连接管，9、切割后小干细胞球收集瓶，10、注射器。
【具体实施方式】
[0018]下面通过具体实施例，并结合附图，对本发明的技术方案作进一步的具体说明。应当理解，本发明的实施并不局限于下面的实施例，对本发明所做的任何形式上的变通和/或改变都将落入本发明保护范围。
[0019]实施例1:
如图1和图2所示的一种干细胞球切割收集装置，该装置由干细胞球切割器6、空气缓冲瓶2、三通管4、培养瓶5、干细胞球收集瓶3、切割后小干细胞球收集瓶9和具有正压和负压双向抽气功能的抽气栗I组成。
[0020]干细胞球切割器和干细胞球收集瓶之间由管路连接，该干细胞球切割器具有一管体，管体内固定两个间隔设置的筛网7。筛网为不锈钢筛网，两个筛网的孔径分别为350 μπι和104 μ m，350 μ m的筛网靠近干细胞球收集瓶，两个筛网之间的距离为20mm。干细胞球切割器6的出口端设有一个缩口的连接管8。
[0021]抽气栗与空气缓冲瓶通过管路连接，空气缓冲瓶与干细胞球收集瓶通过管路连接，培养瓶和干细胞球收集瓶3通过管路分别与三通管的两个接口相连，三通管的第三个接口与干细胞球切割器连接。
[0022]本发明装置的使用过程如下:
1、干细胞球收集过程:如图1所示，关闭三通管向干细胞球切割器连接的开关，移液管插入含干细胞球的培养瓶5中，打开抽气栗，利用负压使培养瓶中的干细胞球伴随液体全部抽入干细胞球收集瓶3中，可以收集含神经干细胞球的多瓶培养液。
[0023]2、干细胞球切割收集过程:如图3所示，对干细胞球收集瓶内的干细胞球进行切割和收集过程，打开三通管向干细胞球切割器连接的开关，同时也关闭了培养瓶5进入干细胞球切割器的通路，打开正压抽气栗开关，利用正压，使干细胞球收集瓶3中含神经干细胞球向干细胞球切割器方向流通，利用抽气栗正压使干细胞球伴随液体快速通过钝性的不锈钢筛网，开始先通过孔径350 μπι的筛网，再通过孔径104 μm的筛网，达到大神经干细胞球变成小神经干细胞球的目的。该装置适合大规模培养神经干细胞之用。
[0024]实施例2:
如图4所示的干细胞球切割收集装置，该装置包括注射器10和与注射器相连的干细胞球切割器6，该干细胞球切割器具有一管体，管体内固定两个间隔设置的筛网7。注射器10体积为100-200ml，干细胞球切割器6的出口端设有一个缩口的连接管8。所述的筛网为不锈钢筛网，两个筛网的孔径分别为350 μπι和104 μm，孔径较小的筛网靠近切割后小干细胞球收集瓶9。两个筛网之间的距离为20mm。该装置适合实验室或小规模培养神经干细胞之用。
[0025]先将注射器吸入待切割的10ml含干细胞球的培养液，利用人工手的推力，使10ml含干细胞球的培养液快速通过干细胞球切割器与连接管，进入切割后小干细胞球收集瓶9。
[0026]实施例3
一种神经干细胞球的切割分离传代方法，该方法包括如下步骤:a.采用实施例1所述的干细胞球切割收集装置对干细胞球进行切割分离:利用抽气栗的负压将含有干细胞的培养液吸入干细胞球收集瓶中，再利用抽气栗的正压使干细胞球伴随液体快速通过干细胞球切割器，使钝性切割成小干细胞团块，然后进入培养瓶内，培养瓶内预置细胞培养液，图5为切割前的神经干细胞球，图6为神经干细胞球切割成小块，图7为显微镜放大400倍的单个神经干细胞和小团块。
[0027]b.将a步骤获得的含有小干细胞团块的细胞培养液进行分瓶培养；
c、分瓶培养时，每3-7天更换一次新鲜细胞培养液，每20-30天重复a步骤对干细胞球进行切割分离。
[0028]本实施例中的干细胞球为神经干细胞，神经干细胞球的直径达到500-2000 μ m大小时需要进行干细胞球切割。神经干细胞球切割收集装置将每一个神经干细胞球切割成3-8小块，进行1: 2、1:4或1:6分瓶传代培养。这种钝性切割后神经干细胞球培养30天后，神经干细胞又呈现球状，见图8。通过这种钝性切割神经干细胞球达到长期培养的目的。
