单个测试片法进行定性检测，建立了单测试片法快速检验金黄色葡萄球菌 的方法，该方法能够避免由于概率、人员操作等原因不能够检出目标菌，而且通过与国家标 准检测方法GB 478910-2010的检测结果比较，证明本发明的这一方面的方法检测的准确 性高，特异性、灵敏度及一致性都高，并且检出限低、工作周期短，降低了检测的工作量。
[0008] 根据本发明的实施例，本发明的这一方面的检测金黄色葡萄球菌的方法还可以具 有以下附加技术特征至少之一：
[0009] 本发明的这一方法适于各种食品中金黄色葡萄球菌的检测。根据本发明的一个实 施例，待测样品为乳或者乳制品。通过与国家标准检测方法GB 478910-2010的检测同一乳 或者乳制品的结果比较，证明该示例的方法用于检测乳及乳制品中的金黄色葡萄球菌，检 测的准确性高，特异性、灵敏度及一致性都高，并且检出限低、工作周期短，能够降低检验乳 及乳制品中的金黄色葡萄球菌的工作量。
[0010] 根据本发明的较佳实施例，步骤（1)中的称取定量的待测样品至定量的预制的培 养基中，其中的定量的待测样品与定量的预制的培养基的体积比或者重量体积比为1:9。如 此，利于金黄色葡萄球菌的得到有效的特异性的增殖。根据本发明的一个较佳实施例，步骤 (1)为：称取25g或者25ml的待测样品至盛有225mL 7. 5%氯化钠肉汤或10%氯化钠胰酪 胨大豆肉汤的无菌均质杯内，均质后于36°C ±1°C中培养18h-24h以获得所述增菌液。该 增菌培养步骤以及该增殖条件能有效的特异性的增加含有金黄色葡萄球菌的待测样品中 的金黄色葡萄球菌含量，能有效的降低检出限，而且能够避免由于概率、人员操作等原因造 成的不能检出。能使多数含有金黄色葡萄球菌的乳及乳制品中的该菌得到有效且适用测试 片显色检测的扩增。
[0011] 根据本发明的一个实施例，步骤（2)为：将ImL步骤（1)获得的增菌液加入到所述 测试片中，36°C ±1°C中培养22h-26h。该示例中，测试片选用市售的3M金黄色葡萄球菌测 试片。取经过步骤（1)的增殖培养的增菌液ImL于36°C ±1°C中培养22h-26h，能使该增菌 液中的金黄色葡萄球菌以紫红色的菌落显示出。
[0012] 根据本发明的实施例，步骤（3)中的当步骤（2)中的培养的结果显示为无菌落时， 判定所述待测样品中无金黄色葡萄球菌，包括：给出所述待测样品中的金黄色葡萄球菌的 含量为小于ICFU/定量的待测样品。根据本发明的一个实施例，所称取的定量的待测样品 为牛奶25mL，测试片无菌落显示，则认定该牛奶的金黄色葡萄球菌含量为小于lCFU/25mL。
[0013] 根据本发明的实施例，步骤（3)中的当步骤（2)中的培养的结果中显示有紫红色 菌落时，判定所述待测样品中有金黄色葡萄球菌之后，还包括：对所述紫红色菌落进行计 数，以定量所述待测样品中的金黄色葡萄球菌。定量表示为紫红色菌落数目/定量的待测 样品。计数可利用目视或者菌落计数器进行，或者利用放大镜辅助计数，以准确定性定量。
[0014] 根据本发明的实施例，步骤（3)中的当步骤（2)中的培养的结果显示有非紫红 色的其它颜色的菌落时，在所述测试片中置入确认片进行培养，以确定所述待测样品中是 否含有金黄色葡萄球菌，包括：在所述测试片中置入所述确认片后于36°C ±1°C中培养 lh-3h，根据获得的培养结果中是否显示有带粉红色晕的菌落以确定所述待测样品中是否 含有金黄色葡萄球菌，带粉红色晕的菌落为包含金黄色葡萄球菌的菌落。该示例中的测试 片和确认片都来自Petrifilm?。确认片上的培养温度和时间利于包含金黄色葡萄球菌的 菌落显示出带粉红色晕圈。
[0015] 根据本发明的一个实施例，步骤（3)中的当步骤（2)中的培养的结果显示有非紫 红色的其它颜色的菌落时，在所述测试片中置入确认片进行培养，以确定所述待测样品中 是否含有金黄色葡萄球菌，还包括：当确定所述待测样品中含有金黄色葡萄球菌时，对带粉 红色晕的菌落进行计数以定量所述待测样品中的金黄色葡萄球菌。将待测样品中的金黄色 葡萄球菌的含量表示为带粉红色晕的菌落数目/定量的待测样品。
[0016] 根据本发明的一个实施例，步骤（3)中的当步骤（2)中的培养的结果显示有非紫 红色的其它颜色的菌落时，在所述测试片中置入确认片进行培养，以确定所述待测样品中 是否含有金黄色葡萄球菌，包括：在所述测试片中置入所述确认片后于36°C ±1°C中培养 lh_3h，当获得的培养结果中整个培养面积呈粉红色而没有明显的晕圈时，确定所述待测样 品中含有多不可计的金黄色葡萄球菌。
[0017] 对比国标GB 478910-2010金黄色葡萄球菌检验方法，国标方法复杂、繁琐，特别 是鉴