一种从地黄中提取的新倍半萜化合物及其制备方法与应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及医药领域，特别是一种从地黄中提取的新倍半萜化合物及其制备方法 与应用。
【背景技术】
[0002] 地黄为玄参科植物地黄Rehmannia glutinosa的新鲜或干燥块根，始载于《神农 本草经》，列为上品，主产于河南、河北、山东、山西等地。作为河南四大怀药之一，近几年 对地黄的化学成分及药理活性研究非常广泛，其主要有环烯醚萜及其苷类、紫罗兰酮及其 苷类、苯乙醇苷类等化合物，但是尚未发现有从地黄中提取新倍半萜化合物的相关报道，更 缺乏利用新倍半萜化合物在制备心肌保护类药物中进行应用。
【发明内容】
[0003] 针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种从地黄中提 取的新倍半萜化合物及其制备方法与应用，可有效解决对心肌细胞进行保护及治疗的用药 问题
[0004] 本发明解决的技术方案是，一种从地黄中提取的新倍半萜化合物，也称地黄新萜 I，分子式为C 22H38O9 [M+Na]+m/z 469. 2407,其结构式如图1所示；
[0005] 所述的从地黄中提取的新倍半萜化合物的制备方法，包括以下步骤：取生地黄 15-25kg，用8-12倍体积的体积浓度为95%的乙醇加热回流提取2-3次，每次l-3h，于 42-47°C减压浓缩，真空干燥后得到浸膏，将浸膏用水离散溶解，离心过滤，滤液上大孔吸 附树脂Diaion HP-20柱，用水冲柱2个柱体积，再用甲醇冲柱至洗脱液流出呈无色，将洗脱 液减压浓缩，真空干燥得干粉，干粉用体积浓度为10 %的甲醇离散溶解，溶解液上大孔吸附 树脂Diaion HP-20,用体积浓度为10%的甲醇冲柱，冲至10个柱体，所得洗脱液减压回收 溶剂，真空干燥得干粉，将干粉用50-70ml的甲醇溶解，用柱层析硅胶干法拌样，拌样硅胶 与空白硅胶以质量比1 :7装柱，以CH2CljP MeOH的混合液为流动相梯度洗脱，经薄层色谱 检识合并含有目标成分的流份，得到组分A，组分A依次通过凝胶Sephadex LH-20柱，凝胶 Toyopearl HW-40柱、MCI gel CHP-20柱反复分离纯化，得到组分B，组分B采用半制备液 相，经过IOmmX 250mm的YMC-Pack ODS-A色谱柱，以体积比MeOH = H2O = 33:67的洗脱液洗 脱，得到淡黄色固体，即为新倍半萜化合物，也称地黄新萜I。
[0006] 本发明制备方法简单，原料丰富易得，经济实用，效果好，充分利用了地黄的药理 作用，经济和社会效益巨大。
【附图说明】
[0007] 图1为本发明新倍半萜化合物分子结构式图。
[0008] 图2为地黄新萜I对DOX诱导的大鼠心肌细胞H9C2存活率的影响；
[0009]图 3 为地黄新萜 I H NMR (500MHz，CD3OD)谱；
[0010]图 4 为地黄新萜 I 13C NMR (125MHz，CD3OD)谱；
[0011] 图5为地黄新萜IHSQC谱；
[0012] 图6为地黄新萜I HMBC谱；
[0013] 图7为地黄新萜I 1H-1H COSY谱；
[0014] 图8为地黄新萜I NOESY谱；
[0015] 图9为地黄新萜I红外光谱；
[0016] 图10为地黄新萜I CD谱；
[0017] 图11为地黄新萜I HRES頂S谱。
【具体实施方式】
[0018] 以下结合附图和实施例对本发明的【具体实施方式】做详细说明。
[0019] 本发明在具体实施中，可由以下实施例给出。
[0020] 实施例1
[0021] 本发明所述的从地黄中提取的新倍半萜化合物的制备方法，包括以下步骤：取生 地黄20kg，用10倍体积的体积浓度为95 %的乙醇加热回流提取2次，每次2h，于45°C 减压浓缩，真空干燥后得到浸膏，将浸膏用水离散溶解，离心过滤，滤液上大孔吸附树 脂Diaion HP-20柱，用水冲柱2个柱体积，再用甲醇冲柱至洗脱液流出呈无色，将洗脱液 减压浓缩，真空干燥得干粉，干粉用体积浓度为10%的甲醇离散溶解，溶解液上大孔吸附 树脂Diaion HP-20,用体积浓度为10%的甲醇冲柱，冲至10个柱体，所得洗脱液减压回收 溶剂，真空干燥得干粉，将干粉用60ml的甲醇溶解，用柱层析硅胶干法拌样，拌样硅胶与空 白硅胶以质量比1 :7装柱，以CH2CljP MeOH的混合液为流动相梯度洗脱，经薄层色谱检 识合并含有目标成分的流份，得到组分A，组分A依次通过凝胶Sephadex LH-20柱，凝胶 Toyopearl HW-40柱、MCI gel CHP-20柱反复分离纯化，得到组分B，组分B采用半制备液 相，经过IOmmX 250mm的YMC-Pack ODS-A色谱柱，以体积比MeOH = H2O = 33:67的洗脱液洗 脱，得到淡黄色固体，即为新倍半萜化合物。
