一种1,3-双苯并咪唑苯银(i)配合物及其在药学中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种1，3_双苯并咪唑苯银（I)配合物及其在药学中的应用。
【背景技术】
[0002] 由于铂类药物严重的副作用，使得其在临床上的运用受到了一定的限制，为寻找 副作用小，抗癌效果显著的金属配合物成为目前需要解决的难题。银（I)很早就被医学界 所应用，表现出很好的杀菌消毒作用。由于高效和低毒性，银（I)配合物的抗癌应用已成为 人们关注的新兴研究领域。含配体膦类，羧酸类，香豆素类和邻菲罗啉衍生物的银配合物对 多重耐药的人卵巢癌细胞（SKV03)、人肺癌细胞（A549)抑制效果明显，而且它们的1(： 5。值 大多都比顺铂低。通过合成含双苯并咪唑的Ag(I)配合物，希望可以寻找出低毒、抗癌活性 高、抗癌谱广的金属配合物，用以代替铂类药物的抗癌治疗。
【发明内容】
[0003] 本发明要解决的技术问题是提供一种1，3-双苯并咪唑苯银（I)配合物及其应用， 获得1，3-双苯并咪唑苯银（I)配合物的体外抗人肝癌细胞Hep_G2的结果。
[0004] 本发明解决上述技术问题所采取的技术方案是：
[0005] -种1，3-双苯并咪唑苯银（I)配合物，其晶体结构为，
[0006]
[0007] 所述的1，3-双苯并咪唑苯银（I)配合物在制药中的应用。
[0008] 所述的制药中的应用，包括制备抑制人肿瘤细胞H印-G2生长的药物中的应用。
[0009] 所述的抑制人肿瘤细胞H印-G2生长的药物，其抑制有效浓度为20~500 y mol/L。
[0010] 本发明所述的1，3-双苯并咪唑苯银（I)配合物具有抑制人肝癌细胞H印-G2生长 的作用，能够通过增加Bax的表达和抑制Bcl-2的表达共同作用而诱导Ifep-G2细胞凋亡， 阻滞人肝癌细胞H印-G2在G2期，并以非经典插入方式作用于与DNA发生作用。
【附图说明】
[0011] 图1为本发明所述的1，3-双苯并咪唑苯银（I)配合物对H印-G2细胞的抑制作用， 顺铂作为参照（n = 4)。
[0012] 图2为本发明所述的1，3-双苯并咪唑苯银（I)配合物作用于H印-G2细胞48h后 的流式凋亡图。
[0013] 图3为本发明所述的1，3-双苯并咪唑苯银（I)配合物作用于H印-G2细胞48h后 的流式凋亡率。
[0014] 图4为本发明所述的1，3-双苯并咪唑苯银（I)配合物作用于H印-G2细胞的周期 分布。
[0015] 图5为本发明所述的1，3-双苯并咪唑苯银（I)配合物作用于H印-G2细胞的周期 分布率。
[0016] 图6为本发明所述的1，3-双苯并咪唑苯银（I)配合物作用于H印-G2细胞48h后 Bax、Bcl_2的蛋白表达。
[0017] 图7为本发明所述的1，3-双苯并咪唑苯银（I)配合物与DNA相互作用的的紫 外-可见谱图。
[0018] 图8为本发明所述的1，3-双苯并咪唑苯银（I)配合物的红外光谱图。
【具体实施方式】
[0019] 下面结合附图具体实施例对本发明的技术方案做进一步说明。
[0020] 1. 1，3_双苯并咪唑苯银⑴配合物[C2QH12Ag2N4]的制备
[0021] 1，3-双苯并咪唑苯0? 0312g(0.1 mmol)和 AgNO30.0 250g(0. 15mmol)加入氨水 15mL 搅拌30s后，放入容积为23mL的高压反应釜中，140°C下反应80h，反应结束时，以3°C /h的 速率梯度降至室温，过滤，去离子水洗涤，得到白色条状晶体。
[0022] 2.红外光谱检测
[0023] 配合物用KBr压片在4000-400cm1范围测定红外图谱，如图8所示。
[0024] 3.晶体结构测定
[0025] 将尺度合适的、表面无裂痕且光滑的晶体在Agilent G8910A C⑶衍射仪上测定。 在温度293(2)1(下，衍射光源是通过石墨单色器单色化的此-1(€[射线（1=0,71073人), ： 采用扫描模式进行扫描，衍射数据用Lp因子及其经验吸收进行校正。晶体结构由 SHELXL - 97程序解析。
[0026] 表1 1，3-双苯并咪唑苯银（I)配合物的晶体参数和结构精修（T = 293 (2))
