DA平板上的菌落边缘切取菌丝块，置于2%水琼 脂（WA)上，共接种6个平板，28°C避光培养至满板。其中3个WA平板直接置于光照条件下 28°C培养4d，计算载孢体的形成数量。2% WA配方：琼脂20g，蒸馏水1L。
[0046] 对照方法5 :取方法5中的另外3个WA平板，在平板上倒一层无菌水，用无菌毛笔 蘸无菌水浸润变软后扫刷菌苔，随即将水倒掉，平板倒扣自然晾干，再将平板置于光照条件 下28°C培养4d，计算载孢体的形成数量。
[0047] 对照方法6 :取1个PDA平板，从PDA平板上的菌落边缘切取菌丝块，置于2%麦芽 提取物（MEA)上，共接种6个平板，28°C避光培养至满板。其中3个MEA平板直接置于光照 条件下28°C培养4d，计算载孢体的形成数量。2% MEA培养基配方：麦芽提取物20g，琼脂 15g，蒸馏水1L。
[0048] 对照方法7 :取方法7中的另外3个MEA平板，在平板上倒一层无菌水，用无菌毛 笔蘸无菌水浸润变软后扫刷菌苔，随即将水倒掉，平板倒扣自然晾干，再将平板置于光照条 件下28°C培养4d，计算载孢体的形成数量。
[0049] 对照方法8 :取1个PDA平板，从PDA平板上的菌落边缘切取菌丝块，置于苜蓿煎汁 +Czapek培养基上，共接种6个平板，28°C避光培养至满板。其中3个平板直接置于光照条 件下28°C培养4d，计算载孢体的形成数量。苜蓿煎汁+Czapek培养基的配方：将紫花苜蓿 杆剪成Icm左右的小段，放入Czapck培养基中，补水至1L，PH值调至6. 0,灭菌。Czapck培 养基配方：硝酸钠2g，磷酸氢二钾lg，氯化钾0. 5g，硫酸镁0. 5g，硫酸亚铁0.0 lg，蔗糖30g， 琼脂20g，定容至1L。
[0050] 对照方法9 :取方法9中的另外3个苜蓿煎汁+Czapek培养基平板，在平板上倒一 层无菌水，用无菌毛笔蘸无菌水浸润变软后扫刷菌苔，随即将水倒掉，平板倒扣自然晾干， 再将平板置于光照条件下28°C培养4d，计算载孢体的形成数量。
[0051] 试验结果表：
CN 105176847 A I兄明书 5/6 页
[0054] -:不形成载孢体； + :1~20个载孢体/皿；
[0055] ++:21~50个载孢体/皿； +++:51~80个载孢体/皿；
[0056] ++++:81~120个载孢体/皿；+++++: 120个载孢体以上/皿。
[0057] 由此可见，本方法相对其它9种诱导产孢方法（对照方法），操作步骤简单，能在最 短的时间内稳定产生大量载孢体。
[0058] 二、本方法的应用
[0059] 本方法的应用包括分别利用拟莖点霉菌P. lithocarpus、P. Iiquidambari或 P. euphorbiae三种菌株进行诱导产孢的情况。
[0060] 实施例1
[0061] ①将分离得到的拟莖点霉菌P. Iithocarpus菌株转接到PDA培养基平板上，进行 活化，置于28°C恒温培养箱中避光培养3-4d，待菌落生长至培养皿边缘时，用于诱导产孢 研究。PDA固体培养基配方：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g，定容至IL ;
[0062] ②在超净工作台中于PDA平板上倒入ImL无菌水，用无菌毛笔蘸无菌水浸润变软 后扫刷菌苔，表面冲洗3次后，将无菌水倒出，平板倒扣自然晾干；
[0063] ③将晾干后的PDA平板重新盖上盖子后，置于28°C的恒温培养箱中光照培养4d ;
[0064] ④光照4d后，在平板表面看见白色至灰色的载孢体，载孢体的形成数量达到123 个/皿。
[0065] 实施例2
[0066] ①将分离得到的拟莖点霉菌P. Iiquidambari菌株转接到PDA培养基平板上，进行 活化，置于28°C恒温培养箱中避光培养3-4d，待菌落生长至培养皿边缘时，用于诱导产孢 研究。PDA固体培养基配方：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g，定容至IL ;
