给药，正常对照组：生理盐水；模型对照组： 生理盐水；实验组1:实施例1制得的复合中药水煎液；实验组2 :实施例2制得的复合中药 水煎液；实验组3:实施例3制得的复合中药水煎液，给药容量均为10mL/kg。首次给药lh、 2h、3h、4h后各测量体温1次，计算与致热4h后体温之差，结果见表1。结果显示，与正常 对照组比较，模型对照组升温极显著，说明造模成功；与模型对照组比较，首次给药后各个 时间段，三个实验组的解热作用显著（P< 0.05)，其中，以实验组1的作用最为显著。说明 本发明所述的中药组合物具有明显的解热作用。
[0031] 表1复合中药水煎液对干酵母致热大鼠体温的解热作用
[0032]
[0033] 备注，与正常对照组比较广P<0. 01 ;与模型对照组比较，#P< 0. 05,##P< 0. 01
[0034] 二、体外抑菌实验
[0035] 将实施例1制备的复合中药水煎液分别稀释为1. 0g/mL、0. 8g/mL、0. 6g/mL、0. 4g/ mL、0. 2g/mL五个梯度，进行体外药敏试验。将保存的5株不同供试大肠杆菌菌株分别在麦 康凯琼脂平板上划线接种、培养，然后挑取典型菌落至MH肉汤中培养，并调整浓度为0. 5个 麦氏浓度，灭菌棉签蘸取菌液均匀涂布MH琼脂，再将灭菌的牛津杯置于涂布菌液的MH琼脂 上，轻压，每杯加200 y L不同浓度的稀释药液，置37°C培养箱培养18-24h后计量抑菌圈直 径，抑菌圈直径> 8mm (牛津杯外径）判为有效，读取数值，抑菌圈直径< 8mm判为0,本实 验的结果如下表2所示。体外抑菌实验表明，本复合中药水煎液对不同大肠杆菌分离株均 有明显的抑菌效果，且抑菌效果与药液浓度正相关，当药液浓度多〇. 8g/mL时，有效率可达 100%。说明本发明所述的中药组合物具有明显的抑菌作用。
[0036] 表2复合中药水煎液对不同大肠杆菌分离株抑菌圈直径
[0037]
[0038] 三、体外抗鸭黄病毒实验
[0039] 用细胞维持液将实施例4制得的复合中药注射液分别稀释为1. 0g/mL、0. 8g/mL、 0. 6g/mL、0. 4g/mL、0. 2g/mL五个梯度，按如下两种方式分别加入到鸡胚成纤维细胞（CEF) 单层细胞中：其中，A组-先加药物后接种病毒：每孔加入不同浓度的药液100yL，培养4h 后再各加入l〇〇TCID5。鸭黄病毒100yL;B组-先接种病毒后加药物：将100TCID5。鸭黄病 毒100 yL加入到CEF单层中，培养2h后加入各浓度药液，每孔100 yL。以上每种药物浓 度均重复4孔，同时设立细胞对照组（只加细胞维持液）与病毒对照组（只加病毒液），置 37°C、5% 0)2培养箱继续培养68~72小时，病毒对照出现75%左右的病变时，利用四甲基 偶氮唑蓝法（MTT法）测定A 57。值，实验测定结果见表3。测定结果显示，A组中加有不同浓 度复合中药注射液（〇. 4~1. Og/mL)的细胞A57。值均显著大于病毒对照组（P < 0. 05)，说 明先加复合中药注射液后接种病毒时高浓度复合中药注射液对黄病毒感染CEF有较好的 抑制作用。B组中加有不同浓度复合中药注射液（0.4~1. Og/mL)的细胞A57。值显著大于 病毒对照组（P < 0. 05)，说明先加病毒后加复合中药注射液时，高浓度的复合中药注射液 有明显抑制鸭黄病毒感染CEF的作用。由此可见，本发明所述的中药组合物可用于防治鸭 黄病毒病。
[0040]表3不同组别的A57。值[0041 ]
[0042] 四、体内治疗鸭黄病毒病实验
[0043] 广东省惠州市沥林镇某蛋鸭养殖场，存栏220天龄蛋鸭约5000只，产蛋率为92%。 由于台风导致持续下雨，产蛋率、采食量突然下降。
[0044] 临床症状：鸭群表现为急性发热，减食，产蛋减少，腹泻，瘫痪。发病初期，采食减 少，发病高峰时停止采食，持续7~8天后采食才逐渐增加，之后产蛋量急剧下降，5天内从 92 %降至22 %。发病后鸭体温升高至42~43 °C，精神沉郁，不愿活动，排绿色或白绿色稀 粪，后期个别病鸭翅膀下垂，两脚瘫痪、向后伸展。两周内蛋鸭死亡率达到4.8% (240只）。
[0045] 病理变化：可见典型病理变化：卵泡变性、畸开$，卵泡膜充血、出血；心脏表面有大 量出血点，心肌出现条索状出血和淤血斑；肝脏、脾脏显著肿大，表面有较多点状出血；小 肠和泄殖腔呈弥散性点状出血，胰脏表面有出血点。
