min，弃上层残存的油酸及清液。收集沉淀在离心机底部的菌泥(湿菌体)，按照1:50的比例加入50°C去离子水制成菌悬液，搅拌5?8min，然后再次进行离心，如此洗涤3次，最终所获得热带假丝酵母湿菌体。
[0041]f、干燥:将步骤e所述的热带假丝酵母湿菌体进行40°C?50°C冷风干燥，即获得富含留醇的热带假丝酵母干菌体，其留醇含量为7.12%。所获得的热带假丝酵母所产生的甾醇以谷甾醇(56.7% )和菜油甾醇(38.2% )为主。
[0042]实施例二
[0043]富含甾醇的热带假丝酵母培养方法:以亚油酸为唯一碳源。
[0044]a、种子培养基的配制及灭菌:于IL水中，加入20g葡萄糖、20g蛋白胨、1g酵母粉。按照所述配比，将各种成分称重后加入三角瓶中，室温下搅拌均匀，制得种子培养基；用8层纱布密封后放入高压灭菌锅中，115°C灭菌15min。灭菌后把三角瓶冷却至室温。
[0045]b、种子液的制备:挑取热带假丝酵母的斜面保藏菌种2?3环，接种到步骤a中所述的种子培养基中，30 0C、180rpm摇床振荡培养48h。
[0046]C、发酵培养基的配制及灭菌:于IL水中，加入40g亚油酸、2.0g酵母粉、0.1g硫酸镁、0.2g磷酸氢二钾、0.2g磷酸二氢钾。按照所述配比，将各种成分称重后加入机械搅拌式发酵罐中，室温下搅拌均匀，并用0.5M氢氧化钠溶液调节pH值6.8，制得发酵培养基；然后向发酵罐通入蒸汽开始灭菌，待罐温上升到121°C，保温30min，灭菌结束后，引入冷却水将发酵培养基温度降至25°C?30°C。
[0047]d、发酵:将步骤b所述热带假丝酵母菌种子液以8%接种量接种到步骤c所述发酵罐中的培养基之中，控制发酵温度30°C，机械搅拌转速220rpm，通气量1.0vvm, pH值7.0,发酵96h。
[0048]e、离心、洗涤:将步骤d所述的发酵液放置于离心机中，5500rpm离心20min，弃上层残存的亚油酸及清液。收集沉淀在离心机底部的菌泥(湿菌体)，按照1:50的比例加入50°C去离子水制成菌悬液，搅拌5?8min，然后再次进行离心，如此洗涤3次，最终所获得热带假丝酵母湿菌体。
[0049]f、干燥:将步骤e所述的热带假丝酵母湿菌体进行40°C?50°C冷风干燥，即获得富含留醇的热带假丝酵母干菌体，其留醇含量为6.23%。所获得的热带假丝酵母所产生的甾醇以谷甾醇(50.1% )和菜油甾醇(40.3% )为主。
[0050]实施例三
[0051]富含留醇的热带假丝酵母培养方法:以大豆油为唯一碳源。
[0052]a、种子培养基的配制及灭菌:于IL水中，加入30g葡萄糖、1g蛋白胨、5g酵母粉。按照所述配比，将各种成分称重后加入三角瓶中，室温下搅拌均匀，制得种子培养基；用8层纱布密封后放入高压灭菌锅中，121°C灭菌20min。灭菌后把三角瓶冷却至室温。
[0053]b、种子液的制备:挑取热带假丝酵母的斜面保藏菌种2?3环，接种到步骤a中所述的种子培养基中，30°C、200rpm摇床振荡培养48h。
[0054]C、发酵培养基的配制及灭菌:于IL水中，加入50g大豆油、2.0g酵母粉、0.1g硫酸镁、0.1g磷酸氢二钾、0.1g磷酸二氢钾。按照所述配比，将各种成分称重后加入机械搅拌式发酵罐中，室温下搅拌均匀，并用0.5M氢氧化钠溶液调节pH值7.0，制得发酵培养基；然后向发酵罐通入蒸汽开始灭菌，待罐温上升到121°C，保温30min，灭菌结束后，引入冷却水将发酵培养基温度降至25°C?30°C。
