一种康定鼠尾草中制备丹参酮iia化学对照品的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种丹参酮IIA(Tanshinone IIA)化学对照品的制备方法，尤其涉及一种康
[0002]定鼠尾草中制备丹参酮IIA化学对照品的方法。
【背景技术】
[0003]康定鼠尾草(Salvia prattii)系属鼠尾草属(Salvia L.)、唇形科(Labiatae)植物。现代研究表明鼠尾草植物中的化学成分主要包括酚酸类及萜类。丹参酮IIA是康定鼠尾草中含量较高的丹参酮类化合物，由于丹参酮类化合物极性相近、加之化合物结构差异及其细微，从康定鼠尾草药材中获取高纯度丹参酮IIA对照品较为困难。为了加快康定鼠尾草的生产销售和相关新药的研发步伐，发展高纯度丹参酮IIA的高效制备方法，尤其规模化制备技术显得尤为重要。
[0004]目前，从康定鼠尾草属植物制备丹参酮类化合物的文献未见报道，中国专利(CN102146114B)报道采用提取、萃取、硅胶柱层析、结晶等4?6步生产出纯度95%以上的丹参酮IIA，过程较繁琐且结晶过程损失量较大，而从康定鼠尾草中规模化快速获取丹参酮IIA的制备研究未见文献报道。
【发明内容】
[0005]为了解决上述技术问题，本发明的目的是提供一种工艺简单、易规模化的一种康定鼠尾草中制备丹参酮IIA化学对照品的方法。
[0006]为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下:
[0007]一种康定鼠尾草中制备丹参酮IIA化学对照品的方法，其特征在于，包括以下步骤:
[0008]⑴硅胶柱富集:
[0009]将按常规方法制得的棕红色浸膏状的康定鼠尾草中的醇提物经硅胶柱色谱分离:用5?10倍柱体积的氯仿溶剂洗脱，收集氯仿洗脱液经减压干燥即得红色粉末状的富含丹参酮IIA的粗样；
[0010]⑵微孔树脂除杂:
[0011]将富含丹参酮IIA的粗样用90%?100%甲醇溶解，过滤得到滤液A，该滤液A上微孔树脂柱分离，以3?5倍柱体积的体积分数为90?100%的甲醇溶液进行洗脱，收集该洗脱物并经减压干燥得丹参酮IIA类组分；富含丹参酮IIA的粗样与所述微孔树脂比例为Ig:20mL
[0012]⑶反相液相制备色谱精制:
[0013]所述丹参酮IIA类组分用其质量5?10倍的体积分数为65%?80%的甲醇溶液溶解，经0.45 μ m微孔滤膜过滤，得到滤液B，该滤液B经反相液相制备色谱分离，经检测波长为254nm的紫外检测器检测，收集制备色谱图中主要的色谱峰馏分，该色谱峰馏分经减压干燥即得纯度大于98%的红色粉末状的丹参酮IIA对照品。
[0014]进一步，所述步骤⑴和所述步骤⑵及所述步骤⑶中的减压干燥的条件均是指真空度为0.06?0.09MPa，温度为50?70°C。
[0015]进一步，所述步骤⑴中硅胶柱是指装有100?200目的柱层析硅胶。
[0016]进一步，所述步骤⑵中微孔树脂柱是指装有MCI或HP20SS填料的层析柱。
[0017]进一步，所述步骤⑶中反相液相制备色谱分离的工作参数是指色谱柱柱长250_、直径50mm，反相液相制备柱固定相为10 μ m Megress C18，流动相为体积分数75%?85%的甲醇-水溶液，进样体积为10?15mL，流速为80mL/min。
[0018]本发明与现有技术相比具有以下优点:
[0019]1、本发明工艺简单、回收率高。
[0020]第一步采用硅胶柱富集，可将样品中丹参酮IIA得到高效富集；第二步采用微孔树脂除杂，可获取纯度约50%的丹参酮IIA类组分，同时，微孔树脂具有良好的脱色效果；第三步采用反相液相制备色谱制备，可获取高纯度对照品，且收率较高(>85% )。
[0021]2、本发明采用的技术手段非常适宜规模化生产。
[0022]原料要求不高，一般野生或种植的康定鼠尾草醇提物即可，易于批量备料；第一步采用硅胶柱富集，填料便宜易得；第二步微孔树脂柱除杂，该树脂柱可以再生循环使用，平均价格低廉，易于规模化；第三步精制中采用反相液相制备色谱制备，为快速的等度方法，也非常适宜规模生产。
【附图说明】
[0023]下面结合附图对本发明的【具体实施方式】作进一步详细的说明。
[0024]图1为本发明实施例1丹参酮IIA类组分的HPLC分析图谱(254nm)。
[0025]图2为本发明实施例1丹参酮IIA类组分的液相制备图谱(254nm)。
[0026]图3为本发明实施例1丹参酮IIA的反相液相色谱纯度分析(254nm)。
【具体实施方式】
[0027]实施例1
[0028]一种康定鼠尾草中制备丹参酮IIA化学对照品的方法，包括以下步骤:
[0029]⑴硅胶柱富集:
[0030]将按常规方法制得的棕红色浸膏状的康定鼠尾草中的醇提物1.0Kg经硅胶柱色谱分离:用5倍柱体积的氯仿溶剂洗脱，收集氯仿洗脱液经减压干燥即得红色粉末状的富含丹参酮IIA的粗样26.4g ；
[0031]其中:
[0032]减压干燥的条件是指真空度为0.06MPa，温度为70°C ;
[0033]硅胶柱是指装有100?200目的柱层析硅胶。
[0034]⑵微孔树脂除杂:
[0035]将富含丹参酮IIA的粗样用100%甲醇溶解，过滤得到滤液A，该滤液A上微孔树脂柱分离，以5倍柱体积的体积分数为100%的甲醇溶液进行洗脱，收集该洗脱物并经减压干燥得丹参酮IIA类组分18.8g ；
[0036]其中:
[0037]减压干燥的条件是指真空度为0.06MPa，温度为70°C ;
[0038]富含丹参酮IIA的粗样与所述微孔树脂比例为Ig:20mL ；
[0039]微孔树脂柱是指装有MCI填料的层析柱。
[0040]⑶反相液相制备色谱精制:
[0041]所述丹参酮IIA类组分用其质量10倍的体积分数为65%的甲醇溶液溶解，经0.45 μ m微孔滤膜过滤，得到滤液B，该滤液B经反相液相制备色谱分离，经检测波长为254nm的紫外检测器检测，收集制备色谱图中主要的色谱峰馏分，该色谱峰馏分经减压干燥即得纯度大于98%的红色粉末状的丹参酮IIA对照品9.lg。
[0042]其中:
[0043]减压干燥的条件是指真空度为0.06MPa，温度为70°C ;
[0044]反相液相制备色谱分离的工作参数是指色谱柱柱长250mm、直径50mm，反相液相制备柱固定相为10 μ m Megress C18，流动相为体积分数75%的甲醇-水溶液，进样体积为15mL，流速为 80mL/mino
[0045]实施例2
[0046]一种康定鼠尾草中制备丹参酮IIA化学对照品的方法，包括以下步骤:
[0047]⑴硅胶柱富集:
[0048]将按