[0022] 实施例2
[0023] 本发明所述的从地黄中提取的新倍半萜化合物的制备方法，包括以下步骤：取生 地黄15kg，用8倍体积的体积浓度为95%的乙醇加热回流提取3次，每次lh，于42°C减 压浓缩，真空干燥后得到浸膏，将浸膏用水离散溶解，离心过滤，滤液上大孔吸附树脂 Diaion HP-20柱，用水冲柱2个柱体积，再用甲醇冲柱至洗脱液流出呈无色，将洗脱液减压 浓缩，真空干燥得干粉，干粉用体积浓度为10%的甲醇离散溶解，溶解液上大孔吸附树脂 Diaion HP-20,用体积浓度为10%的甲醇冲柱，冲至10个柱体，所得洗脱液减压回收溶剂， 真空干燥得干粉，将干粉用50ml的甲醇溶解，用柱层析硅胶干法拌样，拌样硅胶与空白硅 胶以质量比1 :7装柱，以CH2CljP MeOH的混合液为流动相梯度洗脱，经薄层色谱检识合并 含有目标成分的流份，得到组分A，组分A依次通过凝胶Sephadex LH-20柱，凝胶Toyopearl HW-40柱、MCI gel CHP-20柱反复分离纯化，得到组分B，组分B采用半制备液相，经过 10_ X 250mm的YMC-Pack ODS-A色谱柱，以体积比MeOH = H2O = 33:67的洗脱液洗脱，得到 淡黄色固体，即为新倍半萜化合物。
[0024] 实施例3
[0025] 本发明所述的从地黄中提取的新倍半萜化合物的制备方法，包括以下步骤：取生 地黄25kg，用12倍体积的体积浓度为95 %的乙醇加热回流提取2次，每次3h，于47°C 减压浓缩，真空干燥后得到浸膏，将浸膏用水离散溶解，离心过滤，滤液上大孔吸附树 脂Diaion HP-20柱，用水冲柱2个柱体积，再用甲醇冲柱至洗脱液流出呈无色，将洗脱液 减压浓缩，真空干燥得干粉，干粉用体积浓度为10%的甲醇离散溶解，溶解液上大孔吸附 树脂Diaion HP-20,用体积浓度为10%的甲醇冲柱，冲至10个柱体，所得洗脱液减压回收 溶剂，真空干燥得干粉，将干粉用70ml的甲醇溶解，用柱层析硅胶干法拌样，拌样硅胶与空 白硅胶以质量比1 :7装柱，以CH2CljP MeOH的混合液为流动相梯度洗脱，经薄层色谱检 识合并含有目标成分的流份，得到组分A，组分A依次通过凝胶Sephadex LH-20柱，凝胶 Toyopearl HW-40柱、MCI gel CHP-20柱反复分离纯化，得到组分B，组分B采用半制备液 相，经过IOmmX 250mm的YMC-Pack ODS-A色谱柱，以体积比MeOH = H2O = 33:67的洗脱液洗 脱，得到淡黄色固体，即为新倍半萜化合物。
[0026] 本发明新倍半萜化合物具有保护心肌细胞功能，并经试验得到了充分证明，有关 试验资料如下：
[0027] 本发明所用仪器与试药
[0028] 核磁共振用Bruker AVANCE III 500核磁共振仪（TMS内标）（Bruker)，旋光用 AP-IV (Rudolph Research Analytical，USA)，红外光谱用 Nicolet is lOMicroscope Spectrometer(Thermo Scientific, USA),高分辨质谱用 Bruker maxis HD mass spectrometer，紫外光谱用 Shimadzu UV-2401PC apparatus，高效液相色谱用 Waters Alliance系列2695高效液相系统，配备2998型二极管阵列检测器，Empowerf色谱数据工 作站，LC50型高压制备液相色谱仪，UV200型紫外检测器[赛谱锐思（北京）科技有限公 司]，YMC-Pack ODS-A 色谱柱（250 X 10mm. D. S-5mm, 12mm) (YMC 有限公司），其余有 N-1100 型旋转蒸发仪（上海爱朗仪器有限公司），A-1000S型水流抽气机（上海爱朗仪器有限公 司），N-1111型冷冻水循环装置（上海爱朗仪器有限公司），FDU-2110型冷冻干燥机（上海 爱朗仪器有限公司），DFZ-60508型真空干燥箱（上海一恒科学仪器有限公司）。
[0029] 柱层析填料DiaionHP-20、MCIGelCHP-20(日本三菱化学公司），Toyopearl 服-40(日本T0S0H公司），SephadexLH_20(ParmaciaBiotech公司），柱层析所用硅胶 H(160-200目）为青岛海洋化工厂生产；所用色谱纯试剂位天津四友精细化学品有限公司 生产；所用分析纯试剂为北京化工厂和天津第三化学试剂厂生产。
[0030] 生地黄为2010年11月购自河南省温县，经河南中医学院董诚明教授鉴定为玄参 科多年生草本植物地黄RehmanniaglutinosaLibosch.的干燥块根，标本保存在河南中 医学院中药化学研究室。
[0031] 本发明采用95%乙醇药渣回流水提法，对95%乙醇提取物进行系统的化学成分 研究，从中分离并鉴定了一个新倍半萜化合物，即：地