[0055]d、发酵:将步骤b所述热带假丝酵母菌种子液以10%接种量接种到步骤c所述发酵罐中的培养基之中，控制发酵温度30°C，机械搅拌转速240rpm，通气量1.2vvm, pH值7.0,发酵108h。
[0056]e、离心、洗涤:将步骤d所述的发酵液放置于离心机中，5500rpm离心20min，弃上层残存的大豆油及清液。收集沉淀在离心机底部的菌泥(湿菌体)，按照1:80的比例加入60°C去离子水制成菌悬液，搅拌5?8min，然后再次进行离心，如此洗涤3次，最终所获得热带假丝酵母湿菌体。
[0057]f、干燥:将步骤e所述的热带假丝酵母湿菌体进行40°C?50°C冷风干燥，即获得富含留醇的热带假丝酵母干菌体，其留醇含量为6.95%。所获得的热带假丝酵母所产生的甾醇以谷甾醇(53.4% )和菜油甾醇(37.9% )为主。
【主权项】
1.一种富含留醇的热带假丝酵母的培养方法，其特征是，包括以下步骤: a、种子培养基的配制及灭菌:按配比在IL水中，加入20?30g葡萄糖、10?20g蛋白胨、5?1g酵母粉，按照所述配比，将各种成分称重后加入三角瓶中，室温下搅拌均匀，制得种子培养基；用8层纱布密封后放入高压灭菌锅中，于115°C?121°C灭菌15?20min，灭菌后把三角瓶冷却至室温； b、种子液的制备:挑取热带假丝酵母的斜面保藏菌种2?3环，接种到步骤a中所述的种子培养基中，于30°C、180?200rpm摇床振荡培养48h，备用； c、发酵培养基的配制及灭菌:于IL水中，加入40?50g游离脂肪酸或油脂(所述油脂为大豆油、花生油、菜籽油、棉籽油等)、1.0?2.0g酵母粉、0.1?0.2g硫酸镁、0.1?0.2g磷酸氢二钾、0.1?0.2g磷酸二氢钾；按照所述配比，将各种成分称重后加入机械搅拌式发酵罐中，室温下搅拌均匀，并用0.5M氢氧化钠溶液调节pH值6.8?7.0，制得发酵培养基；然后向发酵罐通入蒸汽开始灭菌，待罐温上升到115°C?121°C，保温30min，灭菌结束后，引入冷却水将发酵培养基温度降至25°C?30°C ; d、发酵:将步骤b所述热带假丝酵母菌种子液以8%?10%接种量接种到步骤c所述发酵罐中的培养基之中，控制发酵温度28°C?30 °C，机械搅拌转速220rpm?240rpm，通气量 1.0 ?1.2vvm, pH 值 6.8 ?7.0,发酵 96 ?108h。 e、离心、洗涤:将步骤d所述的发酵液放置于离心机中，5000?5500rpm离心15?.20min，弃上层残存的游离脂肪酸或油脂及清液，收集沉淀在离心机底部的菌泥(湿菌体)，按照1:50?1:80的比例加入50°C?60°C去离子水制成菌悬液，搅拌5?8min，然后再次进行离心，如此洗涤3次，得到热带假丝酵母湿菌体； f、干燥:将步骤e所述的热带假丝酵母湿菌体进行40°C?50°C冷风干燥，即获得富含甾醇的热带假丝酵母干菌体。2.如权利要求1所述的一种富含留醇的热带假丝酵母的培养方法，其特征是:所述步骤f中，其总甾醇含量为6.23%?7.12%。3.