脲。8000g高速离心收集诱导培养基中的各种菌体细胞，然 后按照1:1:2:2:4的细胞质量（湿重）比，将瘦果红酵母，枯草芽孢杆菌，红球菌，沟戈登氏 菌，酵母菌混合制成菌剂，如图2所示，在培养皿中放置IOg细菌菌剂，以清水为对照，将未 成熟的香蕉和培养皿一同放置在一个4. 4L的塑料盒子里，盖上盖子，分别在不同的时间点 (0天，7天，18天）观察和拍照，记录水果成熟情况。
[0029] 本例中以香蕉表面褐变程度作为评判标准，将结果记录于表2, 表示基本没有 变化；" + "表示褐变程度较轻；"++"表示褐变程度相对较重。
[0030] 表 2
[0032] 实施例3 :
[0033] 在基础培养基（包括 nutrient broth，Sabouraud dextrose broth，tryptic soy broth等）中培养瘦果红酵母（Rhodotorula acheniorum)，枯草芽抱杆菌（Bacillus subtilis)，红球菌（Xanthophyllomyces dendrorhous);红曲霉菌（Monascus purpureus)； 西洼湖戈登氏菌（Gordonia sihwensis)和酵母菌（Saccharomyces cerevisiae)等种属的 细菌 1-4天。使Bacillus subtilis，Sarcina ventriculi，Gordonia amarae和 Rhodotorula acheniorum 菌液的终浓度达到 108CFU/mL 以上，Xanthophyllomyces dendrorhous 和 Saccharomyces cerevisiae 菌液的终浓度达到 107CFU/mL 以上，Monascus purpureus 的浓 度达到〇D6。。= 2. 5。并转入诱导培养基-I培养5天，该诱导培养-I基包含0. 6mM ZnCl 2, 2mM NiCl2,85mM维生素 C，34. 8mM维生素 E，0. 068mM乙酰胆碱和0. 23mM η-乙酰氨基葡糖。再 转入诱导培养基-Π 培养5天，该诱导培养-II含有3mM FeCl2S FeCl 3, 9mM CaCl2, 74mM MgCl2，和200mM羟基脲。8000g高速离心收集诱导培养基中的各种菌体细胞，然后按照 1:1:2:2:4:4的细胞质量（湿重）比，将瘦果红酵母、枯草芽孢杆菌、红球菌、西洼湖戈登氏 菌、酵母菌和红曲霉菌混合制成菌剂。如图3所示，在培养皿中放置15g细菌菌剂，将牛油 果和培养皿放置进入一个4. 4L的塑料盒子内，盖上盖子，分别在不同的时间点（0天，4天， 10天）切开牛油果观察并拍照，记录水果成熟情况。
[0034] 本例中以对切开牛油果果肉褐变程度作为评判标准，将结果记录于表3, 表示 基本没有变化；" + "表示褐变程度较轻；"++"表示褐变程度相对较重。
[0035] 表 3
[0037] 实施例4 :
[0038] 在基础培养基（包括 nutrient broth，Sabouraud dextrose broth，tryptic soy broth等）中培养痩果红酵母（Rhodotorula acheniorum)，枯草芽抱杆菌（Bacillus subtilis)，红球菌（Xanthophyllomyces dendrorhous);红曲霉菌（Monascus purpureus); 西洼湖戈登氏菌（Gordonia sihwensis)和酵母菌（Saccharomyces cerevisiae)等种属的 细菌 1_4天。使8&(3；!_11118 subtilis，Sarcina ventriculi，Gordonia amarae和 Rhodotorula acheniorum 菌液的终浓度达到 108CFU/mL 以上，Xanthophyllomyces dendrorhous 和 Saccharomyces cerevisiae 菌液的终浓度达到 107CFU/mL 以上，Monascus purpureus 的浓度达到〇D6。。= 2. 5。并转入诱导培养基-I培养5天，该诱导培养-I基包含IOOmM ZnCl2, 0.1 mM NiCl2, 5mM维生素 C，2mM维生素 E，0. 7mM乙醜胆喊和0. 005mM η-乙醜氛基葡 糖。再转入诱导培养基-Π 培养5天，该诱导培养-II含有0.1 mM ?6(：12或FeCl3, IOOmM CaCl2, IOOmM MgCl2，和IM羟基脲。SOOOg高速离心收集诱导培养基中的各种菌体细胞，然 后按照1:0:5:0:10:10的细胞质量（湿重）比，将痩果红酵母、枯草芽孢杆菌、红球菌、西洼 湖戈登氏菌、酵母菌和红曲霉菌混合制成菌剂。
[0039] 实施例5 :