[0046] 病原PCR诊断：无菌采集鸭的肝脏、出血严重的卵泡，按照组织重量1:4加入灭菌 PBS，反复冻融3次后8000r/min离心5min，上清液用0. 22 y m的过滤器除菌，经lOOOOr/ min(4°C )离心10min去除杂质后，收集上清液参照Trizol reagent说明书操作提取病 毒RNA，最后每250 yL尿囊液的病毒RNA用5yL DEPC水溶解。PCR诊断反应采用一步 法RT-PCR检测试剂盒进行，预期扩增DNA片段长度为750bp，RT-PCR反应体系为：2 X one step buffer 25 yUPrimeScript Onestep Enzyme Mixx2yL，上、下游引物Pl(5'_cggctgg atgggacacta-3'，20 y mol/y L)、P2(5'_atgagcagatggcgtttg_3'，20 y mol/y L)各0? 5 y L， RNA 5yL，加双蒸水至50yL。RT-PCR反应条件为：50°C反转录30min;94°C预变性3min; 94° C变性45s，56°C退火45s， 72°c延伸lmin，30个循环；72°C延伸lOmin ;4°C终止反应。 RT-PCR扩增产物经lOg/L琼脂糖凝胶电泳，于750bp处可见特异性扩增条带，与预期大小相 符，见图1，其中1为空白对照，2为鸭黄病毒阳性株，3为待检测病毒，M为DL2000Marker。
[0047] 根据临床症状、病理变化、RT-PCR诊断，确诊为鸭黄病毒感染。实施对比治疗方案 如下，将全场鸭群随机分为5组，实验1组1000只，实验2组1000只，实验3组1000只，阳 性对照组880只，空白对照组880只。实验1、2、3组第一周每天分别用本发明实施例1、2、 3制得的复合中药水煎液拌料和饮水，剂量为每500mL药液拌料100kg，同时每500mL药液 兑水200L清洁饮水供昼夜自由饮用，第二周开始药液剂量减半使用，连用2周。阳性对照 组使用"荆防败毒散"拌料，剂量为每500g "荆防败毒散"拌料100kg，连用2周。空白对照 组不使用任何药物。
[0048] 对比方案实施两周后统计结果如表4所示，表明本发明的复合中药水煎液和注射 液对鸭黄病毒病有显著的治疗效果。
[0049]
[0050] 以上所述，仅为本发明的较佳的具体实施例，但本发明的保护范围并不局限于此， 任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其 构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围内。
【主权项】
1. 一种用于防治鸭黄病毒病的中药组合物，其特征在于，包括以下组分：柴胡、知母、 石膏、黄连、贯叶连翘、栀子、黄芪、板蓝根、甘草、黄芩、白花蛇舌草、忍冬藤、叶下珠、败酱 草、鸡屎藤、淫羊藿、菟丝子和肉苁蓉。2. 根据权利要求1所述的用于防治鸭黄病毒病的中药组合物，其特征在于，包括以下 质量份数的组分：柴胡4-7份、知母2. 5-5份、石膏4-10份、黄连4-8份、贯叶连翘2. 5-6 份、栀子4-8份、黄芪3. 5-12份、板蓝根4-7份、甘草3-8份、黄芩4-10份、白花蛇舌草4-8 份、忍冬藤5-8份、叶下珠2. 5-5份、败酱草4-10份、鸡屎藤2. 5-7份、淫羊藿4-9份、菟丝 子4-6份、肉苁蓉2. 5-7份。3. 根据权利要求2所述的用于防治鸭黄病毒病的中药组合物，其特征在于，所述用于 防治鸭黄病毒病的中药组合物由以下质量份数的组分组成：柴胡5份、知母3份、石膏6份、 黄连6份、贯叶连翘5份、栀子6份、黄苗9份、板蓝根5份、甘草6份、黄苳8份、白花蛇舌 草6份、忍冬藤6份、叶下珠3份、败酱草6份、鸡屎藤5份、淫羊藿5份、菟丝子5份、肉苁 蓉5份。4. 根据权利要求1-3中任一项所述的用于防治鸭黄病毒病的中药组合物，其特征在 于，所述中药组合物为散剂、注射液或口服液。
【专利摘要】本发明提供一种用于防治鸭黄病毒病的中药组合物，包括柴胡、知母、石膏、黄连、贯叶连翘、栀子、黄芪、板蓝根、甘草、黄芩、白花蛇舌草、忍冬藤、叶下珠、败酱草、鸡屎藤、淫羊藿、菟丝子和肉苁蓉。配方配伍科学，同时具有退烧解热、清热解毒、抗菌抗毒、疏肝利胆、增强免疫、修复卵巢等多重显著功效，可有效防治鸭黄病毒病，加速蛋鸭生产性能的恢复，减少疫病导致的经济损失。
【IPC分类】A61K33/06, A61K36/8964, A61P31/14
【公开号】CN105168817
【申请号】
【发明人】田浪
【申请人】广东海大集团股份有限公司
【公开日】2015年12月23日
【申请日】2015年10月21日