如权利要求2所述的一种富含留醇的热带假丝酵母的培养方法，其特征是:其中谷甾醇占总甾醇的53.4% ;菜油甾醇占总甾醇的37.9%。4.如权利要求1所述的一种富含留醇的热带假丝酵母的培养方法，其特征是:所述步骤a中种子培养基的物质组成为:20g/L葡萄糖、20g/L蛋白胨和10g/L酵母粉。5.如权利要求1所述的一种富含留醇的热带假丝酵母的培养方法，其特征是: 所述步骤c中发酵培养基的组成为:于IL水中，加入50g大豆油、2.0g酵母粉、0.1g硫酸镁、0.1g磷酸氢二钾、0.1g磷酸二氢钾。6.如权利要求1所述的一种富含留醇的热带假丝酵母的培养方法，其特征是: 所述步骤c中油脂为大豆油、花生油、菜籽油、棉籽油中的一种。7.如权利要求1所述的一种富含留醇的热带假丝酵母的培养方法，其特征是:包括以下具体步骤: a、种子培养基的配制及灭菌:于IL水中，加入30g葡萄糖、1g蛋白胨、5g酵母粉，按照所述配比，将各种成分称重后加入三角瓶中，室温下搅拌均匀，制得种子培养基；用8层纱布密封后放入高压灭菌锅中，121°C灭菌20min，灭菌后把三角瓶冷却至室温； b、种子液的制备:挑取热带假丝酵母的斜面保藏菌种2?3环，接种到步骤a中所述的种子培养基中，30°C、200rpm摇床振荡培养48h ； c、发酵培养基的配制及灭菌:于IL水中，加入50g大豆油、2.0g酵母粉、0.1g硫酸镁、.0.1g磷酸氢二钾、0.1g磷酸二氢钾，按照所述配比，将各种成分称重后加入机械搅拌式发酵罐中，室温下搅拌均匀，并用0.5M氢氧化钠溶液调节pH值7.0，制得发酵培养基；然后向发酵罐通入蒸汽开始灭菌，待罐温上升到121°C，保温30min，灭菌结束后，引入冷却水将发酵培养基温度降至25°C?30°C ; d、发酵:将步骤b所述热带假丝酵母菌种子液以10%接种量接种到步骤c所述发酵罐中的培养基之中，控制发酵温度30°C，机械搅拌转速240rpm，通气量1.2vvm, pH值7.0,发酵 108h ； e、离心、洗涤:将步骤d所述的发酵液放置于离心机中，5500rpm离心20min，弃上层残存的大豆油及清液。收集沉淀在离心机底部的菌泥(湿菌体)，按照1:80的比例加入60°C去离子水制成菌悬液，搅拌5?8min，然后再次进行离心，如此洗涤3次，得到热带假丝酵母湿菌体； f、干燥:将步骤e所述的热带假丝酵母湿菌体进行40°C?50°C冷风干燥，即获得富含甾醇的热带假丝酵母干菌体。8.如权利要求7所述的一种富含留醇的热带假丝酵母的培养方法，其特征是:所述步骤f中，其总留醇含量为6.95%，在所产生的总留醇中，谷留醇占53.4%，菜油留醇占.37.
【专利摘要】本发明涉及一种富含甾醇的热带假丝酵母培养方法，具体方法为，首先配制以游离脂肪酸或脂肪为唯一碳源的培养基。将配制好的培养基进行高温灭菌，冷却后，接种热带假丝酵母进行通气好氧发酵。发酵结束后，离心收集菌体，即获得富含甾醇的热带假丝酵母细胞。所获得的酵母细胞中甾醇含量可达到6.23％～7.12％，远高于普通方法，所产生的甾醇以谷甾醇和菜油甾醇为主，同麦角甾醇相比，谷甾醇和菜油甾醇用途更加广泛。
【IPC分类】C12N1/16, C12R1/74
【公开号】CN105176851
【申请号】
【发明人】赵国群, 刘金龙
【申请人】河北科技大学
【公开日】2015年12月23日
【申请日】2015年8月19日