[0067] ②在超净工作台中于PDA平板上倒入ImL无菌水，用无菌毛笔蘸无菌水浸润变软 后扫刷菌苔，表面冲洗3次后，将无菌水倒出，平板倒扣自然晾干；
[0068] ③将晾干后的PDA平板重新盖上盖子后，置于28°C的恒温培养箱中光照培养4d ;
[0069] ④光照4d后，在平板表面看见白色至灰色的载孢体，载孢体的形成数量达到145 个/皿。
[0070] 实施例3
[0071 ] ①将分离得到的拟莖点霉菌菌株P. euphorbiae转接到PDA培养基平板上，进行活 化，置于28°C恒温培养箱中避光培养3-4d，待菌落生长至培养皿边缘时，用于诱导产孢研 究。PDA固体培养基配方：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g，定容至IL ;
[0072] ②在超净工作台中于PDA平板上倒入ImL无菌水，用无菌毛笔蘸无菌水浸润变软 后扫刷菌苔，表面冲洗3次后，将无菌水倒出，平板倒扣自然晾干；
[0073] ③将晾干后的PDA平板重新盖上盖子后，置于28°C的恒温培养箱中光照培养4d ;
[0074] ④光照4d后，在平板表面看见白色至灰色的载孢体，载孢体的形成数量达到131 个/皿。
【主权项】
1. 一种拟茎点霉菌的快速诱导产孢方法，其特征在于： 以PDA固体培养基培养的拟茎点霉菌菌丝体为产孢的基础，通过扫刷菌苔、无菌水冲 洗、干燥及恒温光照培养措施，诱导菌丝体在4天内迅速萌发大量载孢体； 具体包括下列步骤： ① 将分离得到的拟茎点霉菌菌株转接到PDA(马铃薯琼脂）培养基平板上，进行活化， 置于28°C恒温培养箱中避光培养3~4d，待菌落生长至培养皿边缘时，用于诱导产孢研究， PDA固体培养基配方：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g，定容至IL; ② 在超净工作台中于PDA平板上倒入ImL无菌水，用无菌毛笔蘸无菌水浸润变软后扫 刷菌苔，表面冲洗3次后，将无菌水倒出，平板倒扣自然晾干； ③ 将晾干后的PDA平板重新盖上盖子后，置于28°C的恒温培养箱中光照培养4d; ④ 光照4d后，在平板表面看见白色至灰色的载孢体，计算载孢体的形成数量。2. 按权利要求1所述的一种拟茎点霉菌的快速诱导产孢方法，其特征在于： 所述的拟茎点霉菌菌株包括拟茎点霉菌属9个不同种的菌株Z5Mocar/ws、 P. Iiquidambari、P. bombacis、P. euphorbiae、P. mangiferae、P. destructum、P. psidii、P. asparagus、P. sterculicola。3. 按权利要求I和2所述拟茎点霉菌的快速诱导产孢方法的应用，其特征在于： 分别利用拟莖点霉菌属9个不同种的菌株/^ P. bombacis、P. euphorbiae、P. mangi ferae、P. destructum、P. psidii、P. asparagus、尸.于干燥保存、活化状态下菌丝体的快速产孢。
【专利摘要】本发明公开了一种拟茎点霉菌的快速诱导产孢方法及其应用，属于植物病原菌诱导产孢领域。本方法是以PDA固体培养基培养的拟茎点霉菌菌丝体为产孢的基础，通过扫刷菌苔、无菌水冲洗、干燥及恒温光照培养措施，诱导菌丝体在4天内迅速萌发大量载孢体。本方法的应用是分别利用拟茎点霉菌属9个不同种的菌株于干燥保存、活化状态下菌丝体的快速产孢。本发明用于拟茎点霉菌的快速简易诱导产孢，将大大提高其产孢效率，缩短鉴定周期，有效节约了人力物力及科研工作者的大量宝贵时间，具有很大的应用潜力和较高的经济价值。
【IPC分类】C12N1/14
【公开号】CN105176847
【申请号】
【发明人】钟彩虹, 李黎, 黄宏文, 龚俊杰, 陈美艳, 潘慧
【申请人】中国科学院武汉植物园
【公开日】2015年12月23日
【申请日】2015年11月3日