一种双出小克银汉霉wu-18菌株及用图
【专利说明】一种双出小克银汉霉WU-18菌株及用途 发明领域
[0001] 本发明涉及一种微生物及用途，更具体地说涉及一种双出小克银汉霉（XX)WU-18 菌株、用途及其制剂的制备方法，属于生物降解技术领域。
【背景技术】
[0002] 农作物秸杆中含有C、N、P、K以及各种微量元素，还田后可增加土壤有机质，对维 持土壤养分平衡，改善土壤团粒结构和理化性状，增加作物产量，节约化肥使用，保护农业 生态环境，提高农业综合生产能力、促进农业生态系统良性循环，实现农业可持续发展起着 突出重要的作用。秸杆及土壤本身富含大量的微生物，在自然条件下秸杆靠其自身及周围 的土著微生物的作用下可以完全腐熟，但秸杆自然腐熟的速度很慢，在农业生产中靠自然 腐熟会影响后茬作物种植时的土壤整地、播种质量，进而减少作物产量和品质等。
[0003] 在秸杆还田中，纤维素分解是最关键的环节。因此，从自然界中筛选高效纤维素 降解菌是秸杆还田快腐技术的核心。报道的野生纤维素降解菌大致有以下几种：细菌类 的主要有纤维放线菌（Acidothermus cellulolyticus)、诺卡氏菌属（Ncardia spp.)和 链霉菌属（Streptomyces spp.);真菌类的主要有木霉属（Trichoderma spp·)、曲霉属 (Aspergillus spp.)、青霉属（Penicillium spp.)、枝顶抱霉属（Acremonium spp·)、漆斑 霉属（Myrothecium spp·)、脉抱霉属（Neurospora spp·)、毛壳霉属（Chaetomium spp.)的 菌株。
[0004] 我国的腐熟剂多为多种细菌或细菌与真菌的混合菌群。在应用中发现，这些腐熟 剂的不同菌种间在秸杆腐熟初期与土著菌群竞争，大量的外来混合菌群的加入，使得在腐 熟初期耗氧细菌快速繁殖，强烈抑制了其它有益真菌的生长，对加快秸杆腐熟没有明显的 促进作用。因此，在秸杆腐熟初期须用占绝对优势的菌群把秸杆纤维素降解成可利用的糖 类物质，进而供土著微生物菌群快速繁殖，从而达到快速降解秸杆的作用。
[0005] 本发明提供的高效降解秸杆纤维的单一菌种腐熟剂，在现有技术中没有提及和公 开。
【发明内容】
[0006] 本发明解决现有技术存在的不足，提供一株新分离的真菌：双出小克银汉霉（XX) WU-18菌株，该菌株加工而成的腐熟剂可用于秸杆的快速腐熟。同时本发明还提供用该双出 小克银汉霉WU-18菌株，加工成腐熟菌剂的制备工艺。
[0007] 本发明是通过以下技术方案实现的：
[0008] 本发明的双出小克银汉霉（拉丁文学名为Cunninghamella binariae)WU_18菌 株，已于2014年10月29日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（地址：北 京市朝阳区北辰西路1号院3号中科院微生物研究所）保藏，保藏号为：CGMCC No. 9855。 本发明的菌种具有如下特征：
[0009] (1)本发明的双出小克银汉霉WU-18菌株的菌落形态及显微形态为：
[0010] 麦芽汁琼脂培养基上菌落生长迅速，25°c黑暗条件下4d菌落直径65-75mm，白色， 后期浅灰黑色，絮状，气生菌丝茂盛；菌落背面灰白色，无水溶性色素。孢囊梗高大，分枝多 数二叉状，壁光滑或粗糙，未见分隔，宽5. 0-9. 0 μ m，长可达377 μ m。孢囊梗或其分枝顶端 膨大呈囊状，小型孢子囊簇生，具小柄，椭圆形、水滴状或球形，7. 8-19. 3 X 8. 6-13. 4 μ m，壁 粗糙内生单个子囊孢子。未见接合孢子。
[0011] (2)本发明的双出小克银汉霉WU-18菌株的18S rRNA基因序列为：