[0029]通过本发明的传代分离方法，获得的小神经球大小均匀。对干细胞、神经干细胞和神经前体细胞的几乎没有损伤，体外传代时间长，并且无贴壁分化的神经细胞。
[0030]以上所述的实施例只是本发明的一种较佳的方案，并非对本发明作任何形式上的限制，在不超出权利要求所记载的技术方案的前提下还有其它的变体及改型。
【主权项】
1.一种干细胞球切割收集装置，其特征在于:该装置包括干细胞球切割器(6)、干细胞球收集瓶(3)和具有正压和负压双向抽气功能的抽气栗(1)，干细胞球切割器和干细胞球收集瓶之间由管路连接，该干细胞球切割器具有一管体，管体内固定两个间隔设置的筛网(7)。2.根据权利要求1所述的干细胞球切割收集装置，其特征在于:所述的筛网为不锈钢筛网，两个筛网的孔径分别为350±40 μπι和104±20 μπι，孔径较大的筛网靠近干细胞球收集瓶。3.根据权利要求1所述的干细胞球切割收集装置，其特征在于:两个筛网之间的距离为 20mm。4.根据权利要求1所述的干细胞球切割收集装置，其特征在于:该装置还包括空气缓冲瓶(2)、三通管(4)、培养瓶(5)和切割后小干细胞球收集瓶(9)，抽气栗与空气缓冲瓶通过管路连接，空气缓冲瓶与干细胞球收集瓶通过管路连接，培养瓶和干细胞球收集瓶(3 )通过管路分别与三通管的两个接口相连，三通管的第三个接口与干细胞球切割器连接。5.根据权利要求1所述的干细胞球切割收集装置，其特征在于:干细胞球切割器(6)的出口端设有一个缩口的连接管(8 )。6.一种干细胞球切割收集装置，其特征在于:该装置包括注射器(10)和与注射器相连的干细胞球切割器(6)，该干细胞球切割器具有一管体，管体内固定两个间隔设置的筛网(7)。7.根据权利要求6所述的干细胞球切割收集装置，其特征在于:所述的筛网为不锈钢筛网，两个筛网的孔径分别为350±40 μπι和104±20 μπι，孔径较大的筛网靠近干细胞球收集瓶。8.—种干细胞球的切割分离传代方法，其特征在于该方法包括如下步骤: a.采用权利要求1或6所述的干细胞球切割收集装置对干细胞球进行切割分离:将含有干细胞的培养液吸入干细胞球收集瓶后，利用流体压力使干细胞球经细胞球切割器钝性切割成小干细胞团块，然后进入培养瓶内，培养瓶内预置细胞培养液； b.将a步骤获得的含有小干细胞团块的细胞培养液进行分瓶培养； c.分瓶培养时，每3-7天更换一次新鲜细胞培养液，每20-30天重复a步骤对干细胞球进行切割分离。9.根据权利要求7所述的干细胞球的切割分离传代方法，其特征在于:所述干细胞球为神经干细胞，神经干细胞球的直径达到500-2000 μπι大小时用干细胞球切割收集装置将每一个神经干细胞球切割成3-8小块，进行1: 2、1:4或1:6分瓶传代培养。
【专利摘要】本发明为解决神经干细胞传代过程导致的神经干细胞易发生细胞凋亡、突变、细胞损伤、神经干细胞分化以及操作时间长和神经球大小不均一等问题，提供一种干细胞球切割收集装置。一种干细胞球切割收集装置，该装置包括干细胞球切割器、干细胞球收集瓶和具有正压和负压双向抽气功能的抽气泵，干细胞球切割器和干细胞球收集瓶之间由管路连接，该干细胞球切割器具有一管体，管体内固定两个间隔设置的筛网。本发明解决了体外培养神经干细胞易分化和易死亡的技术难题，达到长期培养扩增人神经干细胞的目的，而且人神经干细胞的特性稳定，质量可控。
【IPC分类】C12M3/00, C12N5/0797
【公开号】CN105176812
【申请号】
【发明人】陈世明, 章瑾
【申请人】浙江奥瑞健生物技术有限公司
【公开日】2015年12月23日
【申请日】2015年7月28日