[0027]
[0028] 4. 1，3_双苯并咪唑苯银⑴配合物[C2QH12Ag2N4]的晶体结构及分析
[0029]
[0030] 1，3-双苯并咪唑苯银⑴配合物属正交晶系，其空间群为Pbcn，分子式为 C2QH 12Ag2N4。Ag2与两个苯并咪唑上的两个N原子线型协调配位。如上述的晶体结构所示， Ag2与两个N原子连接的键长Ag2-N2、Ag2-N2A分别为2. 102 (6)和2.102(6)A，它们的键长 相等并且在一条直线上，其键角N2-Ag2-N2A为180°。表2列出了它的键长和键角。
[0031] 表2 1，3-双苯并咪唑苯银⑴配合物的键长(A)席键角（° )
[0032]
[0033] 5.采用MTT法检测细胞存活率
[0034] 药物分组：设置五个浓度梯度，它们的终浓度依次为500 ymol/L、100ymol/L、 20ym〇l/L、4ym〇l/L、0.8ym 〇l/L ;阳性对照组：顺铂，设五个浓度梯度，终浓度依次为 500 y mol/L、100 y mol/L、20 y mol/L、4 y mol/L、0. 8 y mol/L ;空白对照组：不加药物，只含 细胞的1640完全培养基；无细胞对照组：只含1640完全培养基（不加药物和细胞）。
[0035] 操作方法：选对数生长期的细胞，先用PBS磷酸盐缓冲液冲洗两遍，再用适量含 EDTA的0. 25%胰蛋白酶消化1~I. 5min，使贴壁细胞变为单个细胞悬浮液，细胞计数板进 行计数。调整细胞的浓度为5 X IO4个/mL接种到96孔板中，每孔加入的体积为100 y L。放 入含5% 0)2的37°C恒温培养箱中培养24h后，每个孔内加入100 y L不同浓度梯度的测试 药物。每个测试样品的浓度梯度设4个复孔平行试验，每个测试药物重复3次实验。加完 药后放入培养箱中培养48h，取出加入MTT测试液（PBS配制为5mg/mL)，每孔20 y L，继续孵 育4h后，将其上清小心去掉并向每个孔内加入DMS0150 y L，振荡96孔板让结晶充分溶解， 在酶联免疫检测仪上选取570nm波长测定每孔的OD值。通过对细胞抑制率的计算，作图求 出半数细胞抑制浓度（IC 5。）。细胞抑制率计算结果如表3所示，其柱状示意图如图1所示。
[0036] 表3 1，3-双苯并咪唑苯银⑴配合物对Hep-G2细胞的抑制作用（n= 4)
[0037]
[0038] 6.流式检测细胞凋亡
[0039] 选对数生长期的细胞，计数细胞密度为2 X IO5个/mL接种到6孔板中，每孔加入 2mL。放入含5%0)2的37°(：恒温培养箱中培养24h后，更换等体积含药的完全培养基。给 药48h后，用不含EDTA的0. 25%胰蛋白酶收集六孔板的细胞，800r/min离心5min，弃掉培 养液，预冷的PBS洗两遍，500 y L的Binding Buffer加入到PBS洗好的细胞中重浮细胞， 加5 y L Annenxin V-FITC与细胞混匀反应5min后再加入5 y LPI，混匀在室温下避光反应 15min。转移至流式管中，在流式细胞仪上检测。
[0040] 7?流式检测细胞周期
[0041] 选对数生长期的细胞，计数细胞密度为5 X IO5个/mL接种到6孔板中，每孔加入 2mL。放入含5%0)2的37°(：恒温培养箱中培养24h后，更换等体积含药的完全培养基。给 药4811后，用含￡0了4的0.25%胰蛋白酶收集六孔板的细胞，80(^/1^11离心51^11，弃上清液， 室温的PBS洗两遍，缓慢地加入预冷的70%乙醇在-20°C固定24h后，离心沉淀细胞弃乙醇 固定液，加入室温PBS，使细胞静置水合15min，离心去上清。加入RNaseA到细胞悬液中在 水浴37°C孵育30min后，加入PI进行染色，室温下避光反应30min，在流式细胞仪上检测细 胞周期的变化。图2为1，3-双苯并咪唑苯银（I)配合物作用于H印-G2细胞48h后的流式 凋亡图。
[0042] 表41，3-双苯并咪唑苯银（I)配合物作用于H印-G2细胞48h后的流式凋亡率
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