[0012] TTTCCGTAGGGGAACCTGCGGAAGGATCATTACTTATTTGAAGTTTTTTGAAAAACTTTTTGTTTTTCA TTTAACTTTTTAAAATCATCCCCAGTGTGGGAAATGTCTTTATACGCTTGTGCCTGGTTCAGTCATTGTGCTGCCAC AGGAGTTTACTTTAGATCATAAGGGTTTTTAGATAGCTTTCCGTTGAGGAAACCTTTTGTAAAAGGGGATAAGATTT TTTTTTATTATACTTTTTTTTATTACTGAACTGATAGACCATAAATTTATGGTTGTTTTTTTTTTTATAAATTTAAA AACAACTTTCAGCAATGGATCTCTCGGCTTTCGTATCGATGAAGAACGCAGCAAATCGCGATATGTAATGTGATCTG CCTATAGTGAATCATCAAATCTTTGAACGCATCTTGCACCTTATGGTATTCCATAAGGTACGTCTGTTTCAGTACCA CTAATAAATCTCCTCTCCACCTTGGTGGTTTAAAAGAACGAGATAAATGATTACTGGTTCTGGTGATTTTATTTTTT TTTTTTTTTAAAATAAAACCACTCTCAACCTAAATATTAGGCTCGACTTCCTTTTTTTCCTCGGAAAAAAATCCAGT CAGGCTTTAATAGAATTTCATTTTTCTACTAAGGTTTATTGCCATTTACTTTTTTTAACAAAACTTGGCC。
[0013] 用本发明的双出小克银汉霉WU-18菌株制备的腐熟菌剂，其制备方法包括以下步 骤：
[0014] ㈧液态接种体的获得
[0015] 在PDA固体培养基长好的WU-18菌落边缘打取直径为4mm的菌片，接种于装有 IOOmL 培养液（PDA不加琼脂）的容积为500mL的三角瓶中，每瓶接种10个菌片，每瓶中 加入约20粒直径为2mm的无菌玻璃珠。置于30°C、200rpm振荡培养72h，无菌过滤去除玻 璃珠，获得液态接种体。所述PDA固体培养基组成为IL水中加入IOg马铃薯淀粉、IOg葡萄 糖、15g琼脂粉。
[0016] (B)固体发酵
[0017] 按固体发酵培养基20g接种ImL液态接种体的比例混合，将混合好的固体培养基 置于长50cm、宽40cm、高20cm无菌铁盘、铁盘内培养基堆料高为10cm，上覆盖双层无菌的无 纺布，于25°C培养箱中培养48h后翻搅1次，共发酵7d。所述固体发酵培养基混合比例为 5g麦麸、Ig谷糠、IOmL水。
[0018] (C)商用腐熟剂的获得
[0019] 将上述（B)固体发酵产物在30°C烘箱中烘干至水分含量为5-8%，无菌袋分装即 得商用腐熟剂，利用该技术所得的腐熟剂活菌体的菌落数约为I. 0-6. 4X 107CFU/g。
[0020] 本发明的有益效果是：
[0021] 本发明提供一株新的秸杆腐熟真菌一一双出小克银汉霉（XX)WU_18菌株，由该菌 株制得的固体腐熟剂，可用于小麦秸杆全量还田。田间试验结果表明，该腐熟剂可加速小麦 猜杆的腐熟。该菌剂规模化生产简易、成本低。
【具体实施方式】
[0022] 实施例
[0023] 本发明的双出小克银汉霉（拉丁文学名为Cunninghamella binariae)WU_18菌 株，已于2014年10月29日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏 号为：CGMCC No. 9855。本发明菌株的细胞形态及分子生物学特征见"
【发明内容】
"。本实施例 的双出小克银汉霉WU-18菌株的18S rRNA基因序列见"
【发明内容】
"。
[0024] 用本发明的WU-18菌株制备的生物腐熟剂，其制备方法包括以下步骤：
[0025] (A)液态接种体的获得
[0026] 在PDA固体培养基长好的WU-18菌落边缘打取直径为4mm的菌片，接种于装有 IOOmL 培养液（PDA不加琼脂）的容积为500mL的三角瓶中，每瓶接种10个菌片，