[0040] 在基础培养基（包括 nutrient broth，Sabouraud dextrose broth，tryptic soy broth等）中培养痩果红酵母（Rhodotorula acheniorum)，枯草芽抱杆菌（Bacillus subtilis)，红球菌（Xanthophyllomyces dendrorhous);红曲霉菌（Monascus purpureus); 西洼湖戈登氏菌（Gordonia sihwensis)和酵母菌（Saccharomyces cerevisiae)等种属的 细菌 1_4天。使8&(3；!_11118 subtilis，Sarcina ventriculi，Gordonia amarae和 Rhodotorula acheniorum 菌液的终浓度达到 108CFU/mL 以上，Xanthophyllomyces dendrorhous 和 Saccharomyces cerevisiae 菌液的终浓度达到 107CFU/mL 以上，Monascus purpureus 的浓度达到〇D6。。= 2. 5。并转入诱导培养基-I培养5天，该诱导培养-I基包含0.1 mM ZnCl2, IOOmM NiCl2, 280mM 维生素 C，34. 8mM 维生素 E307,0. 006mM 乙酰胆碱和 0. 45mM η-乙酰氨基葡糖。再转入诱导培养基-II培养5天，该诱导培养-II含有IOOmM ?^12或 FeCl3, 5mM CaCl2, ImM MgCl2，和50mM羟基脲8000g高速离心收集诱导培养基中的各种菌 体细胞，然后按照1:5:0:10:0:0的细胞质量（湿重）比，将痩果红酵母、枯草芽孢杆菌、红 球菌、西洼湖戈登氏菌、酵母菌和红曲霉菌混合制成菌剂。
【主权项】
1. 一种延缓蔬果成熟的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，包括如下制备步骤： 1) 基础培养：将枯草芽孢杆菌、红球菌属、红曲霉菌、戈登氏菌属、酵母菌和瘦果红酵 母接种至各自的基础培养基中，在30°摇床上培养1-4天； 2) 诱导培养：分别制备各细菌相应的诱导培养基-1，是在各细菌原有的基础培养基的 成分里加入以下几种物质：〇.I-IOOmMZn2+, 0.I-IOOmMNi2+，5-280mM维生素C，2-35mM维生 素E，0. 006-0. 7mM乙酰胆碱和0. 005-0. 45mMn-乙酰氨基葡萄糖；将步骤1)培养的各细菌 离心收集并分别转入相应的诱导培养基-I中，在30°摇床培养3-5天； 分别制备各细菌的诱导培养基-II，是在各细菌原有的基础培养基的成分里加入以下 几种物质：〇?I-IOOmMFe2+或Fe3+，I-IOOmMCa2+,I-IOOmMMg2+和 0? 05-1M羟基脲；将经上 述诱导培养基-I培养的各种细菌离心收集并分别转入相应的诱导培养基-II中，在30°摇 床培养5天以上； 3) 分别离心收集经步骤2)培养的各种菌体细胞，取枯草芽孢杆菌、红球菌属、红曲霉 菌、戈登氏菌属、酵母菌和瘦果红酵母中的一种或几种的混合，获得微生物菌剂。2. 如权利要求1所述的延缓蔬果成熟的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，所述的 将各细菌在基础培养基、诱导培养基-I或诱导培养基-II中培养时，均培养至使枯草芽孢 杆菌，戈登氏菌属和瘦果红酵母各自的菌液终浓度达到10sCFU/mL以上，红球菌属和酵母 菌各自的菌液终浓度都达到IO7CFUAiL以上，红曲霉菌的菌液浓度在分光光度计600纳米 处的吸光值达到2. 5以上。3. 如权利要求1所述的延缓蔬果成熟的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，所述的 步骤3)为取步骤2)诱导培养后的瘦果红酵母、枯草芽孢杆菌、红球菌属、红曲霉菌、戈登氏 菌属和酵母菌按质量比1: (0-5) : (0-5) : (0-10) : (0-10) : (0-10)混合的混合物作为微生物 菌剂。4. 如权利要求1所述的延缓蔬果成熟的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，所述的 维生素E为维生素E307。5. 如权利要求1所述的延缓蔬果成熟的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，所述的 离心采用8000g/min的转速。6. 如权利要求1所述的延缓蔬果成熟的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，所述的 培养摇床的转速为10_300rpm。7. 根据权利要求1-6任一项所述的制备方法获得的微生物菌剂。8. 如权利要求6所述的微生物菌剂用于延缓蔬菜和水果成熟的用途。
【专利摘要】本发明公开了一种用于延缓蔬果成熟的微生物菌剂及其制备方法，主要是利用枯草芽孢杆菌，红球菌属，红曲霉菌，戈登氏菌属，酵母菌及瘦果红酵母菌来制备延迟水果成熟的生物保鲜菌剂的方法，主要步骤为：1、基础培养基培养细菌；2、在诱导条件下继续培养细菌制成菌剂原料；3、收集微生物菌体，按特定比例混合配制菌剂；4、外源施用菌剂，延缓水果成熟。本方法制备的菌剂成本低廉，可以有效延长香蕉、苹果、牛油果、西红柿、桃、李等常见蔬果的保鲜时间，减少传统保鲜食用蜡和塑料薄膜的使用。另外，该方法使用纯生物制剂来延缓水果成熟，是一种绿色、环境友好的产品。
【IPC分类】C12N1/20, C12N1/16, C12R1/865, C12N1/14, C12N1/18, C12R1/01, C12R1/645, C12R1/125, A23B7/155
【公开号】CN105176864
【申请号】
【发明人】杜凤昆, 甘毅
【申请人】甘毅
【公开日】2015年12月23日
【申请日】2015年8月13日